 |
Идентификация микроскопических грибов
|
|
|
|
Идентификация микроскопических грибов
Понятие «идентификация микроорганизмов» означает определение положения данного вида в систематике, т. е. определение его названия. Для идентификации микроскопических грибов важными признаками являются их морфологические и культуральные свойства.
К морфологическим свойствам микроскопических грибов относится строение вегетативного тела и органов размножения.
Культуральными свойствамимикроскопических грибов называются внешний вид грибницы и способ ее роста по отношению к среде обитания (поверхностный или глубокий).
При культивировании на питательных средах в лабораторных условиях у грибов, как правило, отмечается радиальное разрастание грибницы, образуется радиальная колония. Мицелий некоторых видов грибов окрашен за счет отложения пигмента в клеточных оболочках: розовый – у гриба фузариум, зеленый – у гриба пенициллиум, черный – у некоторых аспергилловых грибов.
Грибы – крупные (длина гифов ‑ несколько десятков мкм, толщина – 10–15 мкм и достаточно контрастные микроорганизмы, поэтому в лабораторных условиях для изучения морфологических свойств их микроскопируют в прижизненных неокрашенных препаратах типа «раздавленная капля» при малых (8х) и средних (40х) увеличениях. Культуральные свойства грибов исследуют невооруженным глазом (визуально) и с помощью бинокулярного микроскопа. Изучение морфологических и культуральных свойств позволяет установить название рода микроскопических грибов. Определение названия вида гриба требует исследования процессов жизнедеятельности микроорганизмов.
Техника приготовления микроскопических препаратов
|
|
|
в живом виде
Для исследования морфологии микроорганизмов в оптическом микроскопе специально готовят препараты, которые в зависимости от задач исследования могут содержать живые или убитые клетки микроорганизмов. Препараты помещают на предметных стеклах, толщиной не более 1, 2–1, 4 мм. Поверхность стекла должна быть тщательно очищена и обезжирена. Для приготовления препаратов живых микроорганизмов применяют покровные стекла толщиной 0, 17 мм, которыми накрывают препарат. Чистые стекла хранят в сухом состоянии или в обезжиривающих жидкостях.
Исследование микроорганизмов в живом виде применяется для определения формы микробов, изучения их способности к спорообразованию с помощью препаратов «раздавленная капля» или «висячая капля».
Для приготовления препарата «раздавленная капля» на середину предметного стекла наносится небольшая капля водопроводной воды или физиологического раствора, в которую вносится небольшое количество исследуемой биомассы с помощью прокаленной на спиртовке бактериологической иглы, тщательно размешивается, и полученная суспензия накрывается покровным стеклом. При изучении плесневых грибков из их культуры берется небольшое количество мицелия с помощью двух препаровочных игл.
Мицелий на предметном стекле тщательно расправляют и также накрывают покровным стеклом. В качестве жидкости используется смесь спирта и глицерина (1: 1). Если исследуемые микробы находятся в жидкой среде, то на предметное стекло наносится непосредственно капля микробной взвеси и накрывается покровным стеклом. Микробную взвесь можно взять стеклянной палочкой или также бактериологической иглой. Не следует вносить много культуры – препарат будет густым и мало пригодным для наблюдения; нельзя допускать образования пузырьков воздуха под покровным стеклом; при избытке жидкости, выступающей из-под покровного стекла, её удаляют фильтровальной бумагой. Этот вид препарата позволяет установить форму клеток, их размер, способ спорообразования, наличие или отсутствие подвижности. Приготовленный препарат рассматривается под микроскопом с сухой системой с большим увеличением объектива и окуляра (40х15).
|
|
|
Для приготовления препарата «раздавленная капля» из прижизненно окрашенных микроорганизмов к капле микробной суспензии на предметном стекле добавляют каплю слабого раствора (1: 1000) красителя (метиленового синего или фуксина), размешивают, затем накрывают покровным стеклом.
Подобным образом рекомендуется дифференцировать живые и мертвые клетки, например, при исследовании пекарских дрожжей. Мертвые клетки обычно прокрашиваются быстрее и ярче вследствие посмертного повышения проницаемости клеточной оболочки.
Препаратом «висячая капля» обычно пользуются для наблюдения за развитием микробов, их ростом и размножением, для выявления подвижности клеток. В данном случае капля микробной суспензии наносится с помощью бактериологической петли непосредственно на покровное стекло, на которое осторожно накладывают предметное стекло с луночкой в центре так, чтобы капля свободно помещалась в центре углубления (рис. 5). Препарат переворачивают, при этом капля должна свободно висеть в углублении предметного стекла, не касаясь его краев или дна. Предварительно края углубления смазывают вазелином, что создает герметичную камеру, и исследуемая капля продолжительное время не высыхает. Препарат микроскопируют.
а
б
Рис. 5. Препарат «висячая капля»: а – стекло с лункой; б – «висячая капля»
Препарат «отпечаток» используют для изучения естественного расположения клеток в колонии микроорганизмов и чаще всего для исследования формы спор и спороносцев у актиномицетов и мицелиальных грибов.
Из агаризованной среды, на которой исследуемые микроорганизмы растут сплошным газоном или в виде отдельных колоний, вырезают скальпелем небольшой кубик и переносят его на предметное стекло так, чтобы поверхность с микроорганизмами была обращена вверх. Затем к газону или к колонии прикладывают чистое покровное стекло, слегка надавливают на него петлей или пинцетом и тотчас же снимают, стараясь не сдвинуть в сторону. Полученный препарат помещают отпечатком вниз в каплю воды или метиленового синего (1: 40) на предметное стекло. Отпечаток можно получить и на предметном стекле, если касаться поверхности колонии или газона предметным стеклом.
|
|
|
