 |
43)РСК Вассермана. 44)РИТ-р. Иммобилизации бледной трепонемы.. 45) Опсоно-фагоцитарная реакция
|
|
|
|
43)РСК Вассермана
Ставится для диагностики сифилиса с целью обнаружения антител, а также для определения эффективности специфической терапии. Она основана на принципе реакции связывания комплемента Борде-Жангу. Существенным отличием реакции Вассермана является неспецифичность антигена: в качестве антигена употребляют липоидные экстракты из нормальных органов животных
Для постановки реакции Вассермана необходимо иметь сыворотку больного, диагностикумыперекрестнореагирующие антигены № 1, № 2, комплемент, гемолитическую сыворотку, эритроциты барана, физиологический раствор.
Диагностикум № 1 — специфический, трепонемный.
Диагностикум № 2 — неспецифический, кардиолипиновый антиген, которые представляют собой высокоочищенные экстракты бычьего сердца, имеющие постоянный химический состав липоидов. Липоиды, экстрагированные из сердца, по химическому составу близки к липоидам бледной трепонемы, поэтому, хотя и не являются специфическими, но фиксируют антитела против спирохеты.
Указанные антигены выпускаются централизованно и в реакцию употребляются разведёнными согласно титру, указанному на этикетке.
Одновременно с основным опытом ставят 2 контроля: с заведомо отрицательной и с заведомо положительной сыворотками.
Постановка основного опыта
Вначале в 4 пробирки разливается инактивированная и разведённая 1: 5 испытуемая сыворотка. Затем в 2 пробирки разливаются антигены (№ 1, № 2), в 3-ю пробирку — физиологический раствор. После этого во все пробирки добавляется рабочая доза комплемента. После смешивания ингредиентов штатив с пробирками помещается в термостат при 37 °С на 30 минут. После выдерживания в термостате во все пробирки добавляется гемолитическая система. Пробирки снова помещают в термостат на 2 часа, в затем оставляют при комнатной температуре. На следующий день отмечают результат Степень интенсивности реакции оценивается, четыре плюса (++++), три (+++) два (++) и один (+) — в зависимости от интенсивности окраски жидкости и величины осадка эритроцитов на дне. Полный гемолиз обозначается (-) минусом. При резком расхождении результатов с различными антигенами опыт повторяют с новой порцией крови.
|
|
|
44)РИТ-р. Иммобилизации бледной трепонемы.
Эту реакцию применяют как в диагностических целях, так и для распознавания ложноположительных результатов стандартных серологических реакций, особенно при скрытом сифилисе.
РИБТ заключается в том, что в присутствии иммобилизинов сыворотки больных сифилиса и активного комплемента бледные трепонемы теряют подвижность.
РИБТ ставят в стерильных боксах. В реакции участвуют испытуемая сыворотка, комплемент и антиген.
В РИБТ антигеном является взвесь бледных трепонем из яичка кролика в ранние сроки (7-8 суток после заражения) сифилитического орхита. Специальная среда взвеси сохраняет жизнеспособность бледных трепонем не менее суток. В РИБТ применяют комплемент морских свинок. РИБТ протекает в анаэробных условиях. Пробирки с ингредиентами помещают в микроанаэростат, из которого отсасывается атмосферный воздух и нагнетается газовая смесь (95 частей азота и 5 частей углекислого газа). Микроанаэростат с пробирками помещают в термостат (35°С) на 18-20 часов.
Параллельно с постановкой реакции производят контрольные исследования с положительной и отрицательной сывороткой крови, взятыми из предыдущего опыта.
Оценку результатов РИБТ производят после извлечения пробирок из термостата (т. е. через 18-20 часов опыта). Пастеровской пипеткой на предметное стекло наносят каплю содержимого пробирки, которую накрывают покровным стеклом и исследуют в темном поле микроскопа (объектив 40, окуляр 10). При иммобилизации до 20% бледных трепонем реакцию считают отрицательной, от 21 до 30% — сомнительной, от 31 до 50% слабоположительной, от 51 до 100% — положительной. Процент иммобилизации бледных трепонем определяют по специальной таблице.
|
|
|
45) Опсоно-фагоцитарная реакция
Механизм: усиление фагоцитоза микробных клеток под влиянием содружественного воздействия антител, иммунной сыворотки и комплемента.
Компоненты реакции:
1) антиген - суточная микробная культура;
2) испытуемая сыворотка больного;
3) комплемент - свежая сыворотка морской свинки;
4) фагоциты - лейкоцитарная взвесь.
Опсонины - это антитела, которые содержатся в нормальных и иммунных сыворотках и подготавливают микробы к фагоцитозу.
Реакция ставится в специальных пробирках при t=37°» минут. Затем из каждой пробирки готовят мазки, считают по, 100 фагоцитов и определяют число фагоцитированныхмикрсконтроле.
Опсонический индекс = фагоцитарный показате. сыворотки/фагоцитарный показатель нормальной сывороп
Чем выше опсонический индекс (должен быть > 1), исследуемая сыворотка, и, следовательно, тем выше им! бруцеллезе).
Применяется для олределения опсонинов — антител, стимулирующих фагоцитарную активность лейкоцитов, т. е. серодиагностики инфекций, например, бруцеллёза.
Усиление фагоцитоза происходит за счёт присоединения опсонинов с активными центрами (Рав-фрагмент) к детерминантам бактерий, а затем с помощью Рс-фрагментов к Рс-рецепторам фагоцитов. В нормальной сыворотке содержится небольшое количество опсонинов, которые проявляют свое действие в присутствии комплемента. В иммунной сыворотке опсонинов больше, и их активность в меньшей степени зависит от комплемента.
Компоненты:
- Исследуемая сыворотка
- Нормальная сыворотка
- Суточная микробная культура (напр., стафилококковая)
- Фагоциты — взвесь нейтрофилов
Инкубация при 37 °С в течение 30 минут. Из каждой пробирки готовят мазки, окрашивают по Романовскому-Гимзе и считают под микроскопом количество микробов, в 100 и более нейгрофилах, т. е. определяют фагоцитарный показатель.
Фагоцитарный показатель — количество микробов, поглощенных одним нейтрофилом.
Опсонический индекс фагоцитарный показатель иммунной (исследуемой) сыворотки / фагоцитарный показатель нормальной сыворотки.
Чем выше опсонический индекс (должен быть > 1), тем выше иммунитет.
Опсоно-фагоцитарный индекс — это цифровой показатель = количество фагоцитов х оценка фагоцитоза (в зависимости от количества поглощенных микробов). Максимальный показатель -75.
|
|
|
