 |
Оценка результатов микробиологической диагностики
|
|
|
|
Оценка результатов микробиологической диагностики
оппортунистических инфекций.
Для оценки роли условно-патогенных микроорганизмов в патологии могут быть использованы следующие критерии.
1. Выделение микроорганизмов из крови, ликвора или других жидкостей организма, которые в норме являются стерильными. Если из крови выделены условно-патогенные микроорганизмы, необходимо дифференцировать положительные результаты от ошибок, связанных с загрязнением образца крови. О наличии в крови возбудителя заболевания свидетельствуют повторное выделение одних и тех же микроорганизмов, выявление патогенных микроорганизмов, как правило, отсутствующих среди представителей нормальной флоры. В пользу контаминации образца крови могут свидетельствовать выделение небольшого количества нескольких видов микроорганизмов, а также наличие «нормальной» микрофлоры только в одной пробе.
2. При диагностике оппортунистических инфекций важное значение имеет количественное определение микрорганизмовв 1 мл исследуемого материала. Диагностическое значение имеет обнаружение 105 особей микроорганизмов в 1 мл.
Например, обнаружение в 1 мл мочи более 105 бактерий свидетельствует об активном инфекционном процессе мочевыводящих путей и подтверждает диагноз с вероятностью 95%. Наличие в 1 мл мочи менее 103 бактерий, особенно если они принадлежат к разным видам, свидетельствует о загрязненности мочи или попадании в нее представителей нормальной микрофлоры. Обнаружение 104 – 105 бактерий в 1 мл мочи требует повторного исследования. Наличие такого же количества микроорганизмов при повторном исследовании свидетельствует об инфекционном процессе.
|
|
|
Из упрощенных методов определения числа бактерий в моче заслуживает внимания метод калиброванной платиновой петли с диаметром ушка 2 мм. Мочу засевают такой петлей на соответствующие среды, инкубируют их в термостате, подсчитывают на 1 мл мочи, исходя из посевной дозы в 0, 01мл.
СХЕМА БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
ПРИ ОППОРТУНИСТИЧЕСКИХ ИНФЕКЦИЯХ
| 1 – й день | 1. Микроскопия мазка из исследуемого материала, окраска по Граму. В необходимых случаях применяются специальные методы окраски (по Цилю-Нильсену, Романовскому-Гимза и др. ) 2. Приготовление разведенной 10-1 – 10-4 материала физ/раствором (0, 5% р-ром NaCl + 0, 01% желатин). 3. Посе одной капли 10-1 – 10-4 разведений (0, 05мл) на секторы питательных сред или методом калибровочной платиновой петлей с диаметром ушка 2мм (объем водной суспензии в этом случае 0, 005мл). При этой методике засевают разведения 10-1, – 10-3. Для посева желательно взять среды ЖСА (для стафилококков), Эндо и эозиметиловый агар (для энтеробактерий), кровяной агар (для стрептококков и др. ), среду Сабуро (для кандид и др. грибов), среду для анаэробов. |
| 2 – й день | 1. Определение характера роста на питательных средах. 2. Подсчет количества колоний каждого типа на чашках с посевом разведений с перерасчетом КОЕ на 1мл материала по формуле: х КОЕ = п ФПД х ФР где п – число колоний ФДП – фактор посевной дозы (для кап. метода 20, для посева петлей 200). 3. Микроскопия окрашенных по Граму мазков из всех типов колоний, КОЕ которого 1000 и более. 4. Отсев на среду накопления с колоний, КОЕ которого 1000 и более. В случаях забора материала из закрытых очагов для дальнейшего изучения отбираются 2 – 3 субкультуры, из открытых – 5 – 6 субкультур. 5. Ускоренная идентификация (при наличии методов и возможностей). |
| 3 – й день | 1. Установление «чистоты» культуры на средах накопления путем осмотра характера роста и микроскопией мазка. 2. Идентификация чистых культур. Тесты идентификации зависят от предполагаемого вида или рода выделенной культуры. Проводится с помощью традиционных методик или автоматических или полуавтоматических систем. 3. Определение чувствительности выделенных культур к антибиотикам и в необходимых случаях к антисептикам. |
| 4 – й день | 1. Учет тестов, использованных для идентификации. 2. Оформление заключения: А) семейство, род, вид выделенных культур; Б) количество КОЕ выделенных культур в 1 мл материала; В) спектр и уровень чувствительности к антимикробным препаратам. |
|
|
|
Занятие № 19
ТЕМА: Методы диагностики вирусных инфекций. ОРВИ. Микробиологическая диагностика гриппа.
ЦЕЛЬ: Изучить методы микробиологической диагностики вирусных заболеваний. Иметь представление о вирусах – возбудителях ОРВИ. Изучить методы диагностики гриппа
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ
1. Основные особенности вирусов, отличие от других микробов. Вирион, структура вириона.
2. Перечислите основные методы диагностики вирусных заболеваний. Какие методы используются для культивирования вирусов?
3. Что такое культура клеток. Какие Вы знаете типы тканевых культур?
4. Какие существуют методы заражения куриного эмбриона? Как обнаруживают наличие (индикация) вируса в курином эмбрионе?
5. Как обнаруживают наличие вируса в культуре ткани? Что такое ЦПД вируса?
6. Какие Вы знаете внутриклеточные включения? Что собой представляет метод «бляшек» Дюльбекко?
7. Какие вирусы могут вызывать ОРВИ. Дайте характеристику ортомиксовирусов и парамиксовирусов. Какие возбудители вирусных инфекций относятся к этим двум семействам?
8. Опишите антигенную структуру вируса гриппа. Назовите типы вируса гриппа и его антигены? Перечислите методы лабораторной диагностики гриппа.
9. Специфическая профилактика гриппа. Назовите препараты, применяемые для лечения гриппа.
10. Дайте характеристику респираторно-синцитиального вируса
11. Лабораторная диагностика эпидемического паротита?
12. Методы лабораторной диагностики кори.
13. Аденовирусы, общая характеристика. Методы лабораторной диагностики аденовирусных инфекций.
|
|
|
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ
1. Зарисовать в тетради структуру вириона.
2. Зарисовать в тетрадь схему строения куриного эмбриона с указанием способов заражения.
3. Пользуясь учебной таблицей, изобразите в виде схемы типы тканевых культур.
4. Изучить внутриклеточные включения (демонстрация препарата и таблицы). Зарисовать в тетрадь.
5. Зарисовать в тетрадь таблицу «Методы обнаружения вирусов в культуре клеток».
6. Изучить схему микробиологической диагностики ОРВИ.
7. Вскрыть ранее зараженный куриный эмбрион, отсосать аллантоисную жидкость, поставить РГА для индикации вируса.
8. Поставить РТГА с целью идентификации типа выделенного вируса. Учесть результаты, дать заключение.
МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
В настоящее время около 85% инфекционной патологии приходится на вирусные инфекции.
Современная вирусология представляет собой бурно-развивающуюся отрасль естествознания, которая оказывает большое влияние на развитие многих медико-биологических и клинических дисциплин.
Вирусы существуют в 2-х качественно разных формах: внеклеточной - вирион и внутриклеточной-вирус. Вирион представляет собой нуклеопротеид, в состав которого входит вирусный геном, защищенный белковой оболочкой – капсидом. Внутриклеточный вирус – это самореплицирующая форма, не способная к бинарному делению.
Вирусы отличаются от про - и эукариот по следующим признакам:
- Вирусы не способны к росту и _____________________________________________
- У вирусов имеется один тип нуклеиновой кислоты: или ________, или ___________
- Вирусы не имеют ______________________________строения
- У вирусов отсутствуют собственные энерго _________________ системы
- Вирусы не имеют рибосом. Они пользуются рибосомами ____________, что обусловливает их ___________________ паразитизм.
- Вирусы размножаются путем ________________________________.
Принципы классификации (3). Какие?
1. По типу симметрии ___________________________________________________
2. По типу _____________________________________________________________
3. По __________________________________________________________________
|
|
|
Классификация вирусов по типу нуклеиновой кислоты:
а) РНК – содержащие вирусы (12)
1. _______________________________________________________________________
2. _______________________________________________________________________
3 _______________________________________________________________________
4 _______________________________________________________________________
5________________________________________________________________________
6________________________________________________________________________
7________________________________________________________________________
8________________________________________________________________________
9________________________________________________________________________
10_______________________________________________________________________
11_______________________________________________________________________
12_______________________________________________________________________
б) ДНК – содержащие вирусы (6)
1________________________________________________________________________
2________________________________________________________________________
3________________________________________________________________________
4________________________________________________________________________
5________________________________________________________________________
6________________________________________________________________________
Тип симметрии нуклеокапсида (3):
1________________________________________________________________________
2________________________________________________________________________
3________________________________________________________________________
Классификация вирусов по тропизму:
1. Нейротропные вирусы (перечислить семейства) ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
2. Энтеротропные вирусы (перечислить семейства)
_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
3. Дермотропные (перечислить семейства)
_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
4. Пневмотропные (перечислить семейства)
_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
5. Иммунотропные (перечислить семейства)
______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Методы индикации вирусов (6)
- _______________________________________________________________________
- _______________________________________________________________________
- _______________________________________________________________________
- _______________________________________________________________________
- _______________________________________________________________________
- _______________________________________________________________________
Внутриклеточные включения выявляют по способу ______________, они окрашиваются в _______________ цвет и определяются под _____________ микроскопом.
Внутрицитоплазматические включения характерны для рабдовируса (тельца ________________) и поксвирусов (тельца______________________).
Внутриядерные включения характерны для __________________________________
Вирусы видны под __________________ микроскопом. Размеры вирусов измеряются в _______________________________________.
|
|
|
Методы культивирования вирусов (3):
1__________________________________________________________________________
2__________________________________________________________________________
3__________________________________________________________________________
СХЕМА СТРОЕНИЯ КУРИНОГО ЭМБРИОНА (зарисовать)
Возраст куриного эмбриона________________________________________________
Способы заражения (перечислить)
1___________________________________________________________________________
2___________________________________________________________________________
3____________________________________________________________________________
4____________________________________________________________________________
ТИПЫ ТКАНЕВЫХ КУЛЬТУР:
1____________________________________________________________________________
2____________________________________________________________________________
3____________________________________________________________________________
Перевиваемые однослойные культуры приготовляют из ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Питательные среды для культивирования культуры клеток (4):
1____________________________________________________________________________
2____________________________________________________________________________
3____________________________________________________________________________
4____________________________________________________________________________
Возбудители ОРВИ относятся к разным семействам: РНК- и ДНК – содержащих вирусов. Они объединены в одну группу на основании способности проникать в организм преимущественно через слизистую оболочку верхних дыхательных путей, а также общих принципов лабораторной диагностики. Однако некоторые вирусы из них (вирус паротита) поражают слюнные железы, ткани яичек у мальчиков, а вирус краснухи вызывает системное поражение лимфатических узлов, тканей эмбриона у беременных.
Возбудители ОРВИ:
а) ДНК- содержащие вирусы (семейства):
1. __________________________________________________________________________
2___________________________________________________________________________
б) РНК – содержащие вирусы (семейства):
1___________________________________________________________________________
2___________________________________________________________________________
3___________________________________________________________________________
4___________________________________________________________________________
5___________________________________________________________________________
В лабораторной диагностике ОРВИ наиболее широкое применение нашли экспресс-методы: иммунофлюоросценция и риноцитоскопия, позволяющие в течение 2-3 ч. поставить ориентировочный диагноз. Вирусологический метод с выделением и идентификацией возбудителя используются преимущественно для эпидемиологического анализа вспышек заболевания. Серологическая диагностика при ОРВИ, гриппе носит ретроспективный характер, так как выработка и накопление антител происходит в период реконвалесценции (через 2-3 нед. после начала заболевания).
Для серодиагностики используют (3) ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Экспресс-методы диагностики (2)
а)___________________________________________________________________________
б)___________________________________________________________________________
Материал для исследования: смывы из носоглотки, мокрота, мазки из зева.
При аденовирусной инфекции отмечаются деструкция _________, вакуолизация _______ и образование внутриядерных _________________, что не характерно для вируса гриппа.
Универсальный, специфичный метод – это _______________(метод___________________)
Из ОРВИ особую опасность представляет грипп, который очень часто носит пандемический характер, причем ежегодно меняются варианты типа вируса А, что связано с его антигенной изменчивостью. Изменчивость антигенов гемагглютинина и ______ связана с двумя генетическими процессами_________________ и ____________________________
Дрейф –это незначительные изменения _____________, а шифт – это _____________гена, что ведет к смене г ___________ и н_____________________. Со времени открытия в 1933 г. вируса гриппа А описаны его варианты (HoN-, H, N-, H2N-, H3N-, ). У вирусов гриппа также имеются общие антигены с ____________________________ человека.
Источник инфекции __________________________________________________________
Механизм передачи __________________________________________________________
Лабораторная диагностика:
Вирусологический метод (описать) ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
|
|
|
