 |
Практическая часть занятия
|
|
|
|
Лабораторная работа №1: Хроматографическое разделение аминокислот на бумаге и их идентификация[3].
Хроматография на бумаге является одной из модификаций распределительной хроматографии. В качестве носителя при этом используется специально обработанная бумага, которая обладает способностью удерживать в своих порах значительные количества жидкости, играющей роль неподвижного растворителя. Вторая жидкость, несмешивающаяся с первой, служит подвижным растворителем.
Хроматографическое разделение аминокислот на бумаге основано на различной растворимости их в воде и в органическом растворителе, насыщенном водой (фенол, бутанол и др.). Вода, находящаяся в порах бумаги, образует неподвижную фазу. Органический растворитель (подвижная фаза), передвигаясь под действием капиллярных сил, одновременно увлекает за собой нанесенные на бумагу аминокислоты, перемещающиеся с различной скоростью.
Расстояние, на которое переместился подвижный растворитель от места нанесения капли, называется фронтом растворителя.
Отношение расстояния, пройденного аминокислотой (а) к фронту растворителя (б) называется коэффициентом распределения данной аминокислоты и обозначается Rf. Коэффициент распределения является характерной величиной для каждой аминокислоты. Значения Rf для большинства аминокислот известны.
Положение на хроматограмме отдельной аминокислоты можно установить путем сравнения со «свидетелем». Для этого на ту же бумагу, на которую наносилась капля смеси, в один ряд с ней наносится капля «свидетеля», то есть раствора, содержащего ту аминокислоту, присутствие которой ожидается в смеси. Идентифицируют аминокислоты путем сравнения коэффициентов распределения (Rf).
|
|
|
Ход работы: Бумажный диск для радиальной хроматографии d=12 см делят простым карандашом на четыре части. В центре диска делают небольшой вырез (около 1 см в диаметре). В каждом секторе около отверстия карандашом ставят точку. Диск помещают на ножку высотой 2 см, сделанную из фильтровальной бумаги в виде трубочки, вставленной в вырез диска.
В отмеченные точки капилляром наносят капли растворов аланина (А), глутаминовой кислоты (Г), смеси аланина и глутаминовой кислоты (С) и на воздухе подсушивают диск в течение 10 минут. После чего диск помещают в чашку Петри, на дне которой находится водонасыщенный раствор фенола, закрывают крышкой и оставляют на 1 час в вытяжном шкафу.
В течение этого времени под действием капиллярных сил подвижная жидкость радиально передвигается по бумаге и разделяет смесь на относительные зоны.
Опыт считается законченным, когда фронт растворителя на несколько мм не достигнет противоположного края бумажного диска. Тогда снимают крышку чашки Петри и, удерживая пинцетом края диска, помещают его на крышку чашки. Простым карандашом отмечают фронт растворителя и ставят в термостат на 10 минут для фиксации аминокислот и испарения фенола. После этого хроматограмму проявляют спиртовым раствором нингидрина и снова высушивают в течение 5-20 минут. При этом аминокислоты дают с нингидрином сине-фиолетовое окрашивание (пятна).
Полученную хроматограмму зарисовывают цветными карандашами.
Для каждой аминокислоты с помощью линейки замеряют расстояние:
1) от места нанесения капли раствора до середины каждого пятна (а);
2) от места нанесения капли раствора до линии фронта растворителя (б).
3) вычисляют Rf = 
Результаты заносят в таблицу:
| № п/п | Исследуемые растворы | а мм | б мм | Rf |
| Аланин (свидетель) | ||||
| Глутаминовая кислота (свидетель) | ||||
| Аланин из смеси (1-я проба) | ||||
| Глутаминовая кислота из смеси (1-я проба) | ||||
| Аланин из смеси (2-я проба) | ||||
| Глутаминовая кислота из смеси (2-я проба) |
|
|
|
Вывод: ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Лабораторная работа № 2. Разделение ионов железа, меди и кобальта при помощи адсорбционной хроматографии.
Адсорбционная хроматография основана на избирательной адсорбции веществ твердым адсорбентом из растворов.
Ход работы: В адсорбционную колонку, заполненную оксидом алюминия, внести 10 капель смеси, состоящей из растворов солей Fe3+, Cu2+, Co2+ (смесь приготовить самим, для чего слить в пробирку по 5 капель раствора каждой соли и хорошо перемешать).
Все 3 катиона вначале адсорбируются вверху колонки. Затем в колонку внести 7-8 капель воды, которая сначала вымывает слабо адсорбционные ионы кобальта, затем меди и перемешивает их ниже.
Полученную хроматографию зарисовать цветными карандашами. Затем в колонку добавить 26-27 капель раствора К4[Fe(CN)6]. Через некоторое время наблюдать изменение окраски зон за счет образования цветных комплексных соединений данных катионов с К4[Fe(CN)6]. Зарисовать вновь полученную хроматограмму.
В конце работы сделать вывод об адсорбционной способности взятых катионов. Расположить катионы в ряд по убывающей адсорбционной способности.
Вывод: ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Дата ___________ Подпись преподавателя___________
|
|
|
