2.2. Твердофазный иммуноферментный анализ

2. 2. Твердофазный иммуноферментный анализ

Разработан твердофазный иммуноферментный анализ для обнаружения антилептоспирозных антител с использованием ряда различных антигенов, протоколов и платформ, включая тесты на пластинах и тест-полоски. Антигены обычно представляют собой либо цельноклеточные препараты или препараты на основе наружного белка мембраны (НБМ); в последнее время также разрабатывались тесты на основе рекомбинантного НБМ. Используемый антиген обуславливает специфичность ИФА. ИФА на основе рекомбинантного НБМ активно реагируют на антитела ко всем патогенным лептоспирам и бесполезны для эпизоотологических исследований. И наоборот: ИФА на основе липополисахаридного антигена специфичны к определенным серогруппам и могут быть полезны для эпизоотологических исследований и стратегий борьбы с инфекцией. Иммуноферментный анализ антител IgM эффективен для диагностики острой инфекции (Cousins et al., 1985; Hartman et al., 1984; 1986). Иммуноферментный анализ всех Ig подходит для выявления полностью восприимчивых животных, подходящих для экспериментов с контрольным заражением (Ellis & Zygraich, 1986). Также разработаны ИФА для исследования молока от отдельных коров и для исследования сборного молока в цистернах с целью обнаружения антител к серовару Hardjo. Эти тесты помогли выявить стада, инфицированные сероваром Hardjo, а также использовались в программах по контролю и искоренению серовара Hardjo (Pritchard, 2001). Однако стада, вакцинированные против серовара Hardjo, будут также положительными в таких ИФА, что снижает их полезность в регионах, где вакцинация является стандартной практикой. Методы на основе НБМ пока широко не распространены. Несмотря на то что они играют важную роль для диагностики случайных инфекций, они вряд ли будут иметь большое значение для программ борьбы с инфекциями, характерными для определенного хозяина, таких как инфекция сероваром Hardjo, при которой у естественно инфицированных животных отсутствует или наблюдается только слабый иммунный ответ на наружные белки мембраны патогена, а ярко выраженный серологический ответ направлен против липополисахаридных антигенов (Ellis et al., 2000).

Проблемы с валидацией являются основным сдерживающим фактором при оценке большинства методов ИФА. Почти все методы валидировали в сравнении с РМА (используя титры РМА 1/100 или больше), который является недостаточно совершенным тестом с чувствительностью ниже 50% при некоторых хронических инфекциях. Исследователи попытались решить эту проблему за счет использования байесовских моделей анализа латентного класса и мета-анализов по модели случайных эффектов (Limmathurotsakul et al., 2012; Signorini et al., 2013), однако лучший способ валидации – использовать последовательные сыворотки от животных с положительными результатами посева на лептоспироз (Goris et al., 2012). Всего несколько методов ИФА для ветеринарного применения прошли

валидацию с использованием последовательных сывороток от экспериментальных животных, отобранных не позднее чем через 6 месяцев после заражения, в то время как один коммерческий ИФА для анализа на присутствие серовара Hardjo был валидирован против одной сыворотки от КРС, положительной по результатам посева.

С. ТРЕБОВАНИЯ К ВАКЦИНАМ

1. Общие положения

Ветеринарные вакцины против лептоспироза представляют собой суспензии одного или более штаммов патогенных Leptospira, инактивированных таким образом, чтобы сохранить иммуногенную активность. Коммерческие вакцины представляют собой цельноклеточные препараты и доступны по всему миру для КРС, свиней и собак. Лептоспиры выращивают в подходящих культуральных средах, которые могут содержать сыворотку или сывороточные белки. При использовании последних их следует удалять из конечного продукта. Вакцины могут содержать подходящие адъюванты.

Вакцины применяют у животных для защиты как животных, так и людей, контактирующих с ними. Они являются основным инструментом в программах контроля и искоренения. Вакцины не искореняют инфекцию у уже инфицированных носителей, и поэтому должны применяться до заражения. Коммерческие вакцины могут различаться по своей эффективности. Эксперименты показали, что несколько моновалентных препаратов, применявшихся на КРС, обеспечивают клиническую и микробиологическую защиту вплоть до года, в отличие от них ряд моновалентных препаратов индуцирует слабый иммунитет. Программы вакцинации необходимо адаптировать к целевым популяциям с учетом эффективности препарата. В идеале, КРС следует вакцинировать перед возможным заражением, и после этого ежегодно в периоды, предшествующие периодам повышенного риска. Для того чтобы программа вакцинации была успешной, необходимы эпизоотологические исследования для оценки частоты возникновения различных сероваров Leptospira в данной конкретной популяции (Adler & de la Pena Moctezuma, 2010).

Руководство по производству ветеринарных вакцин представлено в Главе 1. 1. 8. Принципы производства ветеринарных вакцин. Руководства, приведенные здесь и в Главе 1. 1. 8., являются общими по своему характеру и могут быть дополнены требованиями, принятыми в стране или регионе.