 |
2. Основные принципы производства и минимальные требования к вакцинам
|
|
|
|
2. Основные принципы производства и минимальные требования к вакцинам
2. 1. Характеристики посевного вируса
2. 1. 1. Биологические характеристики исходного посевного вируса
Особую важность имеет правильный выбор производственных вакцинных штаммов. Иммунитет, индуцируемый вакцинацией, является, главным образом, серовар-специфичным (Chen, 1986). Вакцину следует формулировать с целью применения для данного конкретного вида животных в определенном географическом регионе. Она должна содержать только те серовары – и, предпочтительно, те генотипы, – которые поражают данные виды животных, или которые передаются данными видами
животных другим видам животных в этом регионе. Штаммы, отобранные в качестве исходной посевной культуры, клонируют на твердой среде, чтобы гарантировать отсутствие контаминации сапрофитными лептоспирами и однородность культуры.
Подходящие штаммы затем подвергают дальнейшей селекции в зависимости от их способности к эффективному росту в условиях промышленного культивирования.
Каждый штамм, который в качестве компонента будет включен в готовую вакцину, выращивают отдельно в жидкой среде, лучше без содержания белков (Bey & Johnson, 1978; Shenberg, 1967) или с низким содержанием белков (Bey & Johnson, 1978).
Объем каждой исходной посевной культуры увеличивают посредством инкубирования в течение 2-10 дней при 29º C±1º C в серии пересевов до получения объема, достаточного для использования в качестве производственной посевной культуры. Культуры насыщают кислородом и перемешивают по необходимости.
2. 1. 2. Критерии качества (стерильность, чистота, свобода от внешних агентов)
|
|
|
Каждую субкультуру исходного посевного материала проверяют на чистоту и удовлетворительный рост. Чистоту проверяют посредством внесения культуры в планшеты с кровяным агаром или тиогликолевым бульоном с помощью микробиологической петли с последующим инкубированием при 35-37º C в течение 2-5 дней или посредством исследования окрашенного по Грамму мазка осадка культуры. Рост оценивают с помощью темнопольного микроскопа. Каждую производственную посевную культуру также проверяют на чистоту и гомологию с использованием гомологичной кроличьей антисыворотки (Dikken & Kmety, 1978). Для этой цели также можно использовать моноклональные антитела.
2. 1. 3. Валидация в качестве вакцинного штамма
Эффективность вакцин против лептоспироза описана в большом количестве литературы. В большинстве случаев вакцины обеспечивают высокий уровень защиты от болезни, вызываемой заражением гомологичным штаммом в полевых условиях.
Вакцины менее эффективны для профилактики инфекции у животных: часть вакцинированных животных будет инфицирована соответствующим сероваром и будет выделять организм в среду с мочой при отсутствии клинических признаков болезни.
Испытания для оценки эффективности и валидацию вакцины проводят на целевых видах животных, для которых предназначена вакцина. Вакцину вводят согласно указаниям на этикетке, уровень иммунитета проверяют посредством естественного контрольного заражения вирулентными полевыми штаммами каждого серовара, т. е. через конъюнктиву и/или вагинальным путем. Валидационные испытания часто проводят путем контрольного заражения лептоспирами внутривенным или
внутримышечным путем. Вакцины, валидированные таким образом, не всегда обеспечивали защиту от заражения в полевых условиях, которое происходит путем проникновения лептоспир через слизистые оболочки глаз, рта и половых путей. Следует отметить, что коммерческие вакцины против лептоспироза, содержащие серовар Hardjo, не всегда обеспечивали защиту КРС от контрольного заражения сероваром Hardjo через конъюнктиву или в полевых условиях. Подготовлен проект монографии по исследованию эффективности вакцин против серовара Hardjo, предусматривающих использование более естественных путей для контрольного заражения (монография Европейской фармакопеи).
|
|
|
2. 2. Методы производства
2. 2. 1. Процедура
Производство вакцин осуществляется методом серийного культивирования в ферментерах соответствующего размера. Ферментеры должны быть снабжены отверстиями для стерильного внесения посевной культуры, воздуха и дополнительной среды, а также отверстиями для отбора образцов с целью мониторинга чистоты и роста производственной культуры.
В идеале, для производства используют среду с низким содержанием белков или безбелковую среду. Однако некоторым штаммам для высокой производительности требуется присутствие животного белка, который обычно добавляют в виде альбумина бычьей сыворотки. Все компоненты среды, не разрушаемые под действием высокой температуры, подвергают стерилизации путем нагрева. Это снижает риск контаминации сапрофитными лептоспирами, передаваемыми через воду, которые невозможно удалить посредством стерилизации методом фильтрации.
После добавления посевного материала проводят интенсивный мониторинг роста производственной культуры с целью выявления начала лог-фазы роста. Сразу же после обнаружения данной фазы содержимое сосуда перемешивают и аэрируют. Выход конечного продукта можно увеличить, добавив к культуре дополнительный объем твин 80 в момент первого замедления фазы логарифмического роста. Для адекватного роста может потребоваться до 10 дней инкубирования при 29º ±1º C.
Инактивацию обычно осуществляют путем добавления формалина, однако, возможно использование фенола, мертиолята или высокой температуры.
После соответствующего периода инактивации проводят концентрирование культуры и удаляют чуждые белковые материалы методом ультрацентрифугирования. В конечный состав вакцины можно включать различные штаммы в подходящих объемах с последующим перемешиванием и добавлением адъюванта и консерванта, при необходимости.
|
|
|
