 |
Обязанности студентов в лаборатории.
|
|
|
|
Обязанности студентов в лаборатории.
Правила техники безопасности
Подготовку лаборатории к занятиям проводит лаборант. Студенты, выполняя задания, должны соблюдать следующие правила:
1. Приступая к лабораторным занятиям по микробиологии, студент занимает место за учебным столом, которое за ним закрепляется до конца практикума.
2. За каждым студентом закрепляется определенный микроскоп для работы и возлагается ответственность за его исправность.
3. На учебном столе не должно быть никаких посторонних предметов, не относящихся к теме занятий.
4. В помещении лаборатории необходимо соблюдать чистоту, опрятность и порядок - не курить, не принимать пищу, не касаться лица, не сорить.
5. Не входить в лабораторию в пальто, головном уборе; работать в лаборатории только в чистом халате, волосы должны быть подобраны, не падать на плечи.
6. При работе с культурами микроорганизмов необходимо строго соблюдать все правила микробиологической техники. На пробирках, колбах, чашках Петри, матрацах должна быть сделана надпись, содержащая родовые и видовые названия культуры, дату засева, фамилию студента и номер группы.
7. Инструменты (пинцеты, шпатели, пипетки, петли и др. ), предметные и покровные стекла и т. д. после использования погружать в дезинфицирующую жидкость или прожигать на пламени спиртовки.
8. Все засеянные пробирки, чашки помещаются в термостат или сдаются лаборанту. Отработанный материал (пробирки, чашки Петри) помещается в определенные емкости по указанию лаборанта для их дальнейшего обеззараживания.
9. На каждое занятие из числа студентов выделяется дежурный, который следит за порядком в лаборатории во время занятий, собирает использованный материал и сдает лабораторию лаборанту.
|
|
|
10. После окончания занятия студент должен привести свое рабочее место и микроскоп в исходное состояние и обязательно тщательно вымыть руки. Необходимо иметь индивидуальное полотенце, салфетки для вытирания рук.
11. До начала занятий следует записать в лабораторный журнал тему и план работы. В процессе работы производятся записи и зарисовки.
Запись необходимо вести аккуратно, четко и в определенном порядке, например по следующей схеме:
1) название опыта, дата его постановки и окончания;
2) объект исследования;
3) условия проведения опыта;
4) основной принцип используемого метода анализа;
5) полученные результаты.
Полученные результаты подробно описать, цифровой материал привести в таблицах. Зарисовки микроскопической картины сделать цветными карандашами, условно обозначив поле зрения кругом. Под рисунком указать степень увеличения, способ окраски, объект исследования.
Каждая лабораторная работа должна заканчиваться собственными наблюдениями и выводами, записанными в лабораторном журнале.
12. Предоставить журнал с отчетом и зарисовками преподавателю.
Устройство биологического микроскопа и правила работы с ним.
Методы спектроскопии
При изучении морфологии микробных клеток используются различные виды микроскопии, поскольку глаз человека устроен так, что не может отчетливо разглядеть мелкие предметы.
Невооруженным глазом рассматриваются предметы чаще всего с расстояния так называемого лучшего видения – 250 мм. При нормальной остроте зрения глаз может на этом расстоянии различать детали размером не менее 0, 15 мм. Размеры микробных клеток могут быть менее 0, 1 мм. Для наблюдения более мелких деталей необходимо использование специальных средств. Такими средствами являются лупа и микроскоп.
|
|
|
Микроскоп – оптический прибор, предназначенный для рассмотрения мельчайших объектов, не видимых невооруженным глазом. Слово «микроскоп» – греческого происхождения (micros − малый, scopeo − смотрю).
Наиболее распространенными моделями современного биологического микроскопа, позволяющего исследовать объекты в проходящем свете, являются микроскопы типа МБИ-1, МБР-1, МБР-1А, «Биолам» (см. схему микроскопа рис. 1).
Рис. 1. Схема микроскопа:
1 − окуляр, 2 − тубус, 3 − объектив, 4 − предметный столик, 5 − клемма, 6 − конденсор, 7 − зеркало, 8 − винт конденсора, 9 − микрометрический винт, 10 − макрометрический винт, 11 − тубусодержатель, 12 − ножка
Микроскоп состоит из трех основных частей: механической, оптической, и осветительной.
Механическая часть или штатив имеет следующие детали.
Тубусодержатель, или колонка, в современных микроскопах представлена в виде дуги и служит для переноса микроскопа.
Предметный столик, перемещающийся в горизонтальной плоскости с помощью двух винтов, расположенных справа и слева Столик может вращаться вокруг своей оси. Это дает возможность привести любую точку препарата в центр поля зрения. На поверхности столика имеются две клеммы, зажимающие препарат.
Тубу с предназначен для закрепления на микроскопе объективов. Наклонный тубус можно повернуть вокруг своей оси в любое удобное положение и закрепить винтом.
Макрометрический винт (кремальера, зубчатка) служит для грубой установки фокуса оптической системы на препарат. При вращении этого винта по часовой стрелке тубусодержатель опускается, при вращении против часовой стрелки − поднимается.
Микрометрический винт предназначен для точной установки фокуса оптической системы на препарат. Один оборот микрометрического винта соответствует перемещению тубуса на 0, 1 мм. Микрометрический винт является одной из наиболее уязвимых частей микроскопа и обращаться с ним следует особенно осторожно.
Револьвер (вращающаяся насадка) расположен на нижнем конце тубуса. В нем имеются 2–4 гнезда для объективов. При повороте револьвера вокруг своей оси под тубус подводится один из объективов. Объектив необходимо установить на оптическую ось микроскопа. Для этого на револьвере имеется специальное приспособление – соответствующий желобок, в который входит ступица, закрепляющая объектив. Если ступица попадает в желобок, то при вращении револьвера слышен легкий щелчок.
|
|
|
Оптическая часть микроскопа состоит из объективов и окуляров.
Объектив – наиболее важная и ценная часть микроскопа. Он состоит из системы линз, заключенных в металлическую оправу, на которой обозначена степень увеличения объектива. В микроскопе МБР-1 используются объективы, дающие увеличение в 8, 40 и 90 раз (8х, 40х, 90х). Эти цифры указаны на оправе объектива. Основная линза объектива − передняя (фронтальная). Увеличение объектива зависит от фокусного расстояния фронтальной линзы и, следовательно, от ее кривизны. Чем больше кривизна фронтальной линзы, тем короче фокусное расстояние и тем больше увеличение объектива. Другие линзы объектива (а их может быть 10 и более) расположены выше фронтальной. Эти линзы называются коррекционными. Они предназначены не для увеличения, а для получения более четкого изображения.
Объективы разделяют на сухие (малых увеличений 8х, 9х) и иммерсионные, или маслянопогруженные (больших увеличений 85х, 90х). При работе с сухими объективами между фронтальной линзой и препаратом находится воздух. Вследствие различия показателей преломления воздуха (n = 1) и стекла (n = 1, 52) часть лучей, освещающих препарат, рассеивается и не попадает в объектив, происходит частичное искажение рассматриваемых объектов (рис. 2).
Рис. 2. Схема лучей в иммерсионной системе:
1 − объектив микроскопа, 2 − предметное стекло, 3 − объект исследования, 4 − иммерсионное масло, 5 − лучи света, 6 − фронтальная линза объектива
При микроскопировании с иммерсионным объективом для устранения светорассеивания расстояние между фронтальной линзой и препаратом заполняют кедровым маслом (кедроль), показатель преломления которого близок к показателю преломления стекла. При этом объектив погружают в масло (см. рис. 2). Стекло, на котором изготовлен препарат, стекло объективов и кедровое масло имеют почти одинаковый показатель преломления света (1, 52 и 1, 515). Лучи, проходя из одной среды в другую, почти не преломляются, свет не рассеивается, рассматриваемые объекты не искажаются и при этом бывают хорошо видны. Показатель преломления света, близкий к стеклу, имеют и другие вещества: касторовое масло (1, 48–1, 49), гвоздичное масло (1, 53), смесь касторового и гвоздичного масел (1, 515).
|
|
|
Окуляр имеет две линзы − глазную (верхнюю) и собирательную (нижнюю). Обычно окуляры дают увеличение в 7, 10 и 15 раз (7х, 10х, 15х).
Общее увеличение, которое дает микроскоп, определяется произведением увеличения объектива на увеличение окуляра. Так, максимальное увеличение микроскопа МБР-1 − в 1350 раз (90х15), минимальное − 56 (8х7). Однако общее увеличение микроскопа еще не характеризует всех его возможностей. Отчетливость получаемого изображения определяется разрешающей способностью микроскопа. Под разрешающей способностью понимают наименьшей величины объект, который можно увидеть в данный микроскоп. Следовательно, чем меньше размер частицы, видимой в микроскоп, тем больше его разрешающая способность. Разрешающая способность невооруженного глаза составляет 200 мкм, т. е. 0, 2 мм. В современных микроскопах при использовании видимой части дневного света удается рассмотреть объекты не менее 0, 0002 мм, или 0, 2 мкм.
В осветительное устройство входят: осветитель, ирис-диафрагма и конденсор. Осветитель составляет неотъемлемую часть микроскопа, так как в настоящее время в исследовательской микроскопии применяется исключительно электрический свет. Во многих современных микроскопах (МБИ-2, МБИ-6, а также в МБР-1 и «Биолам" » осветительный аппарат вместе с источником света вмонтирован в основание микроскопа вместо зеркала (осветители типа ОИ-19, ОИ-35).
Конденсор служит для лучшего освещения препарата и состоит из нескольких линз. Он собирает световые лучи осветителя и направляет их через отверстие предметного столика на препарат. Для получения отчетливого изображения необходимо, чтобы препарат оказался в фокусе конденсора. С этой целью конденсор можно передвигать с помощью винта в вертикальном положении в пределах 20 мм.
Современная ирис-диафрагма расположена под конденсором и служит для регулирования величины светового пучка.
Кроме того, перед конденсором имеется гнездо для светофильтра.
Микроскоп дает увеличенное обратное и мнимое изображение предмета. Современный микроскоп − это точный оптический прибор, требующий строгого соблюдения ряда правил при работе с ним. Они касаются обращения с прибором и ухода за ним, а также применения правильного освещения, выбора в каждом конкретном случае наилучшего варианта оптической системы (окуляр-объектив-конденсор) и т. п.
|
|
|
Наилучшие результаты при работе с микроскопом могут быть получены при условии правильного освещения объекта. Для этого нужно пользоваться рассеянным дневным или искусственным освещением.
В современных микроскопах для освещения применяют свет от электрического осветителя, имеющего, как правило, низковольтную лампочку (8 В, 30 Вт). Настройка освещения всегда производится объективом 8х. С помощью револьвера необходимо поставить объектив с малым увеличением перпендикулярно предметному столику на центральную оптическую ось. Затем полностью открыть диафрагму осветителя и поднять до упора конденсор. При правильной установке поле зрения микроскопа будет выглядеть в виде хорошо и равномерно освещенного круга.
Для установки препарата на фокус необходимо:
· поместить на предметный столик микроскопа препарат и закрепить его клеммами;
· при рассмотрении препарата с объективом 8х, наблюдая сбоку, опустить объектив при помощи макрометрического винта так, чтобы расстояние между препаратом и фронтальной линзой объектива было около 0, 5 сантиметра, конденсор опустить, ирис-диафрагму прикрыть;
· медленно поднимать тубус до появления отчетливых контуров препарата;
· рассмотреть несколько полей зрения препарата, передвигая столик с помощью двух боковых винтов;
· объектив, дающий среднее увеличение 40х, при помощи револьвера установить на оптической оси, конденсор поставить в среднее положение, ирис-диафрагму слегка открыть;
· наблюдая сбоку, опустить объектив на расстояние (между фронтальной линзой и препаратом) около 0, 3 см;
· смотря в окуляр, очень медленно поднимать тубус до появления отчетливого изображения препарата;
· уточнить фокус осторожным вращением микрометрического винта в ту или в другую сторону не более чем на четверть или пол-оборота;
· при работе с иммерсионным объективом 90х также при помощи револьвера установить его на оптической оси;
· нанести на препарат каплю иммерсионного масла;
· наблюдая сбоку, погрузить объектив в каплю масла, почти соприкасаясь фронтальной линзой с предметным стеклом;
· осторожно и очень медленно поднять тубус, вращая макрометрический винт на себя, до появления контуров препарата, после чего уточнить фокус микрометрическим винтом, конденсор при этом должен быть поднят вверх до упора, ирис-диафрагма полностью открыта.
При микроскопировании надо научиться держать оба глаза открытыми и пользоваться ими попеременно.
После окончания работы необходимо препарат снять с предметного столика, мягкой салфеткой обтереть все объективы, поставить под тубус объектив 8х, опустить тубус, иммерсионное масло снять с помощью салфетки, смоченной спиртом, и накрыть микроскоп чехлом.
Хранить микроскоп нужно под чехлом или под специальным стеклянным колпаком, предохраняя от пыли. Время от времени следует проверять чистоту и состояние оптики и протирать ее, но только снаружи. Для чистки применяют волосяную кисточку или мягкую тряпочку. Не рекомендуется применение ваты или марли, оставляющих после себя волокна и нити.
|
|
|
