 |
2. Реакция гиперчувствительности замедленного типа 2.1.Туберкулиновая проба (тест, установленный для целей международной торговли) 2.1.1. Процедура тестирования
|
|
|
|
2. Реакция гиперчувствительности замедленного типа 2. 1. Туберкулиновая проба (тест, установленный для целей международной торговли) 2. 1. 1. Процедура тестирования
i) Важно корректно выполнить инъекцию. Место инъекции необходимо очистить от волос и продезинфицировать. Складку кожи на выбритом участке измеряют при помощи штангенциркуля, и на месте инъекции ставят отметку. Градуированный шприц с короткой иглой, скошенный край которой направлен наружу, наполненный туберкулином, под наклоном вводят в глубокие слои кожи. Затем вводят дозу туберкулина. Можно воспользоваться многодозовым шприцом или шприцом-пистолетом для многократных инъекций, при условии, что соблюдены все меры безопасности и обеспечена подача необходимого объема препарата. Доза вводимого туберкулина должна составлять не менее 2000 МЕ туберкулина для КРС и птиц. Правильное введение подтверждается пальпированием небольшой припухлости в виде горошины на каждом участки инъекции. Расстояние между двумя инъекциями должно быть примерно 12 – 15 см. Молодым животным, которым нет возможности сделать инъекции на достаточном расстоянии друг от друга на одной стороне шеи, необходимо делать по одной инъекции на обеих сторонах шеи в одинаковых участках в центре средней трети шеи. Толщину складок кожи на месте каждой инъекции измеряют через 72 часа после инъекции. Тот же специалист должен измерять кожу до инъекции и во время считывания результатов теста.
ii) Было разработано несколько альтернативных методов интерпретации ответных реакций на кожную пробу, с учетом того факта, что ложноположительные реакции могут быть вызваны восприимчивостью к другим микобактериям и местным воспалением. Важно осознавать, что между чувствительностью и специфичностью есть баланс, и максимально совпадающих значений можно и не получить. Необходимо внедрять в практику подходящие стратегии в зависимости от превалентности болезни и в соответствии с риском (например, наличие резервуара болезни в дикой природе).
|
|
|
iii) При интерпретации результатов внутрикожной сравнительной пробы, реакцию считают положительной в том случае, если толщина кожи на участке инъекции туберкулина для КРС больше, чем на 4 мм превышает толщину, отмеченную при реакции в месте инъекции туберкулина для птиц. Реакцию считают неубедительной, если толщина кожи на участке инъекции бычьего туберкулина больше, чем при реакции в случае инъекции туберкулина для птиц (с разницей менее 4 мм). Реакция считается отрицательной, если толщина кожи на участке инъекции туберкулина для
КРС менее или равна толщине кожи в месте введения туберкулина для птиц. Эта схема интерпретации используется в странах Европейского Союза и рекомендована Директивой Совета 64 / 432 / ЕЕС (ЕС, 1980). Иногда используется более строгая интерпретация.
iv) Для пробы в каудальной складке хвоста используется короткая игла, которую вводят под наклоном скошенным краем наружу в глубокие слои кожи, посредине длины складки и посредине между линией волос и вентральной частью складки. Стандартная интерпретация такова, что любое пальпируемое или видимое изменение считается реакцией. Используется также модифицированная интерпретация: положительная проба – это любая видимая или пальпируемая припухлость на месте инъекции, толщина которой на 4 мм отличается от толщины на противоположной каудальной складке. При наличии у животного только одной каудальной складки пробу считают положительной, если толщина этой складки 8 мм или больше.
3. 1. Гамма-интерферонный анализ
|
|
|
3. 2. Реакция пролиферации лимфоцитов
3. 3. Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА)
Стандартный метод обнаружения туберкулеза КРС – туберкулиновая проба, которая представляет собой внутрикожную инъекцию очищенного протеинового деривата туберкулина (ППД) для КРС и последующее образование припухлости (гиперчувствительность замедленного типа) на месте инъекции через 72 часа. Тест
можно проводить с использованием как одного лишь туберкулина для КРС, или в качестве сравнительного теста, используя туберкулин и для птиц, и для КРС. Туберкулиновую пробу обычно ставят на средней части шейного отдела, также ее можно ставить в каудальной складке хвоста. Кожа шеи более чувствительна к туберкулину, чем кожа каудальной складки. Для того чтобы компенсировать эту разницу, для каудальной складки можно использовать более высокие дозы туберкулина.
Замедленная гиперчувствительность может не проявляться в течение 3-6 недель после инъекции. Следовательно, если есть подозрение, что стадо\животные недавно контактировало с зараженными животными, необходимо предусмотреть возможность отсрочить тестирование, чтобы свести к минимуму вероятность ложноотрицательных результатов. Поскольку чувствительность теста составляет менее 100%, то маловероятно, что искоренить туберкулез в стаде удастся только лишь с помощью одной туберкулиновой пробы. Необходимо признать, что при использовании на хронически зараженных животных с тяжёлыми патологическими изменениями, туберкулиновая проба может и не дать никакой ответной реакции. Туберкулиновая проба не валидирована надлежащим образом для большинства видов, не относящихся к бычьим и оленьим.
Сравнительная внутрикожная туберкулиновая проба используется с целью дифференциации животных, инфицированных M. bovis и животных, реагирующих на туберкулин для КРС в результате воздействия других микобактерий. Сенсибилизацию можно объяснить антигенной перекрестной реактивностью среди различных видов микобактерий и связанных с ними родов. При проведении теста туберкулин для КРС и птиц вводят внутрикожно в разные участки, обычно на одной стороне шеи, оценивая ответ через 3 дня.
|
|
|
Иммуногенность туберкулинов может быть оценена с помощью биологических методов, основанных на сравнении со стандартными туберкулинами, иммуногенность выражается в международных единицах (МЕ). В некоторых странах иммуногенность туберкулина для КРС считается приемлемой в том случае, если оцененная иммуногенность обеспечивает дозу для одного животного (КРС), как минимум 2000 МЕ (±25%). Для КРС с пониженной аллергической чувствительностью необходима более высокая доза туберкулина для КРС, а для проведения национальных кампаний
по искоренению рекомендуются дозы до 5000 МЕ. Объем каждой дозы для инъекции не должен превышать 0, 2 мл.
Интерпретация основана на наблюдении и на зарегистрированных увеличениях толщины складок кожи. При постановке единичной внутрикожной туберкулиновой пробы (для которой требуется однократная инъекция туберкулина для КРС) реакцию обычно считают отрицательной, только если наблюдается ограниченная припухлость, с увеличением не более 2 мм и без клинических признаков (таких, как обширный или диффузный отек, экссудация, некроз, боль или воспаление лимфатических каналов в этом участке или, воспаление лимфатических узлов).
Реакция считается неокончательной, если не наблюдается ни один из этих клинических признаков, и если увеличение толщины складки кожи более 2 мм и менее 4 мм. Реакция считается положительной, если наблюдаются клинические признаки, упомянутые выше, и если толщины складки кожи увеличена более чем на 4 мм. Более того, в стадах, инфицированных M. bovis, любая прощупываемая или видимая припухлость должна рассматриваться как положительный результат.
Иногда используется более строгая интерпретация, особенно для популяции высокой степени риска, или для контактных животных. Животных, по которым нельзя однозначно судить после однократной туберкулиновой пробы, следует тестировать еще раз с интервалом 42 дня, чтобы прошла десенсибилизация (в некоторых регионах 60 дней для КРС и 120 дней для оленей). Животных, не являющихся отрицательными при проведении второй пробы, следует считать положительными. Животные, которые являются положительными при проведении однократной туберкулиновой пробы, могут пройти сравнительную внутрикожную пробу или анализ крови. Повторное тестирование можно проводить в соответствии со стандартными национальными и местными контрольными программами.
|
|
|
