 |
Этапы лабораторной диагностики
|
|
|
|
Первый день исследования
Испражнения наносят на питательную среду и растирают стерильным шпателем на небольшой площадке среды в чашке Петри, затем шпатель отрывают от агара и не прижимая его, продолжают растирать по остальной поверхности среды. Этим достигается равномерный рост колоний по всей поверхности. Засеянные чашки Петри в перевернутом виде помещаются в термостат при 37 (на 18-24 часа). На дне каждой чашки проставляют номер анализа.
Второй день исследования
Чашки с посевом просматривают невооруженным глазом. Просмотр чашек и отбор подозрительных колоний является одним из ответственных этапов бактериологического исследования. На среде Плоскирева дизентерийные бактерии растут в виде мелких, нежных, прозрачных колоний. Подозрительные колонии с чашек пересевают на короткий пестрый ряд для определения основных свойств культур. Короткий пестрый ряд может состоять из сред Гисса с лактозой, глюкозой маннитом и сахарозой (полужидких или жидких сред). В зависимости от характера ферментации ингредиентов среды (лактоза, глюкоза, маннит и др.) различными представителями бактерий кишечной группы наблюдается различное окрашивание среды. При отсутствии на чашке подозрительных колоний дается отрицательный ответ.
Третий день исследования
Изучение выделенных культур начинают с учета их ферментативной активности. Если все культуры от данного обследуемого сбраживают лактозу и глюкозу с газообразованием то, дается отрицательный ответ. Неподвижные культуры, не разлагающие лактозу и мочевину, и разлагающие ферментирующую глюкозу до кислоты без газа являются подозрительными на дизентерийную группу и подвергаются дальнейшему изучению. Культуры неподвижных грамотрицательных бактерий, ферментирующих глюкозу без газообразования, испытывают в опыте агглютинации на стекле с набором дизентерийных адсорбированных сывороток. Материалом для агглютинации является рост культуры на среде с мочевиной или на скошенном агаре. Вести испытание культур в реакции агглютинации на стекле рекомендуется сначала со смесью сывороток преобладающих видов (Флекснера, Зонне), а при наличии агглютинации со смесью сывороток – испытывают культуру отдельно с каждой из сывороток, входящих в данную смесь. Положительная реакция на стекле с типоспецифическими сыворотками является только ориентировочной, в связи с чем необходимо поставить развернутую реакцию агглютинации в пробирках до титра сыворотки указанного на этикетке, начиная с разведения 1:100 и физиологическом растворе. Контролем служат две пробирки: одна содержит взвесь микробов в физиологическом растворе (без сыворотки), другая – сыворотку в наименьшем разведении (без микробных тел). Все пробирки помещают в термостат при 37 оС до следующего дня.
|
|
|
Четвертый день исследования
Отмечают изменения во всех углеводных средах, образование индола, сероводорода, учитывается подвижность, каталазная проба. В этот же день учитывают результаты пробирочной реакции агглютинации. Основание для выдачи положительного ответа является обнаружение неподвижной грамотрицательной палочки, не сбраживающей лактозу и не образующей сероводород, ферментирующей глюкозу до кислоты. При этом обязательно указывают вид и тип выделенного штамма.
Самостоятельная работа студентов
1. Микробиологический диагноз дизентерии.
А. Познакомиться с классификацией шигелл, а также со схемой исследования при дизентерии.
Б. Изучить характер роста шигелл на средах Левина, Плоскирева, Олькеницкого.
|
|
|
В. Знать ход исследования испражнений при диагностике дизентерии:
а) 1-й день – сделать посев на среды Левина и Плоскирева;
б) 2-й день – изучить посевы на чашках, отобрать изолированные колонии, посеять на среду Ресселя или Клиглера;
в) изучить биохимическую активность культуры на среде Ресселя;
г) поставить ориентировочные реакции агглютинации со специфическими монорецепторными дизентерийными сыворотками;
д) полученные данные занести в протокол.
2. Серологическая диагностика дизентерии:
а) изучить серологический метод исследования при дизентерии;
б) полученные данные занести в протокол.
Выполненную работу и полученные результаты оформить в виде протокола по схеме:
| Дата | Что сделано | Результаты исследования |
| 1-й день | Посев исследуемого материала | |
| 2-й день | Бактериологическое исследование Серологическое исследование | |
| 3-й день |
Заключение:
ХОЛЕРА
Холера – это острая антропонозная карантинная кишечная инфекция. Высокая заразительность приводит к развитию эпидемии и пандемии. Для их предотвращения проводят специальные санэпидемиологические мероприятия, устанавливают особый режим в очаге. Для холеры характерен тяжелый обезвоживающий понос с испражнениями в виде рисового отвара и нарушением водно-солевого обмена.
Цель занятия: выработать навыки лабораторного анализа холеры.
Знать:
- основных возбудителей холеры;
- биологию возбудителей;
- эпидемиологию заболевания;
- лабораторную диагностику;
- профилактику и терапию заболевания.
Уметь:
- оценить полученные лабораторные данные.
| Раздел | Вопросы для изучения |
| Биология возбудителя холеры | 1. Таксономическое положение: Семейство Vibrionaceae, род Vibrio, вид V.cholera, V.eltor 2. Морфологические свойства: Изогнутые палочки в виде запятой, подвижные. 3. Тинкториальные свойства: Гр- палочки. 4. Тип дыхания: аэробы. 5. Элективные питательные среды: а) щелочной агар; б) щелочная пептонная вода; 6. Культуральные свойства. Рост на щелочном агаре через 12 часов в виде голубоватых колоний, рост в пептонной воде через 5 часов в виде пленки. 7. Биохимические свойства: Оксидаза +, глюкоза К, разжижает желатин, на средах триады Хейберга (маннит К, сахарозаК, арабиноза -) относится к 1 группе. 8. Антигенные свойства: Групповой 0-соматический, общий для вида – Н жгутиковый антиген. 9. Определение серогруппы по 0-антигену. Возбудитель относится к 01 серогруппе. 10. Серовары холерного вибриона: Инаба, Огава, Гикошима. 11. Биовары холеровибриона: а) классический; б) Эль-Тор. 12. Факторы вирулентности: Экзотоксин (холероген) вызывает нарушения водно-солевого обмена, цитотоксическое действие, вызывающее гибель эпителия тонкой кишки. Эндотоксин – угнетение фагоцитоза, понижение кровяного давления; инфекционно-токсические явления Пили – адгезия к клеткам слизистой Фибринолизин, гиалуронидаза – ферменты агрессии. |
| Эпидемио-логия, патогенез | Источник инфекции – больной человек, носитель и реконвалесцент. Пути заражения: водный, алиментарный, контактно-бытовой. Клинические варианты болезни: 1) энтерит; 2) гастроэнтерит; 3) алгид (полное обезвоживание). |
| Микробио-логическая диагнос- тика | Основные методы диагностики 1. Бактериологическое исследование в лаборатории особо опасных инфекций (36 часов). 2. Иммуноиндикация – РИФ. 3. Генетические методы ДНК – зондирование. 4. Серологическое исследование – р. агглютинации, лизиса – ретроспективная диагностика. При подозрении на холеру от больного берут фекалии и рвотные массы. Из объектов окружающей среды обследуют воду и остатки пищи. 1 этап – первичный посев в пептонную воду и на щелочной агар. 2 этап – просмотр роста в пептонной воде (через 8 часов). При наличии пленки – микроскопия мазка по Граму и фазово-контрастная микроскопия препарата «висячей капли» (для оценки подвижности). Ориентировочная реакция агглютинации с 01-холерной сывороткой – выдача ориентировочного ответа. Если роста нет – повторный высев в щелочную пептонную воду – просмотр посева на щелочном агаре (через 12 часов). Отбор подозрительных колоний, микроскопия мазка по Граму, тест на оксидазу, реакция агглютинации с 01-холерной сывороткой, накопление чистой культуры. Если нет роста на щелочном агаре и в пептонной воде после повторного пересева или отрицательная реакция агглютинации с 01-холерной сывороткой, выдается отрицательный ответ. 3 этап – проверка чистоты накопленной культуры, постановка биохимических тестов и пробы с фагами, полимиксином, тест на гемолизин. 4 этап – окончательный учет результатов, постановка реакции агглютинации с сыворотками Инаба, Огава. Выдача окончательного ответа. |
|
|
|
|
|
|
Полная схема идентификации включает дополнительно тесты на определение биоваров: гемагглютинации, чувствительности к лимиксину, гемолиза по Грейгу, реакции Фогеса-Проскауэра. Для подтверждения принадлежности холерных вибрионов к серогруппе 0139 достаточно положительного результата в слайд-агглютинации.
Культуры, имеющие признаки вибрионов по морфологии, тесту на индофенолоксидазу и ферментативной активности на полиуглеводной среде, не агглютинирующиеся на стекле холерными сыворотками 01 и 0139 серогрупп, выделенные от больных острыми кишечными инфекциями, изучают по тестам, определяющим принадлежность к роду Vibrio и виду V. choleiae и в пробе с диагностическими фагами.
Через 36-48 ч от начала исследования учитывают результаты идентификации и выдают окончательный ответ о выделении культуры холерного вибриона соответствующей серогруппы.. На культуры, имеющие характерные для вибрионов морфологические и культуральные признаки, относящиеся к первой группе по Хейбергу (манноз а +, сахароз а +, арабиноз а -), агглютинирующиеся сывороткой серогруппы 01 и вариантспецифическими сыворотками (Инаба, Огава) не менее чем до ½ титра, лизирующихся и нелизирующихся холерным и эльтор-фагами, а также на культуры, агглютинирующиеся сывороткой 0139, выдают окончательный ответ. Для холерных вибрионов 01 серогруппы указы вают биовар на основании чувствительности к одному из диагностических фагов(эльтор или холеры) и (или) по дополнительным признакам для фагорезистентных культур. Культуры холерных вибрионов 01 и 0139 изучают по гемолитической активности в пробе Грейга и чувствительности к антибиотикам, используемым в клинической практике для лечения холеры. Токсигенные штаммы холерных вибрионов 01 и 0139 серогрупп не лизируют эритроциты барана, в отличие от гемолизпозитивных нетоксигенных штаммов.
|
|
|
