 |
Модификация окраски Грам—Муха. Способ Нейссера. Метод Пью (окраска метахроматических зерен). Модификация Саватеева. Окраска по Романовскому-Гимза
|
|
|
|
Модификация окраски Грам—Муха
Мазок сначала окрашивают смесью из 3 частей карболового раствора фуксина с 1 частью метилвиолета по Муху (см. выше), затем продолжают окраску по оригинальной прописи.
Микроскопическая картина: палочки — красного цвета, зерна — темно-фиолетовые.
Способ Нейссера
(Используется для окраски метахроматических зерен — волютина).
| Раствор А | |
| Метиленовая синька | 0, 1 г |
| Этиловый спирт 95° | 2 мл |
| Ледяная уксусная кислота | 5 мл |
| Дистиллированная вода | 100 мл |
| Раствор Б | |
| Кристаллвиолет | 1 г |
| Этиловый спирт 95° | 10 мл |
| Дистиллированная вода | 300 мл |
Для окраски смешивают 2 части раствора А с 1 частью раствора Б.
Техника окраски. На фиксированный мазок наливают смесь растворов А и Б, через минуту краску сливают, мазок обрабатывают раствором Люголя в течение минуты, затем промывают водой и докрашивают в течение 2—3 минут раствором хризоидина (1 г краски в 300 мл дистиллированной горячей воды), промывают водой и высушивают.
Микроскопическая картина: зернистость — темно-синяя, тела бактерий —светло-желтые.
Метод Пью (окраска метахроматических зерен)
К 2 мл этилового спирта добавляют 0, 2 г толуидиновой синьки, а затем 100 мл 5% раствора уксусной кислоты (5 мл ледяной уксусной кислоты + 95 мл воды). Раствор хорошо хранится. На фиксированный мазок наливают краску и нагревают 1—2 минуты, до появления паров. Дают остыть, смывают водой, высушивают и исследуют. При микроскопии с искусственным освещением метахромазия заметна особенно резко.
Микроскопическая картина: тела палочек — синего цвета, метахроматические зерна — красновато-фиолетовые.
Модификация Саватеева.
|
|
|
Приготовление красящих бумажек.
0, 2 г толуидиновой синьки растирают в ступке с 5, 8 г кристаллической лимонной кислоты (предварительно растертой в порошок) до получения равномерной синевато-сиреневой окраски всего порошка; затем, продолжая растирать, постепенно добавляют 10 мл дистиллированной воды. Когда вся смесь растворится, прибавляют 1 мл чистого глицерина и, хорошо размешав смесь пестиком, добавляют еще 10 мл дистиллированной воды; содержимое выливают в чашку и смачивают им узкие полоски (5 см длиной) фильтровальной бумаги, высушивают их при комнатной температуре, режут и хранят в темноте.
Техника окраски. На фиксированный мазок наносят 8—10 капель воды, кладут бумажку и нагревают 1 минуту до появления паров, что повторяют 3—4 раза с добавлением воды. Дают мазку остыть, смывают водой бумажку с краской, сушат и исследуют.
Результат тот же, что и при оригинальном методе Пью.
Окраска по Романовскому-Гимза
Лучше применять краску фабричного изготовления. Перед самой окраской готовят рабочий раствор из расчета 1 капля краски на 1 мл дистиллированной воды нейтральной реакции (определение рН воды см. ниже).
Разведенную краску наливают в чашку, на дно которой положены кусочки предметного стекла (подставка). Мазок, фиксированный химически чистым метиловым спиртом, кладут намазанной стороной вниз на поверхность слоя краски, опирая концы препарата на кусочки стекла (подставки), и оставляют в таком положении от 30 минут до 2 часов, в зависимости от качества краски, затем промывают водой и высушивают на воздухе в вертикальном положении.
Указанный способ особенно хорош для окраски спирохет, биполяров и мазков крови.
Простой способ нейтрализации дистиллированной воды. В два химических стакана (колбы) наливают по 200 мл исследуемой воды и добавляют в каждый по 1—2 капли 1% раствора нейтральрота в дистиллированной воде (индикатор). При рН воды 5, 4—5, 5 (кислая реакция) получается свекловично-красная (рубиновая) окраска. Тогда в один из стаканов, тщательно размешивая, прибавляют по каплям 1% раствор углекислой соды до получения ясной разницы в окраске по сравнению с водой в другом (контрольном) стакане. Моментом нейтрализации считается появление заметного оранжевого оттенка; если через 10—30 секунд цвет не изменится до первоначального —нейтрализация считается достигнутой. Нельзя добавлять соду до получения ясно оранжевого или, тем более, желтого цвета; в таких случаях вода окажется сильно щелочной. Зная, сколько капель раствора соды пошло на усреднение 200 мл исследуемой пробы, легко подсчитать, сколько надо взять капель для нейтрализации любого количества той же порции воды. Для окраски лучше применять воду с рН 6, 8 – 7, 0.
|
|
|
Окраска капсул
Капсулы микробов состоят главным образом из полисахаридов и гликопротеидов. Капсульными можно считать те микробы, у которых капсула обнаруживается при окраске каким-либо методом на капсулы. Капсулы и слои слизи образуются некоторыми бактериями в специфических культуральных условиях. Лучше всего они видны во влажных препаратах, поскольку составляющие их сильно гидратированные коллоидные полимеры легко разрушаются и сокращаются в размерах при высушивании и фиксации. Самым простым и наиболее эффективным из трех методов окраски капсул, описанных ниже, является метод Дюгида.
|
|
|
