 |
Определение размеров микробных клеток
|
|
|
|
Размеры микробных клеток варьируют в широких пределах: от сотых долей микрометров (мкм) у некоторых бактерий до нескольких десятков и сотен микрометров у микроскопических простейших и водорослей.
Определение размеров клеток микроорганизмов под микроскопом включает три этапа: определение размеров клеток в делениях окулярной линейки, определение цены деления окулярной линейки в мкм и расчет размеров клеток в мкм.
Определение размеров клеток в делениях окулярной линейки осуществляют с помощью окулярной линейки (окуляр-микрометра), которую помещают на диафрагму окуляра, для чего вывинчивают глазную линзу окуляра, устанавливают окуляр-микрометр и вновь завинчивают линзу (рис. 7).
Рис. 7. Окуляр-микрометр и объект-микрометр
На столик микроскопа помещают препарат «раздавленная капл», препарат парафинируют для предохранения от высыхания нанесением расплавленного парафина на края покровного стекла. Фиксированные препараты для определения размеров клеток нежелательны, так как фиксация и окраска может изменить размеры клеток. Если клетки подвижны, препарат слегка подогревают или к капле исследуемой суспензии добавляют 0, 1% водный раствор агар-агара.
1. После установки препарата на столике микроскопа, проводят фокусировку объекта. Путем передвижения предметного столика в двух плоскостях располагают клетки на шкале окуляр-микрометра и определяют, скольким делениям линейки соответствуют длина и ширина клетки при данном увеличении микроскопа. Чтобы результаты были достоверными, измеряют обычно не менее 10–20 клеток. У кокков измеряют диаметр, у других форм – длину и ширину.
2. Определение цены деления окулярной линейки в мкм проводят с помощью объективной линейки (объект-микрометра) для данного увеличения микроскопа.
|
|
|
Объективный микрометр представляет собой металлическую пластинку с отверстием в центре, в которое вставлено стекло. На стекло нанесена линейка длиной 1 мм, которая разделена на 100 частей, так что одно деление ее соответствует 0, 01 мм или 10 мкм (см. рис. 7).
Для определения цены деления окулярной линейки на столик микроскопа вместо препарата помещают объективный микрометр и при малом увеличении фокусируют изображение линейки. Затем перемещают линейку объект-микрометра в центр поля зрения и меняют объектив на тот, при котором измеряли размер клеток. Перемещая столик микроскопа и поворачивая окуляр, устанавливают микрометры так, чтобы их шкалы были параллельны и одна перекрывала другую (рис. 8).
Рис. 8. Определение цены деления окуляра-микрометра
Совмещают одно из делений шкалы окулярного и объективного микрометров и находя следующее их совмещение. Устанавливают, какую часть деления объективного микрометра составляет одно деление окулярной линейки и умножают полученное число на 10. Таким образом, получают цену деления окулярного микрометра в микрометрах для данного увеличения микроскопа:
a = (n · 10) / n1,
где а – цена деления окуляр-микрометра, мкм;
n – число делений объект-микрометра;
n1 – число делений окуляр-микрометра;
10 мкм – цена одного деления объект-микрометра.
Определение цены деления окуляр-микрометра проводят в трехкратной повторности, каждый раз сбивая совмещения и устанавливая новые.
Результаты определений записывают в таблицу:
Результаты определений
| Объектив, окуляр | Цена деления, каждого из трех определений, мкм | Цена деления, среднее значение, мкм |
| 10х; 7х 40х; 10х 90х; 15х | а1 а2 а3 а1 а2 а3 а1 а2 а3 | аср аср аср |
3. Расчет размеров клеток в мкм. Зная, скольким делениям окулярной линейки соответствует длина и ширина изучаемого объекта, умножают цену деления окуляр-микрометра на эти числа:
|
|
|
N = N1 . a, где N – длина или ширина клетки, мкм;
N1 – число делений окуляр-микрометра;
a – цена деления окуляр-микрометра.
Размеры клеток микроорганизмов в конечном счете записывают по форме, мкм:
(N – N1) (n – n1),
где N и N1 – минимальное и максимальное значения длины клетки;
n и n1 – минимальное и максимальное значения ширины клетки;
мкм – единица измерения размеров клеток.
Например: (2 – 3) (0, 1 – 1, 0).
Результаты определения размеров клеток микроорганизмов вносят в таблицу:
Результаты определения размеров клеток
| Культура микроорганизма | Число измеряемых клеток | Длина | Ширина | Размер клеток, записанный по форме: (N – N1)(n – n1) | ||
| в делениях окулярной линейки | в в мкм | в делениях окулярной линейки | в мкм | |||
|
|
|
