 |
Задача 27. В лабораторию поступил материал (смыв из носоглотки) от больного с подозрением на грипп (2-й день болезни ). 1)метод флюоресцирующих антител (МФА) - основан на выявлении вирусных антигенов в клетках эпителия носовых ходов, конъюнктивы (при явле
|
|
|
|
Задача 27
В лабораторию поступил материал (смыв из носоглотки) от больного с подозрением на грипп (2-й день болезни ).
1. Назовите возбудителей гриппа. Грипп - острая респираторная инфекция, передающаяся воздушно-капельным путём, вызываемая различными типами вируса гриппа. Вирусы гриппа А, В, С (Orthomyxoviridae).
2. Что Вы сможете обнаружить в смыве и каким методом воспользуетесь? Исследуемым материалом для выявления вируса гриппа служит носоглоточная слизь, которую отбирают с помощью тампонов со слизистой оболочки носа, зева, задней стенки глотки в первые 2-3 дня болезни. Иногда исследуют мазкиотпечатки со слизистой оболочки носа. Для определения противовирусных антител используют парные сыворотки крови. Отобранный со слизистых оболочек материал транспортируют в лабораторию в питательных средах с белковым стабилизатором (раствор Хенкса, среда 199, среда Игла с альбумином или желатином). До исследования допускается хранение материала при температуре +4ОС не более 48 часов. Цель лабораторной диагностики гриппа: 16 - лабораторное подтверждение клинического диагноза “грипп”; - определение этиологии эпидемии или пандемии; - прогнозирование последующих эпидемий; - выявление иммунного состояния населения в межэпидемический период; - определение напряженности поствакцинального иммунитета; - определение распространенности вируса среди млекопитающих и птиц. Для диагностики гриппа используют следующие методы: - экспресс-методы обнаружения вируса; - выделение вирусов гриппа и их идентификация; - методы серологической диагностики. В качестве экспресс-методов диагностики гриппа используют РИФ, ИФА и ПЦР. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) или метод флюоресцирующих антител (МФА) позволяет обнаружить антигены вируса гриппа через 2-3 часа после отбора исследуемого материала. Для этого готовят препараты на стекле и обрабатывают их гипериммунными люминесцентными сыворотками. Микроскопирование проводят с помощью люминесцентного микроскопа. Пораженные вирусом клетки обладают специфическим свечением. Иммуноферментный анализ (ИФА) позволяет обнаружить в исследуемом материале родоспецифический антиген вирусов гриппа А или В (рибонуклеопротеин) с помощью тест-систем, содержащих моноклональные антитела к рибонуклеопротеину (РНП) соответствующих вирусов. Моноклональные антитела сорбируют в лунках планшетов, после чего к ним последовательно добавляют исследуемый материал, конъюгат (антитела к РНП, меченые пероксидазой) и субстрат (смесь перекиси водорода с ортофенилендиамином). Положительный результат проявляется желтой окраской содержимого лунок. Интенсивность окраски измеряется с помощью спектрофотометров (ридеров). С помощью ИФА можно выявлять не только вирусный антиген, но и противовирусные антитела в сыворотке крови. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет выявлять в исследуемом материале генетические последовательности вирусов гриппа и идентифицировать их методом электрофореза. Выделение вирусов гриппа и их идентификация (вирусологический метод) проводится с использованием куриных эмбрионов или клеточных культур. При использовании 9-11-дневных куриных эмбрионов заражение проводят в амниотическую или аллантоисную полости. Из клеточных культур используют первичную культуру клеток почек обезьян, клетки почек собак и др. Индикацию вирусов в амниотической или аллантоисной жидкости куриных эмбрионов проводят с помощью реакции гемагглютинации с эритроцитами морской свинки или человека. Индикацию вирусов в культуре клеток осуществляют по цитопатическому действию (ЦПД), образованию “бляшек”, “цветной пробе”, реакции гемагглютинации (РГА) и гемадсорбции. Идентификацию вирусов проводят по антигенной структуре. Чаще всего тип вирусов гриппа определяют в РСК, а подтип вируса - в РТГА. Серологическая диагностика гриппа основывается на выявлении возрастания титра противовирусных антител в сыворотке крови в динамике 17 заболевания. Для этого используют микрометод РТГА в микропланшетах. При постановке реакции используют разведения сыворотки крови, коммерческие диагностикумы вирусов гриппа и взвесь эритроцитов. Диагноз считается положительным в случае четырехкратного увеличения титра антител в парных сыворотках, полученных с интервалом в 10-14 дней. Кроме РТГА для серологической диагностики используют также ИФА
|
|
|
|
|
|
3. Что еще можно взять для исследования и как провести экспрессдиагностику гриппа? Быстрая (экспресс) диагностика гриппа и ОРВИ:
1)метод флюоресцирующих антител (МФА) - основан на выявлении вирусных антигенов в клетках эпителия носовых ходов, конъюнктивы (при явлениях конъюнктивита). Исследуемый материал: мазки из носа, конъюнктивы, взятые в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни. Определяемые возбудители: - вирусы сезонного гриппа типа А (H1N1) - вирусы сезонного гриппа типа А (H3N2) - вирусы гриппа типа В - вирусы парагриппа 1, 2, 3 типов - аденовирусы - респираторно-синцитиальный вирус;
2) метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)- основан на обнаружении в клинических пробах генетического материала вирусов (РНК или ДНК)- является наиболее современным, высокочувствительным методом.
Исследуемый материал: мазки из носа и зева, взятые в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни, секционный материал. Определяемые возбудители:
|
|
|
