17. Методика получения антибиотикограммы.

17. Методика получения антибиотикограммы.

Антибиотикограмма - это определение чувствительности возбудителя инфекционно-воспалительного заболевания к антимикробным препаратам. В связи с бурным развитием фармакологической промышленности арсенал лекарственных средств постоянно пополняется множеством новых антибактериальных препаратов, механизм действия которых на бактериальную клетку не всегда в полной мере известен каждому лечащему врачу. С другой стороны, бактериальная клетка, подвергшаяся воздействию антимикробного вещества, стремится защититься от него, и в процессе эволюции появляются антибиотикоустойчивые виды микроорганизмов. Таким образом, паспортизированный (установленный при разработке препарата) спектр антимикробной эффективности антибактериального вещества может существенно измениться в процессе его широкой эксплуатации. Использование малоэффективного препарата не только не приведет к желаемому результату, но и может нанести непоправимый вред больному: прогрессирование воспалительного процесса, нарушение биоценоза, дисбактериоз и др. Поэтому идеальным требованием для рациональной и целенаправленной терапии бактериальных инфекций является тщательная бактериологическая диагностика заболевания с выделением возбудителя и определением его чувствительности к назначаемому препарату. Для решения этой задачи используют биологические методы. При этом выделенный возбудитель засевается на твердую питательную среду - мясо-пептонный агар. Затем на поверхность агара помещаются специальные бумажные диски, пропитанные антибиотиками. Метод основан на том, что неэффективное антимикробное вещество не мешает свободному росту бактерий, в то время как эффективный препарат подавляет рост микроорганизмов. Методика достаточно специфична и позволяет выявить спектр чувствительности каждого из членов микробного сообщества, вызвавшего воспалительный процесс. Однако методика достаточно громоздка и длительна - окончательный результат врач обычно получает через 2-5 суток после взятия биологического материала от больного. В связи с этим получили распространение экспресс - методы определения чувствительности микрофлоры к антимикробным препаратам. В основном это индикаторные методы, основанные на изменении свойств индикатора (чаще всего его цвета) в присутствии различных веществ, появляющихся в процессе жизнедеятельности бактерий. Эти методы чаще выявляют эффективность антибактериальных веществ по отношению ко всей ассоциации микроорганизмов. Тем не менее, быстрота выполнения анализа позволяет объективно обосновать назначение антибактериальной терапии на ранних этапах лечения и своевременно корректировать ее в процессе лечения. Специальной подготовки больного для проведения анализа, как правило, не требуется. Исследованию подвергаются либо участки воспаленной ткани, либо смывы (мазки) с воспаленного участка, либо биологические жидкости, омывающие очаг воспаления (моча, мокрота, желчь, экссудат и др). Доступный материал (моча, мокрота и др. ) больной собирает самостоятельно в стерильную посуду. Забор материала (участки тканей, пунктат и др. ), требующий инвазивного вмешательства, проводится специалистом. В любом случае, если пациент начал прием каких-либо антибактериальных средств до взятия биоматериала на исследование, он должен сообщить об этом врачу, для полноты бактериологической картины и правильного выбора тактики лечения.

18. Постановка пробы Ядассона

Применяется в диагностических целях при герпетиформном дерматите Дюринга. Проба основана на повышенной чувствительности пациентов с этим заболеванием к йоду. Для ее проведения на кожу накладывают окклюзионную повязку с мазью, содержащей 50% калия йодида. Развитие через 24 часа (реже 48) эритемы, иногда с образованием пузырей (Рис. 10), свидетельствует о положительном результате пробы.

Рис. 10. Положительная проба Ядассона при дерматозе Дюринга.

При отрицательной окклюзионной пробе назначают 2-3 столовые ложки 3-5%-го раствора калия йодида внутрь. В случае обострения заболевания проба считается положительной.

19. Забор материала на акантолитические клетки, методика приготовления препаратов и их оценка.

Исследование содержимого пузырей или мазков - отпечат­ков со дна эрозий на акантолитические клетки Тцанка широко используется для дифференциальной диагностики вульгарной пузырчатки, пемфигоида и герпетиформного дерматоза Дюринга. Проводится следующим образом: покрыш­ку пузыря на коже больного необходимо срезать стерильны­ми ножницами, затем ватным тампоном удаляют содержащийся в нем экссудат и прикла­дывают ко дну эрозии стерильное предметное стекло. Можно вначале приложить стерильную ученическую стирательную резин­ку (ластик), а затем переносить материал на чистое пред­метное стекло. Приготовленный таким образом мазок-отпе­чаток фиксируют в течение одной минуты метиловым спир­том, высушивают при комнатной температуре и окрашивают по Романовскому-Гимзе. В препаратах, полученных от боль­ных пузырчаткой, обнаруживаются измененные кератиноциты (Рис. 11), называемые акантолитическими клетками.  

Рис. 11. Акантолитические клетки.

 Последние имеют характерное строение и следующие особенности: они меньше нормальных эпидермальных клеток, их ядра значи­тельно крупнее ядер шиповатых клеток, размер ядра непро­порционально увеличен по отношению к размеру всей клет­ки. Ядро, окруженное узким ободком цитоплазмы, часто за­нимает почти всю клетку. Цитоплазма акантолитических кле­ток базофильна, окрашивается неоднородно (по периферии клетки имеется зона более темного окрашивания в темно-си­ний цвет, а непосредственно вокруг ядра - в светло-голубой). В ядре нередко имеется два или больше крупных ядрышка, окрашенных в голубой цвет. В акантолитических клетках можно наблюдать картину митотического деления.