 |
Схема лабораторной диагностики при дифтерии
|
|
|
|
| Материал | Метод исследования | Результаты |
| Слизь из зева и носа, пленки, налеты с миндалин | Бактериоскопический. Материал берут двумя стерильными ватными тампонами, один используют для приготовления микропрепарата, другой для посева. Мазки окрашивают по Нейсеру и метиленовым синим. Метод имеет ориентировочное зна-чение. Бактериологический. Материал засевают на одну из из элективных сред: сывороточную Клауберга II хинозоловую. На этих средах задерживается рост кокков и др. микрофлоры зева. На второй день из подозрительных колоний делают мазки, окрашивают по Нейссеру и отсевают на скошенный сывороточный агар для выделения чистой культуры. На третий день проводят идентификацию чистой культуры по следующим тестам: 1. Определение токсигенности методом диффузной преципитации в агаре; 2. Определение фермента цистиназы (проба Пизу); 3. Определение уреазной активности – посев в среду с мочевиной и индикатором крезолрот (проба Закса). На этом этапе дают положительный ответ, но исследование продолжают. 4. Посев на углеводы: глюкозу, мальтозу, крахмал, гликоген. Выдача окончательного ответа. | Коринебактерии дифтерии располагаются под углом друг к другу в виде буквы «V» зерна волютина находятся по полюсам палочек. При окраске по Нейссеру тело палочки окрашивается в желтый цвет, а зерна волютина в черный цвет. Дифтероиды не имеют зерен волютина, а сами палочки расположены параллельно. На свернутой сыворотке мелкие круглые колонии кремового цвета с уплотнением в центре. На среде Клауберга тип gravis образует крупные с радиальной исчерченностью серого цвета колонии; тип – mitis круглые, выпуклые колонии черного цвета. Исследуемая культура образует линии преципитации в агаре. Расщепляет цистин – по ходу укола почернение среды. Не образует уреазу – среда не изменяет цвет. Дифтероиды выделяют уреазу, среда с мочевиной окрашивается в розовый цвет. Тип gravis расщепляет глюкозу, мальтозу, крахмал и гликоген до кислоты, тип mitis полисахариды не ферментирует. |
|
|
|
Определение токсикогенности дифтерийных коринебактерий
Токсигенность определяют методом диффузной преципитации в агаре по Оухтерлони. Для этого на чашку с сывороточным агаром накладывают полоску фильтровальной бумаги, пропитанную дифтерийной антитоксической сывороткой. Рядом с полоской бумаги засевают выделенную культуру в виде «бляшек». Если культура токсигенна, то через 24-48 часов диффундирующий в питательную среду токсин и антитоксическая сыворотка образуют линии преципитации белого цвета.
Ускоренные методы микробиологической диагностики дифтерии
В качестве ускоренного метода диагностики применяется реакция иммунофлюоресценции (РИФ).
Препараты для специфической профилактики и терапии
Плановая профилактика проводится дифтерийным анатоксином, который входит в состав вакцины АКДС.
Для экстренной профилактики и лечения используют противодифтерийную антитоксическую сыворотку.
Антибиотики: эритромицин, олеандомицин, тетрациклин.
Вопросы для обсуждения
1. Общая характеристика и классификация коринебактерий.
2. Источник заражения, пути передачи инфекции, патогенез заболевания.
3. Материал для исследования, методы лабораторной диагностики.
4. Бактериологический метод исследования дифтерии.
5. Характеристика экзотоксина и метод определения токсикогенности дифтерийной палочки.
6. Специфическая профилактика и терапия дифтерии.
Самостоятельная работа студентов
1. Микроскопия демонстрационного препарата дифтерийной палочки в чистой культуре, окрашенного по Нейссеру.
|
|
|
2. Окраска готовых микропрепаратов уксуснокислым метилвиолетом, микроскопия.
3. Изучение бактериологического метода исследования при дифтерии с последующей идентификацией возбудителя:
а) характер роста на сывороточных и теллуритовых средах;
б) определение токсигенности методом диффузной преципитации в агаре по Оухтерлони;
в) реакции на цистиназу (проба Пизу);
г) реакция на уреазу (проба Закса);
д) ферментация моно- и полисахаридов.
4. Изучение препаратов, применяющихся для диагностики, специфической профилактики и лечения дифтерии.
5. Выполненную работу оформить протоколом по следующей схеме, отметить полученные результаты.
Протокол бактериологического исследования материала при дифтерии
| Дата | Ход исследования | Результаты |
| 1 день | 1. Посев пленок из зева на сывороточный агар, среду Клауберга, хинозоловый агар. | |
| 2 день | 2. Изучение подозрительных на дифтерию колоний. 3. Пресев на сывороточный скошенный агар для выделения чистой культуры. | |
| 3 день | 4. Изучение и идентификация чистой культуры: а) мазок, окраска по Нейссеру; б) изучение токсикогенности; в) изучение цистиназы; г) посев в столбики с глюкозой, мальтозой, сахарозой, крахмалом, гликогеном. | |
| Вывод: |
Зарисовать микропрепарат дифтерийной палочки, окрашенной по Нейссеру и уксуснокислым метилвиолетом. Зарисовать на чашке Петри с методом определения токсигенности дифтерийной палочки.
Туберкулез
Туберкулез - инфекционное заболевание человека и животных с наклонностью к хроническому течению, характеризующееся образованием специфических воспалительных изменений (бугорков) с преимущественной локализацией в легких.
Цель занятия: овладеть навыком оценки микробиологической диагностики туберкулеза.
Знать:
- биологию возбудителей;
- патогенез заболевания;
- эпидемиологию туберкулеза;
- лабораторную диагностику заболевания.
Уметь:
- интерпретировать результаты лабораторных исследований;
- подобрать препараты для специфической профилактики и терапии туберкулеза.
| Раздел | Вопросы для изучения |
| Таксономия | Семейство Mycobacteriaceae род Mycobacterium. Виды микобактерий – возбудители туберкулеза человека: M.tuberculesis, M.bovis, M.avium, M.muris. |
| Биологические свойства | Морфологические свойства – палочки. Тинкториальные свойства. Окраска по Цилю-Нильсену. Особенность строения стенки – большое количество липидов, что придает кислотоустойчивость. Культуральные свойства – растут очень медленно: M.tuberculesis 28 дней, M.bovis и M.avium до 35 дней и M.muris – 26 дней. Возбудители туберкулеза дают преимущественно R-формы колонии (шероховатые, приподнимающиеся, с неровным краем, беспигментные) Биохимические тесты: пероксидазная активность, каталазная активность, ниациновый тест, редукция нитратов, никотинамидная активность. |
| Факторы вирулентности | Токсические компоненты клетки возбудителей туберкулеза: (воск Д, мураминопептид, тригалозодимиколат, фтионовые кислоты, сульфатиды) и протеин имеют значение в развитии специфических поражений тканей, гликопептид (корд-фактор) разрушает митохондрии клеток. |
| Патогенез, клиника. Что такое первичный туберкулезный комплекс и когда он образуется? Что такое вторичный туберкулез? | Клинические формы туберкулеза: а) по локализации – туберкулез легких, туберкулез почек, костно-суставной туберкулез, туберкулезный менингит; б) по характеру поражения: миллиарный, инфильтративный, лобарная пневмония, диссеминированный, кавернозный, фиброзно-кавернозный туберкулез. |
| Иммунитеты | Типы иммунного ответа при туберкулезе: а) клеточный – основной механизм защиты; б) гуморальный – выработка АТ не коррелирует с напряженностью иммунитета; Особенности иммунитета при туберкулезе: а) нестерильный; б) неустойчивый; в) клеточный; г) аллергический. Большое значение имеет антимикробная резистентность при туберкулезе: активность фагоцитов и система комплемента. |
| Микробиоло-гическая диагностика | Методы микробиологической диагностики туберкулеза: Бактериоскопический: а) иммерсионная микроскопия мазков, окрашенных по Цилю-Нильсену; б) люминесцентная микроскопия мазков, обработанных флюорохромами. Бактериологический: Посев на питательные среды (Петрова, Павловского, Сотона, Гельбера). Метод микрокультур Прайса. Серологический. Аллергический (проба Манту с туберкулином). Какой из методов используют для широкого обследования населения? Аллергический. Какой из методов наиболее прост в условиях лаборатории? Бактериоскопический, но имеет ориентировочное значение. Ускоренным методом является метод Прайса (метод микрокультур). Серодиагностика. Используются: а) непрямая РИФ; б) РПГА с эритроцитарным диагностикумом из фосфатидных антигенов микобактерий; в) РПГА с протеиновыми эритроцитарными диагностикумами. У кого может быть положительная проба Манту? У больных, у вакцинированных, при бытовом инфицировании. |
| Специфическая профилактика | Специфическая профилактика туберкулеза проводится живой вакциной БЦЖ. Ранние сроки первичной вакцинации необходимы, чтобы авирулентный штамм живой вакцины прижился в организме и создал нестерильный иммунитет. Ревакцинацию проводят лицам с отрицательной реакцией Манту. |
| Этиотропная терапия | Средства противотуберкулезной терапии: а) ПАСК; б) ГИНК; в) тубазид и фтивазид; г) антибиотики резерва (рифампицин и др.). |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
