 |
Рисунок 5. Современные электронные гематологические счетчики позволяют автоматизировать процесс подсчета форменных элементов крови.
|
|
|
|
Рисунок 5. Современные электронные гематологические счетчики позволяют автоматизировать процесс подсчета форменных элементов крови.
К преимуществам гематологических анализаторов относят:
1) высокая производительность (до 100-120 проб в час),
2) небольшой объем крови для анализа (12-150 мкл),
3) анализ большого количества (десятки тысяч) клеток,
4) высокая точность и воспроизводимость,
5) оценка 18-30 и более параметров одновременно,
6) графическое представление результатов исследований в виде гистограмм или скатерограмм.
По степени сложности (по используемым методам) и по количеству определяемых показателей (в основном из-за способности дифференцировать лейкоциты) их разделяют на 3 основных класса.
I класс. Анализаторы определяют 18-20 параметров, включая расчетные показатели эритроцитов и тромбоцитов, гистограммы распределения лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов по объему. Лейкоциты частично дифференцируют на 3 популяции - лимфоциты, гранулоциты и средние клетки (представлены в основном моноцитами) (рис. 6).
Рисунок 6. Анализаторы I класса определяют эритроцитарные и тромбоцитарные показатели, строят гистограммы распределения клеток по объему. Лейкоциты (WBC) делят на лимфоциты (Lymph), гранулоциты (Gran) и моноциты (Mon).
В основе работы таких анализаторов используется кондуктометрический метод (или апертуро-импедансный). Принцип метода основан на учете импульсов, которые образуются при прохождении клеток крови через микроотверстие (апертуру) датчика. Каждое событие - прохождение клетки через этот узкий канал - сопровождается возрастанием омического сопротивления, что вызывает появление электрического импульса, количество и характер которого регистрируется прибором (рис. 7).
|
|
|
Рисунок. 7. Апертуро-импедансный метод Д. Калтера. Ведется подсчет числа и определение характера импульсов, возникающих при прохождении клеток через микроотверстие, по обе стороны которого расположены электроды.
Дифференцировка лейкоцитов кондуктометрическим методом на основные субпопуляции невозможна из-за близости их объемов. Для их разделения используются гемолитики, благодаря которым различные виды лейкоцитов изменяют свои размеры в разной степени (в зависимости от объема цитоплазмы, величины и формы ядра, присутствия гранул). На образующейся лейкограмме лимфоциты образуют зону малых объемов (35-90 фл), гранулоциты (нейтрофилы, базофилы и эозинофилы) - область больших объемов (120-400 фл). Между двумя пиками имеется зона так называемых " средних лейкоцитов" (90-120 фл), которую формируют моноциты.
II класс. Приборы проводят развернутый анализ крови с полной дифференцировкой лейкоцитов по 5 параметрам (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, моноциты и лимфоциты). Кроме того, предоставляют не только гистограммы распределения эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов по объему, но и скатерограммы (рис. 8 ).
Рисунок. 8. Скатерограмма.
Гематологические анализаторы III класса выполняют развернутый анализ крови с полной дифференцировкой лейкоцитов, а также подсчет и анализ ретикулоцитов. Кроме того, определяют редкие для периферической крови клетки (атипичные и большие клетки, ядросодержащие эритроциты и т. д. ). Это сложные аналитические системы, которые могут доукомплектовываться дополнительным блоком для автоматического приготовления и окраски мазков из заданных образцов крови.
Анализаторы II и III-го классов это высокотехнологические гематологические анализаторы, в работе которых используют комбинации разных методов. Эти приборы способны осуществлять классическую дифференцировку лейкоцитов на 5 видов (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, моноциты и лимфоциты), а также обнаруживать активированные лимфоциты, незрелые гранулоциты, бласты, эритробласты. Многочисленные их функции основаны на использовании новых технологий, значительно отличающихся у разных фирм-производителей.
|
|
|
Так, для дифференцировки лейкоцитов по 5-ти (5Diff) основным популяциям может использоваться цитофлюориметрическая техника; трехмерный анализ (VCS-технология), включающий компьютерный анализ клеток одновременно по объему (Volume), электропроводности (Conductivity) и дисперсии лазерного света (Scatter). Результаты дополнительно отображаются в виде лейкоцитарной скатерограммы, на которой каждый тип клеток имеет свою зону расположения. Также применяется технология мультипараметрического лазерного светорассеивания (MAPSS - Multi Angle Polarized Scatter Separation), разделяющая лейкоциты по интенсивности рассеивания клетками поляризованного лазерного луча под разными углами.
В ряде приборов используется принцип жидкостной цитохимии (измерение активности пероксидазы в лейкоцитах) в сочетании с другими методами (кондуктометрическим, гидродинамическим фокусированием и оптической абсорбцией). Сравнивая информацию, получаемую разными методами, компьютер прибора осуществляет дифференцировку лейкоцитов на 5 основных популяций, а также сигнализирует в виде флагов («сигналов тревоги») о присутствии в крови активированных лимфоцитов, незрелых гранулоцитов, бластов, эритробластов.
Добавление специальных флуоресцентных добавок позволяет расширить применение проточной цитометрии до возможности оценивать специфические популяции клеток. Флуоресцентные красители позволяют оценить соотношение ядро-плазма в каждой окрашенной клетке. Это используется для анализа тромбоцитов, зарождающихся эритроцитов и ретикулоцитов.
Во всех случаях обнаружения гематологическими анализаторами атипичных бластных клеток необходим строгий визуальный контроль окрашенных препаратов с соответствующими комментариями, так как морфологическая картина патологических клеток может существенно отличаться.
В выдаваемом анализатором бланке помимо результатов исследования пробы имеются диаграммы распределения ФЭК, а также интервал референтных значений для данного прибора, в соответствии с которыми проводится оценка полученных анализатором показателей.
|
|
|
