 |
Работа в лаборатории
|
|
|
|
Объекты для изучения основных микроскопических диагностических при-знаков: листья ландыша, сенны, мяты перечной, крапивы; кора дуба или калины; подземные органы — корни валерианы, корни девясила, корневища аира; семена и плоды — лен, анис. Объекты могут меняться по указанию пре-подавателя.
Задание 1. Приготовьте препарат листа с поверхности (один или два объекта по указанию преподавателя). Изучите под микроскопом вначале при малом увеличении (далее — м/у), а затем при большом увеличении (далее — б/у) микро
Рис. 1. 1. Типы устьиц:
а — аномоцитный тип, устьица
окружает большое количество
клеток, которые не отличаются от
остальных клеток эпидермы;
б — анизоцитный тип, устьица
окружают три или четыре около-
устьичные клетки, одна из кото-
рых значительно меньше осталь-
ных;
в — диацитный тип, устьица
окружены двумя околоустьичны-
ми клетками, устьичная щель на-
ходится под прямым углом к об-
щей стенке;
г — парацитный тип, устьица окружены двумя околоустьичны-ми клетками, у которых оси па-раллельны оси замыкающих кле-ток и устьичной щели
| Микроскопический анализ ЛРС | 3 5 | |
препараты листьев. Последовательно в каждом препарате изучите эпидерму. Отметьте форму эпидермальных клеток, тип устьичного аппарата (рис. 1. 1), харак тер трихом (волоски, железки), наличие и форму кристаллических включений, ме ханических тканей, различных вместилищ, млечников, секреторных каналов
и другие диагностические признаки листьев по схеме 13, с. 442. Сравните вы явленные диагностические признаки с описанием раздела «Микроскопия» в частной фармакопейной статье ГФ XI, сделайте вывод о подлинности объекта исследования. Запишите русское и латинское название анализируемого сырья. Зарисуйте в рабочем журнале и обозначьте найденные вами диагностические признаки.
|
|
|
Задание 2. Изучите под микроскопом вначале при м/у, а затем при б/у фиксированный препарат поперечного среза коры. Изучите основные диагностиче ские признаки коры по схеме 14, стр. 444. Обратите внимание на характер и соот ношение первичной и вторичной коры, механические элементы, кристаллические включения кальция оксалата. Сравните обнаруженные вами диагностические при знаки с описанием раздела «Микроскопия» в частной фармакопейной статье ГФ XI, сделайте вывод о подлинности объекта исследования. Запишите русское и ла тинское названия анализируемого сырья. Зарисуйте в рабочем журнале строе ние коры и обозначьте выявленные вами диагностические признаки.
Задание 3. Приготовьте поперечный срез корня или корневища (по указанию преподавателя). Изучите под микроскопом при м/у, а затем при б/у приго товленный вами срез и фиксированные микропрепараты стандартных образцов корней или корневищ. Последовательно в каждом препарате изучите строение (первичное или вторичное), наличие и характер покровной и механической ткани, проводящих пучков, наличие и форму кристаллических включений, секреторных структур (вместилища, млечники, секреторные клетки и др. ) по схеме 15, с. 444. Сравните обнаруженные вами диагностические признаки с описанием раздела «Микроскопия» в частной фармакопейной статье ГФ XI, сделайте вывод о подлин ности объекта исследования. Запишите русское и латинское названия анализи руемого сырья. Зарисуйте в рабочем журнале строение образца анализируемо го сырья по указанию преподавателя и обозначьте выявленные вами диагности ческие признаки.
Задание 4. Изучите под микроскопом вначале при м/у, а затем при б/у фиксированные микропрепараты поперечных срезов семян льна и плодов фенхеля.
|
|
|
В каждом препарате изучите строение околоплодника, характер эпидермы, форму клеток паренхимы, наличие и форму трихом, кристаллических включений, секре торных структур (вместилища, млечники, секреторные клетки и др. ). Сравните об наруженные вами диагностические признаки с описанием раздела «Микроско пия» в частной фармакопейной статье ГФ XI, сделайте вывод о подлинности объекта исследования. Запишите русское и латинское названия анализируемого сырья. Зарисуйте в рабочем журнале строение одного из образцов анализируемого сырья и обозначьте выявленные вами диагностические признаки.
Задание 5. Проведите гистохимические реакции обнаружения БАВ в ЛРСодним из методов.
Объекты для проведения гистохимических реакций: корни алтея, семена льна, корни одуванчика или девясила, корневище аира, кора крушины, кора дуба или калины.
3 6 Тема 1. Определение подлинности растительного сырья
Методика. 1. Поперечный срез или порошок сухого сырья помещают на предметное стекло, прибавляют один из реактивов и накрывают покровным стеклом. 2. Препарат помещают на предметное стекло, накрывают его по-кровным стеклом, а реактив капают рядом с покровным стеклом. Затем под-носят фильтровальную бумагу к противоположному углу стекла. При этом жидкость засасывается под стекло, а элементы клеток или клеточное содер-жимое вступает в химическое взаимодействие с реактивом. При использо-вании второго метода под микроскопом можно наблюдать за ходом реакции.
Природу клеточной оболочки можно установить реакциями на целлюло-зу и на лигнин (одревеснение).
Опыты 1—4. Целлюлоза (клетчатка). Поперечный срез или порошок (со-скоб) сухого сырья помещают на предметное стекло и прибавляют один из следующих реактивов:
а) хлор-цинк-йод — окрашивает клетчатку в сине-фиолетовый цвет; проб-ка и кутикула могут принимать окраску от желтой до коричневой;
б) йод с кислотой серной — окрашивает целлюлозу в синий цвет; окрас-ка интенсивнее, когда в клеточной оболочке больше целлюлозы и меньше других компонентов (лигнина, кутиноподобных веществ и др. );
|
|
|
в) аммиачный раствор меди (II) оксида — под его влиянием клетчатка медленно разбухает и растворяется, кутикула остается нерастворенной;
г) раствор Люголя (0, 5 %-ный раствор йода в 1 %-ном растворе калия йодида) — окрашивает целлюлозу в желтый цвет.
Опыт 5. Одревесневшие или лигнифицированные клеточные стенки. Срез корня алтея помещают на предметное стекло в 1 %-ный спиртовый раствор флороглюцина. Реактив удаляют фильтровальной бумагой, а на срез наносят каплю кислоты хлористоводородной концентрированной и через 1 мин при-бавляют каплю глицерина. Срез накрывают покровным стеклом и изучают под микроскопом при м/у. Одревесневшие оболочки клеток приобретают вишневое окрашивание.
Опыт 6. Крахмал. Поперечный срез корня алтея помещают на предмет-ное стекло и добавляют 1—2 капли раствора Люголя.
Крахмальные зерна окрашиваются в сине-фиолетовый цвет. Для опреде-ления формы, типа и размеров крахмальных зерен препарат готовят в воде или 30 %-ном растворе глицерина.
Опыты 7—9. Слизь. Поперечный срез корня алтея или порошок семян льна помещают на предметное стекло и прибавляют один из перечисленных ниже реактивов.
Реакция с метиленовым синим. Срез помещают на несколько минут в спир-товый раствор метиленового синего (1: 5000), затем переносят в глицерин. Слизь окрашивается в голубой цвет.
С меди сульфатом и щелочью. Срез помещают на 5—10 мин в насыщен-ный раствор меди сульфата, промывают водой и переносят в 50 %-ный ра-створ калия гидроксида. Слизь окрашивается в голубой цвет (растения сем. мальвовых) или в зеленый (растения сем. лилейных), что указывает на раз-личие в химическом составе слизи.
Реакция с тушью. Порошок сырья помещают на предметное стекло в каплю свежеприготовленного раствора туши (1: 10) и перемешивают иголкой. На темно-сером фоне выделяются беловатые клетки со слизью, не окрашенные тушью (слизь препятствует проникновению туши).
Опыт 10. Инулин. Реакция Молиша является общей на углеводы, но ею пользуются для обнаружения инулина в отсутствие крахмала (в основном
|
|
|
у растений семейства сложноцветных). Обработка микропрепарата спиртом
| Микроскопический анализ ЛРС | 3 7 | |
усиливает формирование сферокристаллов инулина. Поперечный срез корня одуванчика или девясила помещают в 1—2 капли раствора α -нафтола (или тимола) и вводят 1 каплю кислоты серной концентрированной; появляется розово-фиолетовое окрашивание (α -нафтол) или карминово-красное (ти-мол). Крахмал вступает в указанные реакции, поэтому его присутствие надо исключить, проведя предварительно реакцию с йодом.
Опыт 11. Эфирное масло. Поперечный срез аира помещают на 2—3 мин
в раствор судана III, а затем просматривают в воде или 30 %-ном растворе глицерина. Клетки, содержащие эфирное масло, окрашиваются в зеленый цвет.
Опыт 12. Жирное масло. Срез семян льна помещают на 2—3 мин в рас-твор судана III, затем реактив удаляют фильтровальной бумагой, а срез про-мывают 50 %-ным спиртом и переносят в глицерин. Капельки жирного масла окрашиваются в оранжево-красный цвет.
Опыт 13. Гидроксиантрахиноны. Поперечный срез коры крушины поме-щают на предметное стекло в каплю 5 %-ного раствора натрия гидроксида или аммония гидроксида, прибавляют каплю глицерина, накрывают покров-ным стеклом и наблюдают под микроскопом красное или фиолетово-крас-ное окрашивание тканей, в которых локализуются антраценпроизводные.
Опыт 14. Дубильные вещества. Поперечный срез коры дуба или ко-ры калины помещают в каплю 1 %-ного раствора железа (III) хлорида или 1 %-ного раствора железоаммониевых квасцов, реактив удаляют фильтро-вальной бумагой, на предметное стекло наносят каплю воды, глицерина или хлоралгидрата, накрывают покровным стеклом и наблюдают окрашивание препарата под микроскопом. Ткани, содержащие дубильные вещества, окра-шиваются в черно-синий или черно-зеленый цвет.
? 
|
|
|
