 |
38)РПГА(п/дифтирийный). 39)РПГА(п/скарлатинозный). 40)РА по Асколи. 41)РН токсина антитоксином по Оухтерлони. 42)РСК Борде-Жангу
|
|
|
|
38)РПГА(п/дифтирийный)
Антитоксический противодифтерийный иммунитет проверяют с помощью РПГА с дифтерийным эритроцитарным диагностикумом (анатоксином).
Неимунными считаются лица с титром антитоксина менее 0, 03 МЕ/мг
Ингредиенты:
1. Испытуемая сыворотка, адсорбированная бараньими эритроцитами;
2. Эритроцтарный диагностикум;
3. Физиологический раствор;
4. Противодифтерийная контрольная сыворотка активностью 10 ME.
Постановка реакции:
1) Сыворотку разводят физиологическим раствором в 12 лунках от
1: 10 до 1: 20480(1: 40-1: 5120)
2) В каждую лунку добавляют по 1 капле диагностикума;
3) Противодифтерийную контрольную сыворотку разводят также от
1: 10 до 1: 20480 и вносят по 1 капле диагностикума;
4) Оставляют на 3 часа при комнатной температуре.
39)РПГА(п/скарлатинозный)
40)РА по Асколи
Реакция Асколи ставится для диагностики сибирской язвы с целью обнаружения антигена сибиреязвенных бацилл. Для постановки реакции преципитации необходимо иметь: преципитиноген — гаптен B. Antrachis (экстракт из тканей), преципитин (преципитирующая сибиреязвенная сыворотка) и физиологический раствор.
Приготовление термопреципитиногена.
1. 8 колбочку, содержащую 1 г измельчённой кожи или 1 мл культуры В. ап1Ьгас! 3, налить 10 мл физиологического раствора.
2. Колбу поместить в кипящую баню на 30-45 минут.
3. Просрильтровать через асбестнуюэату. Фильтрат должен быть совершенно прозрачен.
Для реакции преципитации фильтрат разводится в 100 раз и более.
Постановка реакции кольцепреципитации.
1) В преципитэционную пробирку наливается 0, 3 мл пре-ципитирующей сыворотки цельной или в разведении 1: 5, 1: 10.
2) По стенке пробирки осторожно наслаивается преципи-тиноген-
Реакция считается положительной, если на границе двух жидкостей образуется мутное кольцо выпадающего белка не позднее 5-15 минут.
|
|
|
При постановке реакции преципитации применяют следующие контроли:
а) антиген и физиологический раствор;
б) специфическая сыворотка и физ. раствор;
в) антиген и неспецифическая сыворотка.
Во всех контрольных пробирках помутнения не должно быть Для реакции преципитации пользуются специальными преципитационными пробирками высотой 40-60 мм и диаметром 4-5 мм, преципитация в узких пробирках наступает значительно скорее и проявляется более чётко, чем в обычных пробирках, их тщательно моют и высушивают, чтобы стекло их было совершенно прозрачным и сухим.
41)РН токсина антитоксином по Оухтерлони
Одна из разновидностей РП в геле (реакция Оухтерлони) позволяет определять токсигенность дифтерийной палочки с помощью антитоксической сыворотки. В чашку Петри с питательной средой помещают полоску фильтровальной бумаги, пропитанной антитоксической противодифтерийной сывороткой и засевают исследуемыми культурами в виде штрихов, перпендикулярных к полоске бумаги. Инкубируют при 37 ПС в течение суток. При наличии токсигенной культуры в месте взаимодействия токсина с антитоксином образуются линии преципитации.
Реакция преципитации в геле носит название иммунодиф-фузии. Часто форезом в геле — иммуноэлектрофорез. Принцип метода: исследуемый антиген фракционируют электрофорети-чески. полученные фракции анализируют методом двойной диффузии при помощи антисыворотки.
В чашку Петри с МПА накладывают полоску фильтровальной бумаги, пропитанной антитоксической дифтерийной сывороткой. По обеим сторонам бумаги засевают изучаемые культуры в виде штрихов и бляшек. В каждой чашке делают контрольный посев штамма PV-8. Через 24-48 часов инкубации в термостате при наличии у культуры токсина, последний диффундирует в агар. На месте встречи токсина с антитоксином образуются белые линии преципитата.
|
|
|
42)РСК Борде-Жангу
Реакция ставится для диагностики хронической гонореи с целью обнаружения антител к гонококку.
В РСК участвуют 2 системы: основная система — испытуемая сыворотка, антиген, комплемент и вспомогательная, индикаторная или гемолитическая система — гемолитическая сыворотка и эритроциты барана.
Если в первой системе образуются специфический комплекс антиген + антитело, то комплемент адсорбируется (соединяется с этим комплексом) и гемолиза во второй системе не происходит.
Для реакции требуется:
1. Испытуемая сыворотка, которая получается из крови, взятой пункцией локтевой вены больного. После свёртывания крови сыворотка отсасывается в отдельную пробирку и инакти-вируется 30 минут при 56 °С на водяной бане.
2. Антиген — взвесь убитых гонококков.
3. Эритроциты барана получают из стерильно взятой де-фибринированной крови. Их отмывают, центрифугируя 3 раза с новыми порциями физиологического раствора. В реакции используют 3 %-ю взвесь эритроцитов.
4. Гемолитическая сыворотка готовится заранее путём иммунизации кроликов эритроцитами барана. Перед употреблением производится титрование сыворотки.
5. Комплемент — свежая сыворотка морской свинки. Из сердца морской свинки шприцем насасывается кровь, после свёртывания отделяется сыворотка. Перед опытом вытитровы-вается рабочая доза комплемента. Для этого берут основное разведение комплемента 1: 10 и разливают его по пробиркам от 0. 1 до 0, 5, после чего объем в каждой пробирке доводят физиологическим раствором до 1, 5 мл.
Одновременно заготавливают гемолитическую систему -разведенная в тройном титре, гемолитическая сыворотка + 3 % взвесь эритроцитов барана. Оба ингредиента в разных объемах и выдерживают в термостате 30 минут (сенсибилизация смеси), после чего смесь добавляют по 1 мл в пробирки и помещают в термостат на 30 минут. Контролем служат 2 пробирки:
1. 1 мл гемолитической системы + 1, 5 мл физиологического раствора;
2. 0, 5 мл комплемента 1: 10 + 0, 5 мл взвеси эритроцитов + 1, 5 мл физиологического раствора.
|
|
|
Титром комплемента называется его минимальное количество, при котором ещё происходит гемолиз. Для постановки реакции берут рабочую дозу комплемента, увеличенную против титра на 20-25 %, т. е., обычно то количество комплемента, которое имеется в предпоследней пробирке с гемолизом. Увеличение дозы комплемента необходимо потому, что в реакции активность комплемента может оказаться несколько подавленной другими ингредиентами реакции (антиген, сыворотка).
|
|
|
