 |
2.1. Характеристики посевного материала
|
|
|
|
2. 1. Характеристики посевного материала
2. 1. 1. Критерии качества
Культуры следует проверять с использованием метода окрашивания мазков на присутствие контаминирующих организмов.
В целях проверки отсутствия эффекта повышения чувствительности, каждой из трёх морских свинок, ранее не обработанных каким-либо материалом, который мог бы помешать проведению теста, вводили трижды интрадермальным способом с интервалом в 5 дней 0, 01 мг тестируемого препарата в объёме 0, 1 мл. Через 15 – 21 день после третьей инъекции каждой морской свинке, вместе с тремя контрольными морскими свинками, которым предварительно инъекции не делали, вводили интрадермально ту же самую дозу того же самого джонина. Реакции у двух групп морских свинок не должны значительно отличаться спустя 24 – 48 часов.
2. 1. 2. Валидация в качестве штамма
Штаммы МАР, используемые для приготовления посевных культур, должны быть идентифицированы посредством биотипирования или генетического анализа. Должно быть продемонстрировано, что они свободны от контаминирующих организмов.
2. 2. Метод производства
2. 2. 1. Процедура
Джонин для проведения кожной пробы представляет из себя очищенный белковый дериват, приготовленный из одного или более штаммов МАР. Его можно приготовить следующим образом.
Штаммы МАР выращивают в виде плёнки на жидкой среде Reid. Производственные культуры обычно инокулируются из жидких посевных культур, а не непосредственно из посевного материала на твёрдой среде (синтетическая среда Reid). Производственные культуры инкубируют при 37º С в течение 10 недель.
В конце инкубационного периода культуральная среда имеет рН около 5 и, если перед обработкой паром не повысить значение рН до 7, 3 с использованием гидроокиси натрия, можно получить небольшое количество джонина или вовсе не получить его. После тщательного перемешивания культуры в течение 3 часов обильно обрабатывают паром. Весь объём убитых организмов выводят с использованием грубой фильтрации и фильтрат осветляют последующей фильтрацией. Протеин в фильтрате преципитируют химическим способом с помощью 40% трихлоруксусной кислоты, отмывают и снова растворяют (щелочной растворитель). Продукт стерилизуют фильтрацией. Можно добавить антимикробный консервант, который не приводит к ложноположительным реакциям, такой как фенол (но не более 0, 5% [в/о]). Глицерин (не более 10% [в/о] можно добавлять в качестве стабилизатора. Продукт распределяют в асептических условиях по стерильным стеклянным контейнерам, которые затем герметично закрывают.
|
|
|
2. 2. 2. Контроль в процессе производства
После окончательной фильтрации проверяют стерильность раствора очищенного белкового деривата.
Стерильные фильтраты тестируют на содержание белка методом Kjeldahl (Британская ветеринарная фармакопея, 1985). Содержание белка в конечном продукте доводят до 0, 475-0, 525 мг/мл. Показатель рН должен быть в диапазоне 6, 5-7, 5.
2. 2. 3. Исследование партий готового продукта
i i) Стерильность
Исследования биологических материалов на стерильность и свободу от контаминации можно найти в Главе I. 1. 5. В традиционных тестах на стерильность вакцинный организм обычно не растёт до поддающегося обнаружению уровня.
i ii) Идентичность
Идентичность культуры проверяют окрашиванием по Цилю-Нильсену и ПЦР (см. Раздел В. 1. 4. )
i iii) Безопасность
Каждой из двух морских свинок вводят подкожно 0, 5 мл тестируемого джонина. В течение 7 дней не должно быть существенных местных или системных поражений (Британская ветеринарная фармакопея, 1985).
|
|
|
Тесты по определению влияния джонина на живых бактерий могут проводиться или на материале до того, как он будет распределён по конечным контейнерам, или на образцах, взятых непосредственно из конечных контейнеров. Следует отбирать образец объёмом, по меньшей мере, 10 мл и вводить его внутрибрюшинно или подкожно, по крайней мере, двум морским свинкам, поделив тестируемый объём равным образом между двумя свинками. Желательно брать более крупный образец, скажем 50 мл, и концентрировать остаточные микобактерии центрифугированием или мембранной фильтрацией. За морскими свинками наблюдают, по меньшей мере, в течение 42 дней, а затем проводят аутопсические исследования. Любые макроскопические поражения изучают с помощью микроскопа и культивирования.
i iv) Иммуногенность партии
Иммуногенность джонина в настоящее время определяют с помощью химического анализа белка с использованием метода Kjedahl. В соответствии с рекомендацией содержание очищенного белкового деривата должно составлять 0, 5±0, 025 мг/мл в конечном продукте (Британская ветеринарная фармакопея, 1985).
2. 3. Требования к авторизации/регистрации/лицензированию
Для джонина используемый фенол должен составлять не более 0, 5% (в/о). Концентрацию консерванта в конечном продукте и его персистентность следует проверять в течение всего срока хранения
|
|
|
