 |
В. Диагностические методы. 1. Идентификация возбудителя 1. 2. Бактериология (микроскопия) 1. 3. 1. Среды. 1. 1. Аутопсия
|
|
|
|
В. ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
Таблица 1. Методы исследования, доступные для диагностики паратуберкулеза и их назначение
1 Рекомендуется комбинация методов идентификации возбудителя, применяемых на одном и том же клиническом образце.
2 Рекомендуется комбинация перечисленных серологических исследований.
1. Идентификация возбудителя 1. 2. Бактериология (микроскопия) 1. 3. 1. Среды
Объяснение: +++ = рекомендуемый метод; ++ = подходящий метод; + = может использоваться в некоторых ситуациях, но затраты, надежность или другие факторы значительно ограничивают его применение; - = не подходит для этих целей; * = только при аутопсии; ** = подходит для использования у овец и коз; Хотя не все исследования, перечисленные в категории +++ или ++ не прошли официальную валидацию, их рутинный характер и тот факт, что они широко используются без сомнительных результатов, делает их пригодными; ЦН = Циль-Нильсен; ПЦР = полимеразная цепная реакция; AGID = реакция иммунодиффузии в агаровом геле; ИФА = иммуноферментный анализ; РСК = реакция связывания комплемента; ГЗТ = гиперчувствительность замедленного типа.
С целью диагностирования присутствия паратуберкулеза у отдельного подозрительного с клинической точки зрения животного можно использовать ряд лабораторных тестов,
включающих: фекальные мазки, культивирование фекалий и тканей, ДНК-зонды с использованием фекалий или тканей, серологические методы, аутопсию и гистологию (Таблица 1).
Тесты по обнаружению субклинической инфекции на уровне стада проводятся с целью определения распространённости инфекции обычно для того, чтобы можно было применить меры по борьбе с болезнью. Поскольку ни один тест не является на 100% чувствительным или специфичным, борьба с болезнью путём уничтожения животных - бациллоносителей зависит от проведения повторных тестов с 6-месячным или годовым интервалом в течение ряда лет, и ликвидации животных с положительной реакцией в серологических тестах или животных, выделяющих организмы с фекалиями. Благоразумным можно считать также уничтожение потомства от маток с положительной реакцией. Даже эти процедуры не всегда являются успешными без внесения изменений в практики гигиены и содержания сельскохозяйственного скота с целью снижения уровня передачи инфекции в пределах стада. Схожие стратегии исследования с повторяющимися тестами на уровне стада также можно применять в рамках контрольных программ по оценке возможности благополучия по инфекции на уровне стада, тем самым идентифицируя стада с более низким риском в целях безопасной торговли.
|
|
|
1. 1. Аутопсия
Паратуберкулез не может быть диагностирован на основе поверхностного обследования кишечника на наличие признаков утолщения. Кишечник должен быть вскрыт от двенадцатиперстной кишки до прямой с целью обнажения слизистой оболочки. Не всегда существует тесная корреляция между тяжестью клинических признаков и степенью кишечных поражений. Слизистая оболочка, особенно конечной части подвздошной кишки, осматривается на наличие характерных для данной болезни признаков утолщения и сморщивания. Ранние поражения видны при просматривании кишечника на свет, когда можно различить разрозненные бляшки. Гиперемия слизистой оболочки, эрозии и петехиальное кровоизлияние наблюдались у оленей, пораженных паратуберкулезом. Поражения на самой ранней стадии представляют собой утолщение и закручивание лимфатических протоков. Брыжеечные лимфоузлы обычно увеличены и отёчны. Казеозные и/или кальцифицированные поражения в брыжеечных лимфоузлах обычно наблюдаются у коз, и в меньшей степени у овец (Fodstad & Gunnarsson, 1979). Мазки с поражённой слизистой и срезанных поверхностей лимфоузлов необходимо окрашивать с использованием метода по Цилю-Нильсену и исследовать с помощью микроскопа на наличие кислотоустойчивых организмов, обладающих морфологическими характеристиками МАР. Однако кислотоустойчивые организмы не присутствуют во всех случаях. Поэтому диагноз лучше всего подтверждать путём сбора многочисленных образцов стенки кишечника и мезентериальных лимфоузлов в фиксатор (10% солевой раствор формалина) для последующего гистологического исследования. Необходимо изучать и срезы, окрашенные гематоксилином и эозином, и срезы, окрашенные по Цилю – Нильсену. Характерные для болезни поражения состоят из инфильтрации соединительного тканевого слоя слизистой оболочки, подслизистой оболочки, пейеровых бляшек и наличия в корковом слое брыжеечных лимфоузлов с крупными макрофагами, также известными как эпителиоидные клетки и многоядерные гигантские клетки, в которых, в тех и других, обычно, но не всегда, обнаруживают скопления кислотоустойчивых бацилл или отдельные кислотоустойчивые бациллы.
|
|
|
Окрашенные по Цилю – Нильсену мазки фекалий исследуют с помощью микроскопа. Диагноз паратуберкулез можно поставить, если обнаружены скопления (три или более организмов) небольших (0, 5-1, 5 мкм) кислотоустойчивых бацилл. Присутствие одиночных кислотоустойчивых бацилл в отсутствие скоплений является сомнительным диагнозом. Недостатком этого теста является то, что он не дифференцирует другие микобактериальные виды, и только небольшой процент случаев может быть подтвержден с помощью микроскопического исследования одного образца фекалий.
|
|
|
