 |
Общие требования к фармакогностическому анализу
|
|
|
|
Отбор проб для анализа. Объективность заключения о подлин-ности и доброкачественности ЛРС зависит от правильного отбора пробы из общей партии сырья. Последовательность операций изложена в общей фар-макопейной статье «Правила приемки лекарственного растительного сырья
и методы отбора проб для анализа» (ГФ ХI, вып. 1, стр. 267) и является составной частью раздела ГФ ХI «Методы анализа лекарственного раститель-ного сырья».
NB! Необходимо строго соблюдать все правила взятия средней пробы, предназначенной для фитохимического анализа, чтобы не нарушить естественного соотношения всех частей сырья.
Макроскопический анализ в части идентификации ЛРС по внешнему виду изложен в семи групповых статьях ГФ ХI, где определены основные диагно-стические признаки для различных морфологических групп сырья (листья, цветки и др. ).
Микроскопический анализ. Подготовка образцов и техника выполнения микроскопического анализа изложены в соответствующей теме лаборатор-
1 6 Введение
ного занятия (стр. 30) в соответствии с общей статьей ГФ ХI «Техника мик-роскопического и микрохимического исследования лекарственного расти-тельного сырья».
Измерение объектов в микроскопическом анализе. Для измерения величи-ны малых объектов используют микроскопы с окулярным микрометром (рис. 1). Окулярный микрометр представляет собой круглую стеклянную пластинку со шкалой, имеющей длину 1 см и разделенной на 100 частей (позиция а). Оку-ляр-микрометр помещают внутрь окуляра на его диафрагму, для чего пред-варительно отвинчивают глазную линзу окуляра. В микроскоп виден не толь-ко объект, но и деления шкалы окуляр-микрометра.
|
|
|
Рис. 1. Окулярный микрометр и способ его калибровки
Для определения размера объекта в микрометрах следует определить цену одного деления окуляр-микрометра и умножить его на соответствующие циф-ры, полученные при измерении объекта. Цена деления зависит от увеличения объектива и окуляра микроскопа. Поэтому для каждой комбинации объектива и окуляра определяют цену деления с помощью объективного микрометра.
Объективный микрометр представляет собой предметное стекло, на кото-ром выгравирован миллиметр, разделенный на 100 делений по 10 микромет-ров в каждом (позиция б ).
Для установления цены деления окуляр-микрометра объективный мик-рометр помещают на столик микроскопа и добиваются совмещения изобра-жения его шкалы с изображением шкалы окуляр-микрометра (позиция в). Затем совмещают какие-либо начальные штрихи обеих шкал и определяют, сколько делений объектив-микрометра приходится на известное число деле-ний окуляр-микрометра.
Например, 10 делений окуляр-микрометра показывают в точности 15 де-лений объектив-микрометра, что соответствует 150 мкм. Таким образом, цена одного деления окуляр-микрометра соответствует 15 мкм.
Устьичное число (Stomаta index) — процентное отношение устьиц к обще-му количеству клеток эпидермиса и трихом на единице площади. Методика определения изложена в теме «Антрахиноны» при анализе листьев сенны.
Точность измерения (ГФУ, раздел 1. 2).
Количество вещества и объемы реактивов, используемых в испытаниях, количественных определениях и методиках, должны быть измерены с доста-точной точностью. Требуемая степень точности обозначается числом деся-тичных знаков, приведенных в тексте. Определение точности показано на примерах, представленных в табл. 4:
|
|
|
Температура. Точность измерения температуры указывается аналогично точности измерения массы и объема.
| Фармакогностические методы анализа |
| 1 7 | ||
|
| ||||
| Значение рН. Требуемая точность величин |
| |||
| Т а б л и ц а 4 | ||||
| рН указывается в тех же пределах точности, | Определение точности измерения | |||
| как точность измерения массы и объема. | ||||
| Оборудование и аналитические операции. | ||||
| Стеклянная мерная посуда должна отвечать | ||||
| требованиям класса А международных стандар- | ||||
| тов (ISO). | ||||
| Аналитические операции, если нет других | ||||
указаний, осуществляются при температуре от 15 до 25 °С.
Сравнительные исследования проводят в пробирках из бесцветного про-зрачного нейтрального стекла с плоским основанием и внутренним диамет-ром 16 мм. Сравнивают одинаковые объемы веществ на белом (в случае необ-ходимости – черном) фоне. Испытания проводят в рассеянном свете.
Водяная баня. Если в тексте имеется ссылка на водяную баню, следует использовать кипящую водяную баню при температуре около 100 °С, если не указана специальная температура опыта. Можно использовать и другие спо-собы, если они гарантируют температуру, близкую, но не превышающую 100 °С (или другую указанную температуру).
Степень измельчения и сита. Проволочные сита, применяемые для просе-ивания измельченных лекарственных средств, в том числе и ЛРС, различают по номерам, выраженным в микрометрах, которые соответствуют номиналь-ному размеру отверстия. Сита делают из проволоки равномерного попереч-ного сечения (табл. 5).
Т а б л и ц а 5
Характеристика проволочных сит
Порошки различают по степени измельчения, выражаемой размером от-верстий (меша) сита в микрометрах, через которое порошок может прохо-дить. При описании порошков используют такие определения, как крупный, среднекрупный, среднемелкий, мелкий и очень мелкий порошки (табл. 6).
При характеристике измельченного ЛРС используют следующие опре-деления: крупноизмельченное сырье имеет размер частиц 4, 00 мм, средне-
|
|
|
1 8 Введение
Т а б л и ц а 6
Классификация порошков по размеру их частиц
* В скобках указан номер сита.
измельченное сырье проходит через сито с размером отверстий 2, 80 мм, мелкоизмельченное сырье имеет размер частиц менее 2, 00 мм.
NB! Измельчать навеску ЛРС следует полностью, без остатка. Отделение грубых, трудно измельчающихся элементов ведет к нарушению естест-венного соотношения отдельных частей растительного сырья.
Вычисление результатов. Результаты количественных определенийдолжны быть вычислены с точностью на один десятый знак больше, чем указано в АНД, и затем округлены следующим образом: если последняя под-считанная цифра 5 и более, то предшествующая цифра увеличивается на 1; если последняя цифра 4 или менее, предшествующая цифра остается без изменения.
Если при количественном определении требуется перерасчет на абсолют-но сухое сырье или оговорено какое-либо другое условие, то потерю в массе при воздушном высушивании сухого сырья определяют с помощью метода, описанного в ГФ ХI.
В ГФУ оговорено, что определение золы общей, золы сульфатной, рас-творимых в воде посторонних веществ, содержание влаги, экстрактивных веществ, эфирных масел, дубильных веществ, показателя горечи, гемолити-ческого индекса и количества действующих веществ следует вести на воз-душно-сухое сырье, которое не было специально высушено (если нет других указаний в монографии).
Потеря в массе при высушивании (влажность сырья). При определении потери в массе при высушивании, если не указано другое количество ве-щества, высушивают 1, 0 г вещества или 3—5 г ЛРС в предписанных условиях.
Постоянная масса. Выражение «высушить до постоянной массы» означа-ет, что процесс высушивания должен продолжаться до того момента, когда результаты двух последовательных взвешиваний будут отличаться не более чем на 0, 5 мг на 1 г вещества, взятого для определения; второе взвешивание производят после дополнительного высушивания в течение 1 ч в предписан-ных условиях. Выражение «прокалить до постоянной массы» имеет аналогич-ное значение.
|
|
|
Определение допустимых пределов. Указанные в АНД допустимые преде-лы числовых показателей получены в результате общей аналитической прак-тики; в них уже учтены обычные аналитические погрешности, допустимый разброс при производстве, а также ухудшение качества в процессе хранения
в пределах, которые считаются приемлемыми.
Приемлемые пределы устанавливают с использованием методов матема-тической статистики. Аналитические результаты, полученные от n последо-
| Фармакогностические методы анализа | 1 9 | |
вательных измерений, суммируют и далее определяют среднее арифметиче-ское и граничные значения доверительного интервала среднего результата.
Реактивы и растворы. Надежность результатов анализа зависит, в част-ности, от качества используемых реактивов. Реактивы, описанные в общей статье ГФУ «Реактивы», сопровождаются буквой Р. Подразумеваемая степень их чистоты — не ниже ч. д. а. (analytical grade).
Если для растворов не указан растворитель, то подразумевают водные растворы, приготовленные с использованием воды, которая отвечает требо-ваниям статьи «Вода очищенная». Под термином «дистиллированная» следует понимать «воду очищенную», полученную путем перегонки.
Под названием «этанол» следует понимать спирт этиловый абсолютный; под названием «эфир» — эфир диэтиловый.
Если указан «96 %-ный спирт» без уточнений, то имеется в виду спирт этиловый, который содержит приблизительно 96 процентов этанола по объему. Иные разведения обозначаются термином «спирт» с указанием количества спирта в процентах по объему.
Растворители — это химические соединения или их смеси, способные рас-творять разные вещества и образовывать с ними однородные системы — растворы.
К неорганическим растворителям относят воду очищенную и растворы
в воде минеральных и органических кислот, их солей разной концентрации, сжиженные газы (CO2, фреон).
К органическим растворителям относятся: углеводороды (гексан, эфир петролейный, толуол и др. ); хлоропроизводные углеводороды (метиленхло-рид, хлороформ, тетрахлорметан и др. ); спирты (метиловый, этиловый, про-пиловый, изопропиловый, бутиловый, их растворы в воде и др. ); эфиры простые (диэтиловый); эфиры сложные (этилформиат, этилацетат, бутил-ацетат и др. ); кетоны (ацетон, метилэтилкетон); нитропроизводные углево-дороды (нитробензол и др. ); кислоты (муравьиная, уксусная и др. ); амиды (формамид, диметилформамид, или ДМФА).
|
|
|
Многие растворители применяются для экстракции, очистки, хромато-графического, качественного и количественного анализа БАВ, перекристал-лизации природных соединений и пр. (табл. 7).
Основное требование к растворителю для извлечения действующих ве-ществ из ЛРС — это максимальная экстракция БАВ в сочетании с минималь-ным выделением сопутствующих веществ, что в значительной мере зависит от природы растворителя. По степени гидрофильности природные вещества разделяют на гидрофильные, которые растворимы в полярных растворителях, и гидрофобные — растворимые в неполярных растворителях. Вещества со сме-шанными свойствами растворимы в малополярных растворителях.
К гидрофильным природным соединениям относятся: соли алкалоидов, гликозиды, дубильные вещества, углеводы, соли тритерпеновых сапонинов, водорастворимые витамины. К гидрофобным — жирные и эфирные масла, смолы, жирорастворимые витамины. Смешанную группу составляют основа-ния алкалоидов, агликоны гликозидов, дубильные вещества (низкомолеку-лярные пищевые танины), стероидные и тритерпеновые сапонины, кумари-ны, фурокумарины, некоторые витамины.
Вещества полярные, с высоким значением диэлектрической постоянной, хорошо растворяются в полярных растворителях и наоборот. Самыми распро-страненными растворителями для выделения БАВ являются спиртоводные смеси. Их диэлектрическая постоянная может изменяться в больших преде-
лах, что позволяет таким смесям экстрагировать природные соединения с разной полярностью.
2 0 Введение
Т а б л и ц а 7
Растворители, часто применяемые в фитохимическом анализе
Способы выражения концентраций. В зависимости от контекста термин «процент» (%) может иметь одно из двух значений:
— массовая доля в процентах (мас. д., %) — количество граммов вещества
в 100 г конечного продукта;
— объемная доля в процентах (об. д., %) — число миллилитров вещества
в 100 мл конечного продукта.
Растворимость. Данные о растворимости означают приблизительную растворимость вещества при температуре 20 °С, если нет других указаний. Она выражается в частях, соответствующих миллилитрам (мл) растворите-ля, в которых растворим 1 г твердого вещества.
Иногда для обозначения растворимости вещества используются описа-тельные термины (табл. 8).
Температура. Температура выражается в градусах Цельсия (°С).
Кроме конкретных значений температуры используются следующие тер-мины:
в холодильнике — от 2 до 8 °С;
в холодном или прохладном месте — от 8 до 15 °С; при комнатной температуре — от 15—25 °С.
Сырье, которое хранится не при комнатной температуре, должно быть
маркировано соответствующим образом.
Хранение. Растительное сырье следует хранить в соответствии с требова-ниями, изложенными в общей статье ГФ ХI «Хранение лекарственного рас-тительного сырья».
Упаковка должна быть герметичной и не взаимодействовать ни физичес-ки, ни химически с растительным сырьем, чтобы не ухудшить его качество.
| Фармакогностические методы анализа | 2 1 | |
Т а б л и ц а 8
Термины, используемые для обозначения растворимости вещества (ГФУ, раздел 1. 4)
Используют следующие описательные термины для характеристики герме-тичности упаковки:
хорошо закрытая упаковка (тара, контейнер) должна защищать содержи-мое от внешних факторов и от потери сырья при обычных условиях обраще-ния, перевозки и хранения;
плотно укупоренная упаковка должна защищать содержимое от внешних факторов, от потери сырья, выцветания, поглощения влаги, испарения при обычных условиях обращения, перевозки и хранения. Эта тара допускает по-вторную плотную упаковку. Если необходимо открыть упаковку, то после этого следует снова обеспечить герметичность тары.
Защита от действия света. Растительное сырье требуется хранить в защи-щенном от света месте. Это достигается использованием упаковки (контей-нера), устойчивой к свету, защищающей содержимое от влияния света либо за счет свойств материала тары, либо благодаря специальному покрытию тары. Кроме того, упаковку можно поместить во внешний контейнер, что обеспечивает такую защиту.
Единицы измерения. Во всех методах используется метрическая система
и символы единиц измерения Международной системы единиц (СИ) — Systeme international d’Unites.
Используются следующие множительные приставки, которые указывают на десятичные кратные и дольные единицы СИ:
| мега | (М) | 106 | милли | (м) | 10–3 |
| кило | (к) | 103 | микро | (мк) | 10–6 |
| санти | (с) | 10–2 | нано | (н) | 10–9 |
Использование этих приставок показано на примере следующих единиц:
| Единицы длины: | Единицы массы: | ||
| метр | (м) | килограмм | (кг) |
| сантиметр | (см) | грамм | (г) |
| миллиметр | (мм) | миллиграмм | (мг) |
| микрометр | (мкм) | микрограмм | (мкг) |
| нанометр | (нм) | нанограмм | (нг) |
2 2 Введение
Единицы объема: литр (л) = 1000 см3, миллилитр (мл) = 1 см3, микро-литр (мкл) = 0, 001 см3.
Единицы давления: килопаскаль (кПа), паскаль (Па).
В некоторых случаях используется единица давления, не входящая в сис-тему СИ: миллиметр ртутного столба (мм рт. ст. ) ≈ 133 Па.
|
|
|
