От оценки пользы и риска фармвеществ – к клиническим испытаниям

На протяжении всего опыта животные должны находиться под ежедневным наблюдением; отмечают потребление корма и воды, состояние волосяного покрова и слизистых оболочек, поведение. 1 раз в неделю животных взвешивают, регулярно (в опыте продолжительностью до 1 мес. – не менее 2 раз, при более длительном исследовании – не менее 3 раз) исследуют функциональное состояние сердечно-сосудистой, нервной, эндокринной, выделительной и пищеварительной систем, изучают морфологические и биохимические показатели крови. Методы исследования для оценки функционального состояния органов и систем организма выбирает исследователь: они должны быть современными и достаточно чувствительными, чтобы обеспечить регистрацию признаков возможного повреждающего действия изучаемого фармакологического вещества.

Все животные, погибшие в течение опыта, подвергаются вскрытию для установления характера повреждающего действия фармакологического вещества. После окончания введения фармакологического вещества проводят максимально полное обследование экспериментальных животных с помощью гематологических, биохимических и физиологических тестов. Часть животных из каждой группы забивают для патоморфологических исследований. Определяют массу органов и проводят их гистологическое исследование. За животными, оставленными в живых, проводят наблюдение в течение 1 месяца, после чего их обследуют в том же объеме, что и животных, забитых сразу после окончания введения фармакологического вещества. Для исследования динамики развития возможной интоксикации периодически определяют изучаемые параметры. Опыты на мелких лабораторных животных проводят с таким расчетом, чтобы полученные результаты можно было подвергнуть статистической обработке.

При оценке изменений, наблюдаемых у животных в хроническом токсикологическом эксперименте, необходимо исключить возможность влияния всех побочных факторов, не связанных с приемом препарата (заболевание животных, их питание, содержание и т. п.).

Могут возникнуть спонтанные изменения гемограмм, биохимических показателей и анатомических характеристик, которые следует учитывать при объяснении результатов. Не следует пренебрегать необъясненными данными, их надлежит подвергнуть дальнейшему изучению.

В ряде случаев в дополнение к указанным выше методам может потребоваться применение электронной микроскопии, гистохимических, авторадиографических и других методов исследования.

Патологические изменения, возникающие у животных после введения высоких доз фармакологического вещества, дают ценную информацию для характеристики его токсических свойств, однако эта информация должна быть подвергнута тщательному анализу и полученные результаты следует рассматривать в качестве предупреждения, а не противопоказания для клинических испытаний.

При решении вопроса о возможности передачи препарата на клиническое изучение исследователь должен учесть следующие факторы:

─ терапевтическую широту фармакологического вещества, т. е. соотношение минимальной токсической и терапевтической доз.

─ характер и обратимость выявленной патологии.

Заключение должно содержать суждения исследователей о степени опасного острого и хронического отравления на основании проведенных исследований, прогноз возможных побочных реакций и необходимых ограничений, при клинических испытаниях.

Результаты доклинических токсикологических исследований фармакологического вещества являются частью материалов, оцениваемых в аспекте пользы и риска при разрешении клинических испытаний.

При изучении аллергизирующих свойств оценивают способность лекарственного средства вызывать при введении в организм состояние повышенной чувствительности (гиперчувствительность, сенсибилизация), в основе которой лежат различные иммунопатологические механизмы.

Основная задача доклинического изучения влияния потенциальных лекарственных средств на иммунную систему состоит в том, чтобы в эксперименте на животных доказать или исключить возможность развития иммунотоксического действия, вызванного фармакологическим средством или его метаболитами.

Изучение репродуктивной токсичности – влияния лекарственных средств на генеративную функцию, развитие плода и потомства – является обязательной частью доклинического изучения их безопасности, поскольку по статистике до 80% женщин применяет какие-либо медикаменты во время беременности и около 3% новорожденных имеет родовые дефекты или аномалии развития. Этиология более чем половины врожденных дефектов у человека неизвестна. Определенную долю в этой части составляют лекарственные препараты. Лекарственное вещество может обладать эмбриотоксическим действием, оказывая прямое токсическое действие на плод после проникновения через плацентарный барьер либо воздействуя на плаценту или материнский организм. Эмбриотоксичность может проявляться как в повышении уровня эмбриональной гибели (эмбриолетальное действие), так и в виде анатомических, гистологических, цитологических, биохимических, нейрофизиологических отклонений от нормы (тератогенное действие), проявляющихся до или после рождения. Эмбрио- и фетотоксичность может проявляться в изменении массы тела, краниокаудального размера плода, задержке оссификации скелета (общая задержка развития), увеличении смертности. Могут наблюдаться различные отклонения в развитии потомства. Выявление в эксперименте такого рода отдаленных эффектов лекарств имеет большое практическое значение в антенатальной охране здоровья детей. Изучение воздействия фармакологических веществ на отдельных стадиях репродукции позволяет не только избежать отрицательных моментов, связанных с длительным введением препаратов, но и приблизить экспериментальные условия к клиническим.

Исследование мутагенности (действие вещества, способное вызвать изменения генетического аппарата клетки и приводящее к изменению наследственных свойств) предусматривает оценку способности лекарственных средств к индукции различных типов мутаций в зародышевых и соматических клетках и делает необходимым использование для оценки мутагенных свойств лекарств комплекса методов, выполняемых на разных тест-объектах. Это учет хромосомных аберраций или микроядер в клетках костного мозга млекопитающих и учет генных мутаций с использование в качестве тест-объекта микроорганизмов или дрозофилы.

При изучении канцерогенности (действие вещества, способное вызывать развитие опухолей) лекарственные средства подразделяют на принципиально новые, не имеющие химических аналогов, вновь синтезируемые в известном химическом ряду и воспроизводимые. Подходы к решению вопроса о тестировании на канцерогенность указанных групп различаются. Обязательному тестированию на канцерогенность в хроническом эксперименте должны подвергаться вновь синтезируемые лекарственные средства, рекомендуемые: в качестве профилактических, лечебно-косметических, репеллентных средств и контрацептивов; для применения в течение всей жизни длительными (более 15 дней) курсами; для использования без назначения врача среди широких слоев населения; для применения в детской практике, а также для лечения беременных женщин и кормящих матерей.

Основные задачи токсикологического исследования лекарственных средств:

─ описать токсическое действие лекарственного средства;

─ определить его зависимость от дозы, длительности и пути введения;

─ определить роль метаболитов;

─ выявить наиболее чувствительные органы-мишени и/или системы органов-мишеней;

─ выявить клинические признаки токсического действия;

─ определить параметры специфической токсичности лекарственного средства – его возможное аллергизирующее, иммунотоксическое, мутагенное, канцерогенное действие и репродуктивную токсичность;

─ определить опасность вещества для окружающей среды;

─ дать рекомендации по клиническому применению препарата.

При комплектовании групп экспериментальных животных для хронического токсикологического эксперимента надо иметь в виду необходимость исследования динамики возможного токсического эффекта исследуемого фармакологического вещества, для чего следует производить поэтапный забой животных в процессе введения препарата и в различные сроки после окончания его введения с целью выявления обратимости наблюдаемой патологии.

В Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (2005 г.) представлены материалы, охватывающие практически весь спектр экспериментальных методов, необходимые для качественного проведения доклинических исследований эффективности и безопасности новых перспективных лекарственных средств, но недостаточно полно даны характеристики видов и линий животных, а также технологий их использования.