 |
Титрационный метод. Метод мембранных фильтров. Характеристика отечественных фильтров, используемых. в санитарной микробиологии
|
|
|
|
Титрационный метод
Используется для определения количества СПМ.
1-й этап: гомогенизация материала. При необходимости приготовление суспензии с целью перевода микроорганизмов в жидкую фазу.
2-й этап: приготовление серии разведений.
3-й этап: посев избранных объемов исследуемого материала (100, 10, 1 мл) и его разведений по 1 мл в жидкую питательную среду. Для повышения точности метода каждый объем может параллельно засеваться в несколько порций питательной среды (двух-, трех-, пятирядный посев). Оптимальным является трехкратное повторение (достаточная достоверность при сравнительно небольшой стоимости).
4-й этап: учет наличия роста на жидкой питательной среде и высев из положительных объемов на плотную питательную среду.
5-й этап: идентификация микроорганизмов, выросших на плотной питательной среде. При этом учитываются культуральные свойства и при необходимости проводятся дополнительные исследования (изучение тинкториальных, морфологических, биохимических и серологических свойств).
Если использован однорядный метод, как правило, результат выражается в виде титра искомого микроорганизма, за который принимается наименьший объем (наибольшее разведение), в котором еще он был обнаружен.
Если был использован многорядный метод, учет результатов проводится с помощью специальных таблиц, позволяющих по комбинации положительных объемов, давших рост, определить титр, индекс (НВЧ).
Метод мембранных фильтров
Используется для определения количества СПМ в материалах, содержащих мало взвешенных веществ, например, для определения ОКБ и ТКБ. Для его осуществления необходимо специальное оборудование, фильтры и фильтрационные установки.
|
|
|
Для санитарно-бактериологических исследований используются особые фильтры, непроницаемые для бактерий (см. таблицу). Перед употреблениемфильтры стерилизуются кипячением. Фильтрационная установка состоит из фильтрационного аппарата (фильтр Зейтца и др. ) и источника создания вакуума (насос Камовского, водоструйный насос и др. ).
Для стерилизации фильтры помещают в воду, предварительно нагретую до 80 0С, а затем нитроцеллюлозные мембранные фильтры подвергают трехкратному кипячению по 10 мин со сменой воды, а мембранные фильтры «Владипор» - однократному кипячению в течение 10-15 мин.
Порядок работы:
1. Фильтрационный аппарат стерилизуют фламбированием при помощи смоченного в спирте ватного тампона;
2. Стерильный мембранный фильтр помещают на сетку фильтрационного аппарата стерильным пинцетом и закрепляют устройство;
3. В стакан фильтрационного прибора наливают необходимый объем исследуемого материала или его разведения. При фильтровании небольших объемов жидкости (1 мл) в стакан предварительно наливают 10 мл стерильной воды. Общий объем фильтруемой жидкости не должен быть больше 100 мл. Для больших объемов берут несколько фильтров;
4. Создают вакуум в приемном сосуде;
5. После окончания фильтрации жидкости, выждав некоторое время для удаления излишка влаги, при сохранении вакуума аппарат разбирают и стерильным пинцетом, не переворачивая, переносят фильтр на поверхность плотной питательной среды, избегая появления пузырьков воздуха между фильтром и средой;
6. При наличии в жидкости большого количества взвешенных веществ поверх рабочего фильтра помешают планктонный фильтр. На питательную среду в этом случае переносят оба фильтра;
7. Культивируют посевы 24 ч при 37 0С;
8. Проводят подсчет колоний, типичных для искомого микроорганизма (объем фильтруемой жидкости подбирается с таким расчетом, чтобы на фильтре вырастало не более 30 колоний);
|
|
|
9. Постановка дополнительных тестов для идентификации (определение тинкториальных, морфологических, биохимических свойств). При этом с фильтра исследуется несколько типичных колоний;
10. Выражение результата в виде индекса по формуле:
Индекс = N х 1000/ V,
N – количество колоний, V – профильтрованный объем воды в миллилитрах.
Характеристика отечественных фильтров, используемых
в санитарной микробиологии
| Вид фильтра и его назначение | Нитроцеллюлозные мембранные фильтры | Фильтрующие мембраны «Владипор» МФА-МА | ||
| № фильтра | диаметр пор, мкм | № фильтра | диаметр пор, мкм | |
| Планктонный фильтр при наличии в воде большого количества взвешенных веществ Основной рабочий фильтр, непроницаемый для определяемых микроорганизмов | 3, 5 0, 7 0, 5 | 0, 951-1, 050 0, 451-0, 550 0, 551-0, 650 0, 651-0, 750 0, 751-0, 850 | ||
Приложение №4
Микробиологические критерии оценки качества воды
| Нормативный документ | Объект исследования | Нормируемые показатели |
| СанПиН 2. 1. 5. 980-00 «Водоотведение населенных мест, санитарная охрана водных объектов. Гигиенические требования к охране поверхностных вод»; МУК 4. 2. 1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды Методические указания по санитарно-микробиологическому анализу воды поверхностных водоемов №2285-81. | Бытовые сточные воды перед спуском в водоемы | Термотолерантные колиформные бактерии не более 100 КОЕ на 100 мл; Общие колиформные бактерии не более 500 на 100 мл; Колифаги не более 10 БОЕ на 100 мл Отсутствие возбудителей инфекционных заболеваний |
| 2. СанПиН 2. 1. 4. 1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения, Контроль качества»; ГОСТ 2761-84 «Источники централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения»; МУК 4. 2. 1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды; Методические указания по санитарно-микробиологическому анализу воды поверхностных водоемов №2285-81. | Вода поверхностных источников (питьевая) | Термотолерантные колиформные бактерии не допускаются в 100 мл; Общие колиформные бактерии не допускаются в 100 мл; Колифаги не допускаются в 100мл; Споры сульфитредуцирующих клостридий не допускаются в 20 мл; Общее микробное число не более 50 КОЕ на 1 мл; Отсутствие возбудителей инфекционных заболеваний |
| СанПиН 2. 1. 4. 1175-02 «Гигиенические требования к качеству воды нецентрализрованных источников водоснабжения. Санитарная охрана источников»; МУК 4. 2. 1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды | Вода подземных источников, колодцев, родников (питьевая) | Термотолерантные колиформные бактерии не допускаются в 100 мл; Общие колиформные бактерии не допускаются в 100 мл; Общее микробное число не более 100 КОЕ на 1 мл; Колифаги не допускаются в 100 мл Отсутствие возбудителей инфекционных заболеваний |
| СанПиН 2. 1. 2. 1188-03 «Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды плавательных бассейнов. Контроль качества»; МУК 4. 2. 1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды Методические указания по санитарно-микробиологическому анализу воды поверхностных водоемов №2285-81. Методические рекомендации по обнаружению и идентификации Pseudomonas aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде, сточных водах), МЗ СССР от 24. 05. 84 г. | Вода плавательных бассейнов | Термотолерантные колиформные бактерии не допускаются в 100 мл; Общие колиформные бактерии не более 1 КОЕ на 100 мл; Колифаги не допускаются в 100 мл; Золотистый стафилококк не допускается в 100 мл; Синегнойная палочка не допускается в 100 мл; Отсутствие возбудителей кишечных инфекций. |
| 5. Отсутствуют нормативные документы (НД) | Вода из чайника | Отсутствие патогенных бактерий |
|
|
|
КОЕ - колониеобразующих единиц,
БОЕ - бляшкообразующих единиц
|
|
|
