 |
Анализ жирных масел
|
|
|
|
Задание 1. Проведите количественное определение липидов
в образце лекарственного растительного сырья. Запишите в лабораторном жур нале результаты анализа.
Методы количественного определения липидов сводятся к выделению их путем обработки сырья органическим ра-створителем. В качестве растворителя используют гексан, этиловый или петролейный эфир, хлороформ, хлористый метилен и другие низкокипящие растворители.
Извлечение липидов проводят в аппарате Сокслета (рис. 3. 2), который состоит из трех частей: приемной кол-бы, собственно экстрактора и холодильника. На экстрак-торе имеются две трубки: одна служит для отвода паров растворителя из приемника; вторая — является сифоном, по которому экстракт, содержащий липиды, переливается
в приемную колбу.
Методика. На аналитических весах взвешивают пакет из фильтровальной бумаги и заворачивают в него 5, 0 г предварительно взвешенного на ручных весочках измель-ченного сырья. Пакет с сырьем взвешивают на аналити-ческих весах, а затем помещают в экстрактор. Перед тем как собрать прибор, необходимо также взвесить на анали-тических весах приемную колбу, высушенную до постоян-ной массы.
После соединения всех частей аппарата через холодиль-ник наливают растворитель до тех пор, пока жидкость не перельется через сифон в приемник, а затем в экстрактор еще доливают растворитель примерно на 1/3 объема.
Приемник с растворителем нагревают на кипящей во-дяной бане. Пары растворителя поднимаются по трубке в холодильник, конденсируются и стекают в экстрактор на пакет с сырьем. Когда экстрактор наполняется жидко-стью до высоты сифона, жидкость сливается в приемник. Весь этот процесс продолжается до полноты извлечения жирного масла.
|
|
|
NB! Извлечение необходимо проводить осторожно, не нагревая растворитель выше 60 °С. Он должен
| Анализ жирных масел | 6 5 | |
кипеть равномерно, так как при сильном нагревании часть паров растворителя не успевает конденсироваться в холодильнике и улету-чивается.
Полноту извлечения жиров определяют по отсутствию жирного пятна на фильтровальной бумаге от нескольких капель извлечения.
По достижении полноты извлечения растворитель отгоняют. Приемную колбу с содержимым высушивают в сушильном шкафу при 90—95 °С до по-стоянной массы и взвешивают. Зная массу пустого приемника и приемника с жиром, вычисляют содержание липидов Х, %, в сырье по формуле
(А – Б) . 100
Х = ————————,
В
где А — масса приемника с жиром, г;
Б — масса пустого приемника, г; В — навеска сырья, г.
Задание 2. Проведите органолептический анализ образца жирного масла, испытания на подлинность и на чистоту. Запишите в лабораторном журнале ваши наблюдения и сделайте вывод по результатам анализа.
Органолептический контроль жирных масел осуществляется по общей фар-макопейной статье «Масла жирные — Olea pinguia». При исследовании жирных масел определяют цвет, запах, вкус, растворимость и числовые показатели.
Опыт 1. Описание. Прозрачные, обычно более или менее окрашенные маслянистые жидкости без запаха или со слабым характерным запахом.
Жирные масла на бумаге оставляют жирное пятно, не исчезающее при нагревании, в отличие от пятен эфирных масел.
Методика. На лист фильтровальной бумаги стеклянной палочкой нано-сят одну каплю жирного масла и нагревают бумагу над электрической плит-кой. Пятно жирного масла при нагревании увеличивается в диаметре.
Опыт 2. Растворимость. Жирные масла практически нерастворимы
|
|
|
в воде, мало растворимы в спирте, легко — в эфире, хлороформе, петролей-ном эфире. Исключение составляет касторовое масло, легко растворимое
в спирте, трудно — в петролейном эфире. Эта особенность используется как показатель подлинности и доброкачественности касторового масла.
Методика. Навеску 1, 0 г жирного масла вносят в отмеренное количество растворителя и непрерывно встряхивают в течение 10 мин при 20±2 °С.
Для медленно растворимых препаратов, требующих для своего растворе-ния более 10 мин, допускается также нагревание на водяной бане до 30 °С. Наблюдения производят после охлаждения раствора до 20±2 °С и энергично-го встряхивания в течение 1—2 мин.
Препарат считают растворившимся, если в растворе при наблюдении
в проходящем свете не обнаруживаются капли масла.
Опыт 3. Установите подлинность касторового масла по растворимости.
В пробирку наливают 2 мл петролейного эфира, 4 мл касторового масла
и перемешивают в течение 10 мин. Должен образоваться прозрачный раствор, который мутнеет при дальнейшем прибавлении избытка петролейного эфира.
Опыт 4. Определите посторонние масла в касторовом масле по ГФ Х. Смешивают в пробирке равные объемы касторового масла и 96 %-ного
спирта при температуре 20 °С. Полное растворение касторового масла указы-вает на отсутствие посторонних масел.
Опыт 5. Парафин, воск, смолы. 1 мл масла нагревают с 10 мл 0, 5 м спир-тового раствора калия гидроксида при непрерывном взбалтывании. При этом
6 6 Тема 3. Липиды
омыление наступает очень быстро. Полученный прозрачный раствор не дол-жен мутнеть от добавления 25 мл воды.
Опыт 6. Перекиси, альдегиды (проба Крейса). 1 мл масла взбалтывают
в течение 1 мин с 1 мл кислоты хлористоводородной концентрированной, прибавляют 1 мл эфирного раствора флороглюцина (1: 1000) и перемешива-ют. Появление розового или красного окрашивания указывает на наличие разложившегося масла, присутствие которого не допускается.
Опыт 7. Мыла. Для жирных масел, не применяемых для приготовления инъекционных растворов, реакцию на присутствие мыла проводят следую-щим образом: 50 мл воды, смешанной с 10 каплями раствора фенолфталеи-на, кипятят в конической колбе вместимостью 250 мл в течение 1 мин, при этом раствор должен оставаться бесцветным. Затем к горячей воде приливают 5 г масла и кипятят еще 5 мин, после чего жидкость охлаждают до комнатной температуры, ставят на лист белой бумаги и прибавляют еще 10 капель рас-твора фенолфталеина. Полученный раствор должен быть бесцветным, что ука-зывает на отсутствие мыла или содержание его не более 0, 01 %.
|
|
|
Задание 3. Проведите качественные реакции на семенные и косточковыемасла и реакции подлинности рыбьего жира. Запишите наблюдения и вывод в лабораторный журнал.
Опыт 8. Реакция на семенные масла (реакция Беллиера). В пробирку на-ливают 2 мл исследуемого масла, осторожно наслаивают по 1 мл кислоты азотной (плотность 1, 4) и 0, 15 %-ного раствора резорцина в бензоле. Содер-жимое энергично перемешивают. Жирные масла, полученные из семян,
в течение 5 с дают красное или сине-фиолетовое окрашивание, которое быстро исчезает. При разделении слоев окраска переходит в бензольный слой.
Опыт 9. Реакция на косточковые масла (реакция Биберга). В пробирку помещают 2, 5 мл масла, осторожно добавляют 1 мл охлажденной смеси рав-ных объемов воды и кислот серной и азотной концентрированных.
Слабо-желтая окраска образовавшегося роствора указывает на миндаль-ное масло, красноватый цвет — на персиковое или абрикосовое масло.
Опыты 10—11. Реакции на рыбий жир. 0, 1 г жира растворяют в 1 мл хло-роформа и прибавляют 5 мл раствора сурьмы (III) хлорида; появляется не-стойкое голубое окрашивание (витамин А).
Раствор 1 капли жира в 1 мл хлороформа при взбалтывании с 1 каплей кислоты серной концентрированной окрашивается в сине-фиолетовый цвет, скоро переходящий в бурый (липохром).
Задание 4. В образце жирного масла или жира проведите определение плотности и показателя преломления. Рассчитайте результат, запишите его в лабора торный журнал, сравните с данными табл. 3. 1 и сделайте заключение о доброка чественности жирного масла.
|
|
|
Определение плотности. Метод 1. Метод применяют в случае определе-ния плотности жидкостей с точностью до 0, 001.
Методика. Чистый сухой пикнометр взвешивают до 0, 0002 г, заполняют с помощью маленькой воронки дистиллированной водой немного выше мет-ки, закрывают пробкой и выдерживают в течение 20 мин в термостате,
в котором поддерживают постоянную температуру воды 20 °С с точностью до 0, 1 °С. При этой температуре уровень воды в пикнометре доводят до метки, быстро отбирая излишек воды при помощи пипетки или свернутой в трубку полоски фильтровальной бумаги. Пикнометр закрывают пробкой и выдержи-вают в термостате еще 10 мин, проверяя положение мениска по отношению
| Анализ жирных масел | 6 7 | |
Т а б л и ц а 3. 1
Физические и химические показатели качества некоторых жиров
к метке. Затем пикнометр вынимают из термостата, фильтровальной бумагой вытирают внутреннюю поверхность горлышка, а также весь пикнометр сна-ружи, оставляют под стеклом аналитических весов в течение 10 мин и взве-шивают с той же точностью.
Пикнометр освобождают от воды, высушивают, споласкивая последова-тельно спиртом и эфиром, удаляя остатки эфира продуванием воздуха (су-
6 8 Тема 3. Липиды
шить пикнометр путем нагревания не допускается). Заполняют пикнометр образцом исследуемого жирного масла и затем производят те же операции, что и с дистиллированной водой.
Плотность ρ 20, г/см3, вычисляют по формуле
(m2 – m) . 0, 99703
ρ 20 = ——————————— + 0, 0012,
m1 – m
где m — масса пустого пикнометра, г;
m1 — масса пикнометра с дистиллированной водой, г;
m 2 — масса пикнометра с испытуемым образцом жирного масла, г; 0, 99703 — значение плотности воды при 20 °С (в г/см3 с учетом плотности
воздуха);
0, 0012 — плотность воздуха при 20 °С и барометрическом давлении
1011 гПа (760 мм рт. ст. ).
Метод 2. Применяют для определения плотности твердых жиров и воска. Методика. Точно взвешивают пустой пикнометр, затем взвешивают тот же пикнометр, заполненный дистиллированной водой. После этого воду уда-ляют и пикнометр высушивают. Все операции проводят, соблюдая условия,
указанные в методе 1.
В пикнометр вливают при помощью пипетки или небольшой воронки
с тонкооттянутым концом расплавленный жир или воск в таком количестве, чтобы он занимал 1/3—1/2 объема пикнометра. Пикнометр ставят на 1 ч без пробки в горячую воду, затем охлаждают до 20 °С и взвешивают; доводят до метки дистиллированной водой при 20 °С, вытирают насухо и вновь взвеши-вают. В обеих фазах на поверхности их раздела не должно быть пузырьков воздуха.
|
|
|
Плотность вычисляют по формуле
(m2 – m) . 0, 99703
ρ 20 = ————————————— + 0, 0012,
(m1 – m2) – (m + m3)
где m — масса пустого пикнометра, г;
m1 — масса пикнометра с дистиллированной водой, г;
m2 — масса пикнометра с жиром, г;
m 3 — масса пикнометра с жиром и водой, г.
Определение показателя преломления. Показатель преломления ntλ среды относительно воздуха равен отношению синуса угла падения луча света в воздухе к синусу угла преломления луча света в данной среде.
Показатель преломления (индекс рефракции) определяют при помощи рефрактометра. Показателем преломления называют отношение скорости рас-пространения света в воздухе к скорости распространения света в испытуе-мом веществе. Он зависит от природы вещества, температуры и длины волны света.
Методика. Рефрактометр имеет две призмы, одна из которых (верхняя) приподнимается. Перед проведением измерения на нижнюю призму наносят 1—2 капли жидкости, после чего опускают верхнюю призму и плотно ее прижимают. Пучок света с помощью зеркала направляют в верхнее окошко призмы. Наблюдая в окуляр, совмещают границу светотени со штрихом сет-ки. Для ахроматизации границы светотени служит компенсатор дисперсии. Отсчет показателя преломления производится с точностью до четвертого знака.
Перед каждым опытом рефрактометр необходимо проверять с помощью дистиллированной воды, имеющей показатель преломления 1, 3330 при 20 °С.
| Анализ жирных масел | 6 9 | |
Задание 5. Проведите анализ образца жирного масла методом тонкослойной хроматографии. Зарисуйте схему хроматограммы в журнал, сравните ее с типовой хроматограммой жирных масел (рис. 3. 3).
Рис. 3. 3. Типовая хроматограмма для идентификации жирных масел:
1 — арахисовое масло; 2 — оливковое масло; 3 — кунжутное масло; 4 — кукурузное масло; 5 — миндальное масло; 6 — соевое масло; 7 — подсолнечное масло; 8 — рапсовое масло; 9 — рапсовое масло (свободное от эруковой кислоты); 10 — масло зародышей пшеницы
Методика. В качестве тонкого слоя используют октадецилсилильный силикагель для высокоэффективной тонкослойной хроматографии.
Испытуемый раствор. Около 20 мг (одну каплю) жирного масла растворя-ют в 3 мл метиленхлорида.
Раствор сравнения. Около 20 мг (одну каплю) масла кукурузного раство-ряют в 3 мл метиленхлорида.
На линию старта хроматографической пластинки отдельно наносят по 1 мкл испытуемого раствора и раствора сравнения. Пластинку дважды хрома-тографируют на расстояние 0, 5 см, используя в качестве подвижной фазы эфир, и дважды хроматографируют на расстояние 8 см, используя в качестве подвижной фазы смесь растворителей: метиленхлорид—кислота уксусная ле-дяная—ацетон (20: 40: 50). Затем пластинку сушат на воздухе, опрыскивают раствором 100 г/л кислоты фосфорно-молибденовой в спирте, нагревают при температуре 120 °С в течение 3 мин и просматривают при дневном свете.
Задание 6. Проведите определение химических показателей качества образцажирного масла. Расчет результатов приведите в лабораторном журнале, сравните их
с данными табл. 3. 1 и сделайте заключение о доброкачественности жирного масла.
Химическими показателями качества жирных масел являются: кислотное
число, число омыления, эфирное, йодное в миллиграммах, гидроксильное и пере-кисное числа.
Кислотное число — количество калия гидроксида в миллиграммах, необ-ходимое для нейтрализации свободных кислот, содержащихся в 1 г масла. Оно показывает количество свободных кислот в исследуемом жире. По вели-чине кислотного числа судят о доброкачественности жира. Свежий жир сво-бодных кислот почти не содержит.
Методика. Около 10 г (точная навеска) жирного масла растворяют в 50 мл равных объемов спирта и эфира, предварительно нейтрализованного по фе-нолфталеину раствором калия гидроксида 0, 1 моль/л. Прибавляют 3—5 ка-пель фенолфталеина и титруют при постоянном помешивании раствором калия
7 0 Тема 3. Липиды
гидроксида 0, 1 моль/л до появления розового окрашивания, не исчезающего
в течение 15 с.
1 мл раствора калия гидроксида 0, 1 моль/л соответствует 5, 61 мг калия гидроксида.
Кислотное число IA вычисляют по формуле
5, 61 · n
IA = —————,
m
где n — количество раствора калия гидроксида 0, 1 моль/л, израсходованное на титрование, мл;
m — масса навески жира, г.
Если объем раствора калия гидроксида 0, 1 моль/л, пошедший на титро-вание, менее 2 мл, то соответствующим образом увеличивают массу навески испытуемого вещества или используют более разбавленный титрант (в по-следнем случае вносят соответствующие изменения в формулу расчета).
Число омыления — количество калия гидроксида в миллиграммах, необ-ходимое для нейтрализации свободных кислот и омыления сложных эфиров, содержащихся в 1 г исследуемого жира.
| Т а б л и ц а 3. 2 | Методика. Точную навеску жира (в соответ- | |
| ствии с табл. 3. 2) смешивают в колбе вместимос- | ||
| Выбор навески для определения | тью 200—250мл с 25 мл спиртового раствора ка- | |
| числа омыления | лия гидроксида 0, 5 моль/л. | |
| К колбе присоединяют обратный холодиль- | ||
| ник и погружают ее в кипящую водяную баню на | ||
| 30 мин, поддерживая легкое кипение. Конец омы- | ||
| ления определяют по образованию совершенно | ||
| прозрачного и однородного раствора, не изменя- | ||
| ющегося при разведении водой. Параллельно в тех | ||
| же условиях ставят контрольный опыт: в другой | ||
| колбе нагревают 25 мл спиртового раствора ка- | ||
| лия гидроксида 0, 5 моль/л без добавления жира. | ||
| К растворам сразу же после прекращения на- | ||
| гревания прибавляют 25 мл свежепрокипяченной | ||
| горячей воды, прибавляют 5 капель раствора фе- | ||
| нолфталеина и титруют раствором кислоты хло- |
ристоводородной 0, 5 моль/л до обесцвечивания. Из количества миллилитров раствора кислоты хлористоводородной 0, 5 моль/л, израсходованной в конт-рольном опыте, вычитают количество миллилитров раствора кислоты хло-ристоводородной 0, 5 моль/л, пошедшей на титрование исследуемого образ-ца жира.
1 мл раствора калия гидроксида 0, 5 моль/л содержит 28, 05 мг калия гид-роксида.
Число омыления IS вычисляют по формуле
28, 05 · (n1 – n2)
IS = —————————,
m
где n1 — количество раствора кислоты хлористоводородной 0, 5 моль/л, из-расходованное на титрование контрольного опыта, мл;
n2 — количество раствора кислоты хлористоводородной 0, 5 моль/л, из-расходованное на титрование испытуемого образца, мл;
m — масса навески жира, г.
Полученные результаты сравнивают с данными табл. 3. 1 и делают вывод
о качестве анализируемого образца жирного масла.
|
|
| Т а б л и ц а 3. 3 |
| Выбор навески |
| для определения йодного числа |
| Анализ жирных масел | 7 1 | |
Эфирное число — количество калия гидроксида, в миллиграммах, необ-ходимое для омыления эфиров, содержащихся в 1 г исследуемого вещества.
Эфирное число IE вычисляют по формуле
IE = IS – IA,
где IS — число омыления;
I A — кислотное число.
Йодное число — количество галогена в пересчете на йод, в граммах, кото-рое присоединяется по месту двойных связей ненасыщенных жирных кислот
в 100 г испытуемого вещества в описанных условиях. Йодное число показыва-ет содержание ненасыщенных жирных кислот в 100 г жира.
Методика 1. Навеску вещества (в соответствии с табл. 3. 3) помещают в сухую колбу с притертой пробкой вместимостью 250 мл, растворяют в 15 мл хлороформа, если нет других указаний в част-ной статье. К полученному раствору медленно при-бавляют 25 мл раствора йода бромида.
Колбу закрывают пробкой и выдерживают
в темном месте при частом перемешивании в те-чение 30 мин, если нет других указаний в частной статье. Прибавляют 10 мл раствора 100 г/л калия йодида, 100 мл воды и титруют раствором натрия тиосульфата 0, 1 моль/л при интенсивном переме-шивании до светло-желтой окраски, затем при-
бавляют 5 мл раствора крахмала и титруют раствором натрия тиосульфата 0, 1 моль/л по каплям до обесцвечивания.
Параллельно проводят контрольный опыт. Йодное число II вычисляют по формуле
1, 269 · (n2 – n1)
II = —————————,
m
где n2 — количество раствора натрия тиосульфата 0, 1 моль/л, израсходован-ное на титрование в испытуемом растворе, мл;
n1 — количество раствора натрия тиосульфата 0, 1 моль/л, израсходован-ное на титрование в контрольном опыте, мл;
m — масса навески вещества, г.
Допускается проводить определение йодного числа по методике 2. Методика 2. Навеску испытуемого вещества (в соответствии с табл. 3. 3)
помещают в сухую колбу с притертой пробкой вместимостью 250 мл, раство-ряют в 3 мл эфира, если нет других указаний в частных статьях, медленно прибавляют 20 мл раствора йода хлорида.
Колбу закрывают пробкой, смоченной раствором 10 г/л калия йодида,
и выдерживают в темном месте при частом перемешивании в течение 1 ч, если нет других указаний в частной статье. Прибавляют 10 мл раствора 10 г/л калия йодида, 50 мл воды и титруют раствором натрия тиосульфата 0, 1 моль/л при постоянном интенсивном перемешивании до светло-желтой окраски, затем прибавляют 3 мл эфира, интенсивно перемешивают, прибавляют 5 мл раствора крахмала и титруют раствором натрия тиосульфата 0, 1 моль/л по каплям до обесцвечивания.
Параллельно проводят контрольный опыт. При анализе твердых жиров навеску растворяют в 6 мл эфира, прибавляют 20 мл раствора йода хлорида 0, 1 моль/л. Дальнейшее определение проводят, как указано выше.
7 2 Тема 3. Липиды
Полученные результаты сравнивают с данными табл. 3. 1 и делают вывод о доброкачественности исследуемого образца жирного масла.
Гидроксильное число — количество миллиграммов калия гидроксида, эквивалентное количеству килоты, которое связывается при ацетилирова-нии 1 г вещества. Методика определения гидроксильного числа изложена в теме «Эфирные масла».
Перекисное число — количество миллиэквивалентов активного кислоро-да, соответствующее количеству перекисей, содержащихся в 1000 г испыту-емого вещества.
Если нет указаний в частной статье, используют метод А (ГФУ). Метод А. Около 5, 0 г (точная навеска) вещества помещают в коническую
колбу с притертой стеклянной пробкой вместимостью 250 мл, прибавляют 30 мл смеси хлороформ— кислота уксусная ледяная (2: 3). Колбу встряхивают до растворения вещества, прибавляют 0, 5 мл насыщенного раствора калия йодида, перемешивают в течение 1 мин и прибавляют 30 мл воды. Получен-ный раствор титруют раствором натрия тиосульфата 0, 01 моль/л, медленно добавляя титрант при непрерывном перемешивании почти до полного ис-чезновения желтой окраски. Затем прибавляют 5 мл раствора крахмала и про-должают титровать, интенсивно перемешивая до обесцвечивания раствора.
Параллельно проводят контрольный опыт.
Объем раствора натрия тиосульфата 0, 01 моль/л, израсходованный на титрование в контрольном опыте, не должен превышать 0, 1 мл.
Перекисное число IP рассчитывают по формуле
10 · (n1 – n2)
IP = ————————,
m
где n1 — объем раствора натрия тиосульфата 0, 1 моль/л, израсходованный на титрование исследуемого вещества, мл;
n2 — объем раствора натрия тиосульфата 0, 1 моль/л, израсходованный на титрование в контрольном опыте, мл;
m — масса навески вещества, г.
Задание 7. Определите количество неомыляемых веществ в образцеисследуемого масла. Произведите расчет и запишите результаты в лаборатор ный журнал.
Термин «неомыляемые вещества» применяется к веществам, нелетучим при температуре от 100 до 105 °С, которые экстрагируются органическим растворителем из испытуемого образца после его омыления. Содержание нео-мыляемых веществ вычисляется в % (мас. д. ).
NB! Следует использовать стеклянную посуду со шлифами без смазки. Методика. Навеску испытуемого вещества, указанную в частной статье,
помещают в колбу вместимостью 250 мл, снабженную обратным холодиль-ником. Прибавляют 50 мл раствора калия гидроксида спиртового 2 моль/л
и нагревают на водяной бане в течение 1 ч, периодически перемешивая кру-говыми движениями. Затем охлаждают до температуры ниже 25 °С и содержи-мое колбы с помощью 100 мл воды переносят в делительную воронку. Полу-ченный раствор осторожно встряхивают с тремя порциями эфира, свобод-ного от пероксидов, по 100 мл каждая. Все эфирные извлечения собирают в другую делительную воронку, в которую предварительно помещают 40 мл воды, осторожно встряхивают в течение нескольких минут и оставляют до полного разделения слоев, после чего отбрасывают водный слой. Эфир-ный слой промывают двумя порциями воды, по 40 мл каждая. Затем тща-
| Анализ жирных масел | 7 3 | |
тельно отмывают поочередно 40 мл раствора 30 г/л калия гидроксида
и 40 мл воды, повторяя данную процедуру 3 раза. Затем эфирный слой отмы-вают водой порциями по 40 мл до отсутствия щелочной реакции в водном слое по фенолфталеину. Эфирный слой количественно переносят в дове-денную до постоянной массы колбу при помощи эфира, свободного от пе-роксидов.
Эфир отгоняют и к остатку прибавляют 6 мл ацетона. Растворитель тща-тельно удаляют в потоке воздуха. Остаток в колбе высушивают при темпера-туре от 100 до 105 °С до постоянной массы, охлаждают в эксикаторе и взве-шивают.
Содержание неомыляемых веществ, %, вычисляют по формуле
100 · а
неомыляемые вещества = —————,
m
где а — масса остатка, г;
m — масса навески вещества, г.
Остаток растворяют в 20 мл спирта, предварительно нейтрализованного по фенолфталеину, и титруют спиртовым раствором натрия гидроксида 0, 1 моль/л. Если израсходованный объем раствора натрия гидроксида спир-тового 0, 1 моль/л превышает 0, 2 мл, разделение двух слоев было неполным; при этом взвешенный остаток не может рассматриваться как «неомыляемые вещества». В данном случае испытание следует повторить.
Задание 8. Проведите определение посторонних масел в образце жирногомасла методом газовой хроматографии.
Испытание на посторонние масла проводят путем перевода жирных кис-лот, содержащихся в испытуемом масле, в метиловые эфиры.
Метод А (ГФУ). Этот метод неприменим для масел, содержащих глице-риды жирных кислот с эпокси-, гидроксиэпокси-, циклопропиловыми или циклопропениловыми группами, а также для масел, в составе которых боль-шая часть жирных кислот имеет длину цепи менее восьми атомов углерода и для масел с кислотным числом более 2, 0.
Испытуемый раствор. Испытуемое масло высушивают перед метилирова-нием, если это указано в частной статье. 1, 0 г масла помещают в круглодон-ную колбу вместимостью 25 мл со шлифом, снабженную обратным холо-дильником и газоотводной трубкой. В колбу прибавляют 10 мл метанола без-водного, 0, 2 мл раствора 60 г/л калия гидроксида в метаноле, присоединяют обратный холодильник и, пропуская через смесь азот со скоростью около 50 мл/мин, встряхивают и нагревают до кипения. Когда раствор станет про-зрачным (обычно через 10 мин), продолжают нагревание еще в течение 5 мин. Затем колбу охлаждают под проточной водой и содержимое переносят
в делительную воронку. Колбу промывают 10 мл гептана, переносят смывы
в ту же делительную воронку и встряхивают. Прибавляют 10 мл раствора 200 г/л натрия хлорида и энергично встряхивают. Оставляют до расслоения, затем переносят органический слой в сосуд, содержащий натрия сульфат безводный, и через некоторое время фильтруют.
Раствор сравнения (а). Готовят 0, 50 г смеси веществ, применяемых для калибровки (калибровочной смеси) состава, приведенного в одной из таб-лиц ГФУ, как указано в частной статье (если в частной статье не указан определенный раствор, готовят смесь состава, приведенного в табл. 3. 4). Смесь растворяют в гептане и доводят объем раствора этим же растворителем до 50 мл.
Раствор сравнения (б). 1, 0 мл раствора сравнения (а) доводят гептаном до 10, 0 мл.
7 4 Тема 3. Липиды
Т а б л и ц а 3. 5
Приготовление смеси веществ, применяемых для калибровки*
П р и м е ч а н и е. * Для ГХ с применением капиллярной колонки и разделением потока рекомендуется добавлять к смеси веществ, применяемых для калибровки, компоненты с большей длиной цепи.
** Эти значения, вычисленные с применением калибровочной кривой, представлены как пример для колонки, заполненной полиэтиленгликольсукцинатом (1) и макроголом 20 000 (2).
Хроматографируют на газовом хроматографе с пламенно-ионизацион-ным детектором в следующих условиях:
— колонка стеклянная или из нержавеющей стали длиной от 2 до 3 м
и внутренним диаметром от 2 до 4 мм, заполненная диатомитом для газовой хроматографии с размером частиц от 125 до 200 мкм, на который нанесено от 5 до 15 % полиэтиленгликольсукцината или полиэтиленгликольадипината;
— газ-носитель — азот для хроматографии;
— скорость газа-носителя — 25 мл/мин;
— температура колонки — 180 °С;
— температура устройства ввода проб и детектора — 200 °С.
При необходимости или если указано в частной статье, температуру ко-лонки увеличивают от 120 до 200 °С со скоростью 5 °С в минуту.
Хроматографировать возможно также на газовом хроматографе с пламен-но-ионизационным детектором в следующих условиях:
— колонка капиллярная стеклянная или кварцевая длиной от 10 до 30 м
и внутренним диаметром от 0, 2 до 0, 8 мм, внутренняя поверхность которой покрыта слоем поли[(цианопропил)(метил)][(фенил)(метил)]силоксана или макрогола 20 000 с толщиной слоя от 0, 1 до 0, 5 мкм или другой подходящей неподвижной фазой;
— газ-носитель — гелий для хроматографии или водород для хроматогра-фии;
— скорость газа-носителя — 1, 3 мл/мин (для колонки с внутренним диа-метром 0, 32 мм);
— деление потока — 1: 100 или менее в зависимости от внутреннего диа-метра применяемой колонки (в случае использования колонки с внутренним диаметром 0, 32 мм деление потока должно составлять 1: 50);
— температура колонки от 160 до 200 °С, в зависимости от длины колон-ки и используемой неподвижной фазы (для колонки длиной 30 м, покрытой слоем макрогола 20 000, температура должна составлять 200 °С);
— температура устройства ввода проб и детектора — 250 °С.
При необходимости или если указано в частной статье, температуру ко-лонки увеличивают от 170 до 230 °С со скоростью 3 °С в мин (для колонки, покрытой слоем макрогола 20 000).
| Анализ жирных масел | 7 5 | |
Хроматографируют 0, 5 мкл раствора сравнения (а). Чувствительность си-стемы регулируют таким образом, чтобы высота основного пика на получен-ной хроматограмме составляла от 50 до 70 % шкалы регистрирующего уст-ройства. Определяют времена удерживания жирных кислот, входящих в со-став калибровочной смеси. Хроматографируют 1 мкл раствора сравнения (б)
и рассчитывают отношение сигнал/шум для пика, соответствующего метил-миристату.
Хроматографируют от 0, 5 до 1, 0 мкл испытуемого раствора. Время хрома-тографирования должно в 2, 5 раза превышать время удерживания метилоле-ата. Хроматограмму оценивают, как описано ниже.
При использовании калибровочных смесей № 1 или № 3 хроматографи-ческая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:
— на хроматограмме раствора сравнения (а) число теоретических таре-лок n, вычисленное для пика, соответствующего метилстеарату, составляет не менее 2000 для набивной колонки и не менее 30 000 для капиллярной колонки;
— на хроматограмме раствора сравнения (a) коэффициент разделения RS пиков, соответствующих метилолеату и метилстеарату, составляет не ме-нее 1, 25 для набивной колонки и не менее 1, 8 для капиллярной колонки;
— на хроматограмме раствора сравнения (б) отношение сигнал/шум для пика метилмиристата составляет не менее 5.
При использовании калибровочной смеси № 2 хроматографическая сис-тема считается пригодной, если выполняются следующие условия:
— на хроматограмме раствора сравнения (а) число теоретических таре-лок (n), вычисленное для пика, соответствующего метилкапрату, составляет не менее 1500 для набивной колонки и не менее 15 000 для капиллярной колонки;
— на хроматограмме раствора сравнения (a) коэффициент разделения Rs
пиков, соответствующих метилкаприлату и метилкапрату, составляет не менее 2 для набивной колонки и не менее 4 для капиллярной колонки;
— на хроматограмме раствора сравнения (б) отношение сигнал/шум для пика метилкапроата составляет не менее 5.
Оценка хроматограмм. Следует избегать условий хроматографирования, которые могут дать неразделенные пики (наличие компонентов с неболь-шим различием между временами удерживания, например кислоты линоле-новая и арахидоновая).
Качественный анализ. Строят калибровочную кривую, используя хрома-тограммы раствора сравнения и данные табл. 3. 5.
Пример типовой хроматограммы кунжутного масла (PhEur) приведен на рис. 3. 4.
Для хроматограмм, полученных в изотермическом режиме, вычисляют логарифмы приведенных времен удерживания как функцию эквивалента числа атомов углерода в жирных кислотах. Калибровочная кривая насыщенных кислот представ
|
|
|
