 |
35)РА Вейгля. 36) РА Райта. 37)РА Видаля
|
|
|
|
35)РА Вейгля
Вейгля реакция — макроскопическая реакция агглютинации, применявшаяся ранее для диагностики сыпного тифа. Обнаруживается на 4—6-й день заболевания и достигает максимума ко времени падения температуры, причем высота титров соответствует тяжести заболевания. К сыворотке больных добавляют антиген, выделенный из риккетсий Провацека, культивированных в кишечнике зараженных вшей. Реакция Вейгля положительна при темном осадке на дне пробирки с прозрачной жидкостью над ним; при отрицательной реакции Вейгля жидкость остается мутной. В настоящее время реакция Вейгля не применяется.
36) РА Райта
Реакция агглютинации является одним из основных методов диагностики бруцеллеза у людей. Наибольшую диагностическую ценность реакция агглютинации представляет при острой и подострой форме бруцеллеза.
Техника постановки реакции.
В пробирки разливают физиологический раствор: в первую - 2, 4 мл, в остальные по 0, 5 мл. В первую пробирку добавляют 0, 1 мл исследуемой сыворотки, перемешивают, переносят 0, 5 мл в третью пробирку и т. д. Из последней пробирки 0, 5 мл смеси выливают, в результате получают в каждой пробирке по 0, 5 мл следующих разведений 1: 25, 1: 50, 1: 100, 1: 200 и т. д. Из первой пробирки 0, 5 мл переносят в чистую пробирку и добавляют туда 0, 5 мл физиологического раствора (контроль сыворотки в разведении 1: 50), а 1, 0 мл выливают.
Диагностикум разводят физиологическим раствором согласно прилагаемому к нему наставлению и добавляют по 0, 5 мл во все пробирки, кроме контроля. После добавления диагностикума разведение сыворотки соответственно удваивается, т. е. получается 1: 50, 1: 100 и т. д. Сыворотки с антигеном смешивают путем встряхивания и помещают в термостат (37 °C ) на 18 - 20 часов. После инкубации пробирки выдерживают 1 - 2 часа при комнатнойтемпературе и проводят учет реакции.
|
|
|
Учет реакции проводят по стандарту мутности в зависимости от степени осаждения агглютината и просветления жидкости.
Для приготовления стандарта мутности антиген, применяемый для постановки РА, еще раз разводят в два раза.
Дальнейшее разведение антигена физиологическим раствором производят по схеме 1.
РАЗВЕДЕНИЕ АНТИГЕНА ФИЗИОЛОГИЧЕСКИМ РАСТВОРОМ
| Степень агглютинации | |||||
| ++++ | +++ | ++ | + | ||
| Антиген, разведенный 1: 2 | 0, 25 | 0, 5 | 0, 75 | 1, 0 | |
| Физ. раствор | 1, 0 | 0, 75 | 0, 5 | 0, 25 | |
| % просветления | |||||
Стандарт мутности готовят каждый раз при постановке РА и ставят в термостат одновременно с основной реакцией.
Титром сыворотки является максимальное ее разведение, дающее 50% агглютинации, - просветление, оцениваемое на 2+.
При применении стандартизированного диагностикума титры исследуемых сывороток соответствуют количеству международных единиц антител (ме/мл).
Так, титры 1: 50, 1: 100, 1: 200 и т. д. соответственно равны 50, 100, 200 и т. д. ме/мл.
При диагностической оценке РА рекомендуется следующая схема:
- титр сыворотки 1: 100 (100 ме/мл) - результат положительный;
- титр сыворотки 1: 200 (200 ме/мл) - результат положительный;
- титр сыворотки 1: 400 (400 ме/мл) - результат резко положительный.
Диагностическим титром принято считать реакцию агглютинации не менее 2+ при разведении сыворотки 1: 100 и выше.
Недостатком реакции агглютинации признают также необходимость частых кровопусканий у животных, что создаёт почти непреодолимые трудности при реализации этого метода в крупных хозяйствах, в особенности У овец и свиней. У последних неудобство усугубляется тем, что изъятие крови производят из хвоста.
37)РА Видаля
Реакция агглютинации широко применяется в лабораторной практике для серодиагностики. Реакция агглютинации протекает в две фазы:
|
|
|
1 фаза - соединение антигена с антителом;
2 фаза - адсорбция на комплексе антиген+антителофизиологического
раствора и выпадение осадка двух видов:
а) крупнохлопчатого - у жгутиковых бактерий (Н-агглютинация);
б) мелкозернистого - агглютинат образуется в виде компактных зерен
(О-агглютинация).
Компоненты реакции Видаля:
1) испытуемая сыворотка в разведениях 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800,
1: 1600;
2) диагностикумы - взвесь убитых сальмонелл трех видов: брюшного
тифа, паратифа А и В;
3) физиологический раствор.
Цель реакции: определение титра антител в испытуемой сыворотке.
Реакция агглютинации должна сопровождаться контролем антигена и сыворотки. Реакция ставится в трех рядах. Учет результатов проводят через 18-20 часов.
Степень положительной реакции агглютинации обозначается плюсами: + + + + полная агглютинация + + + неполная агглютинация + + слабая агглютинация - осадка нет (отрицательная реакция) б) реакция Вейгля
Ставится с 8 дня болезни при сыпном тифе и болезни Брилля-Цинссера для обнаружения антител в испытуемой сыворотке крови. Компоненты реакции Вейгля:
1) испытуемая сыворотка в разведениях 1: 50, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800;
2) риккетсиозныйдиагностикум - взвесь убитых риккетсий Провачека
3) физиологический раствор
Реакция применяется при рецидивах эпидемического сыпного тифа (болезни Брилля-Цинссера), обусловленных реактивацией риккетсий Провачека в сыпнотифозных гранулемах.
Специфические антитела (агглютинины) обнаруживаются в крови больного со 2-ой недели болезни. Для постановки реакции Видаля берут шприцем кровь из локтевой вены в количестве 2-3 мл и дают ей свернуться. Образовавшийся сгусток отделяют, а сыворотку отсасывают в чистую пробирку и готовят из неё 3 ряда разведений сыворотки больного от 1: 100 до 1: 800 следующим образом: во все пробирки разливают по 1 мл (20 капель) физиологического раствора; затем этой же пипеткой наливают 1 мл сыворотки, разведенной 1: 50 в первую пробирку, перемешивают с физиологическим раствором, таким образом получают разведение 1: 100, Из этой пробирки переносят 1 мл сыворотки в следующую пробирку, перемешивают с физиологическим раствором, получают разведение 1: 200 также получают разведения 1: 400 и 1: 800 в каждом из трёх рядов. Реакция агглютинации Видзля ведётся в объеме 1 мл жидкости, поэтому из последней пробирки после смешения жидкости удаляют 1 мл. В отдельную контрольную пробирку наливают 1 мл физиологического раствора без сыворотки. Этот контроль ставится для проверки возможности спонтанной агглютинации антигена (диагностикума) а каждом ряду {контроль антигена). Во все пробирки каждого ряда, соответствующего надписям, закапывают по 2 капли диагностикума. Штатив ставят в термостат на 2 часа при 37 «С и затем на сутки оставляют при комнатной температуре. Учёт реакции производится на следующем занятии.
|
|
|
В сыворотках больных могут быть как специфические, так и групповые антитела, которые различаются по высоте титра. Специфическая реакция агглютинации идёт обычно до более высокого титра. Реакция считается положительной, если агглютинация произошла хотя бы в первой пробирке с разведением 1: 200. Обычно она наступает в больших разведениях. Если наблюдается групповая агглютинация с двумя или тремя антигенами, то возбудителем болезни считают того микроба, с которым произошла агглютинация в наиболее высоком разведении сыворотки.
Недостатки реакции:
1. реакция положительна, начиная со 2-ой недели заболевания;
2. реакция положительна в 3-х случаях: у больных (инфекционная реакция), у переболевших (анамнестическая) и у вакцинированных (прививочная).
Для дифференциации реакций прибегают к повторной постановке ее через 5-6 дней. У больных отличается резкое нарастание титра антител При прививочной и анамнестической реакциях титр антител не изменится.
Реакцию Видаля можно поставить одновременно с Н- и О-антигенами бактерий брюшного тифа, что помогает дифференцировать инфекционную реакцию от прививочной, так как у привитых обнаруживаются только Н-антитела, О-агглютинин в высоком титре отмечается только в разгар болезни.
|
|
|
