 |
А. ВВЕДЕНИЕ
|
|
|
|
N. B. Раздел В. принят Всемирной Ассамблеей Делегатов МЭБ в мае 2011г.; Раздел С принят в мае 2013г.
ГЛАВА 3. 1. 17.
БЕШЕНСТВО (ИНФИЦИРОВАНИЕ ВИРУСОМ БЕШЕНСТВА)
РЕЗЮМЕ
Бешенство является серьезным зоонозным заболеванием, методы диагностики которого были стандартизированы в международном масштабе. Так как при бешенстве значительных патогномических поражений и специфических постоянных признаков не наблюдается, то точный диагноз может быть поставлен только в лаборатории. Лабораторные методы лучше всего проводить на ткани центральной нервной системы (ЦНС), извлеченной из черепа (особенно, стволовая часть мозга, гиппокамп, таламус, кора головного мозга и продолговатый мозг). Необходимо исследовать набор образцов ЦНС. Самым важным компонентом является стволовая часть мозга.
Идентификация возбудителя: Идентификацию возбудителя предпочтительнее проводить посредством реакции флуоресцирующих антител. На смыв ткани мозга, предпочтительно извлеченной из нескольких частей центральной нервной системы, зафиксированной в ацетоне, капают одну каплю очищенного иммуноглобулина, предварительно конъюгированного с ресцинизотиоцианатом. Реакция флуоресцирующих антител обеспечивает надежные результаты диагностики всех штаммов вируса бешенства в 98-100% случаев, если используется сильный конъюгат. Что касается большого количества образцов, например, в случае эпизоотологического исследования, быстрые результаты можно получить посредством проведения ПЦР в специально оборудованных лабораториях.
Гистологические тесты показали наличие инфицированных нейронных клеток и эти процедуры должны выявить агрегаты вирусного материала (тельца Негри) в цитоплазме нейронов. Однако, методы гистологического исследования менее чувствительны по сравнению с иммунологическими методами, особенно, если речь идет об аутолизированных образцах. Соответственно, методы гистологического исследования нельзя больше рекомендовать для проведения первичной диагностики.
|
|
|
Если результаты, полученные в результате реакции флуоресцирующих антител, неопределенные или если имеет место воздействие вируса на человеческий организм, то рекомендуется проводить дальнейшие тесты (тесты на культуре клеток или заражение
мышей) на том же самом образце или повторную реакцию флуоресцирующих антител на других образцах. В культуру монослоя восприимчивых клеток инокулируют пул нескольких тканей ЦНС, включая стволовую часть мозга. Реакция флуоресцирующих антител, проведенная после соответствующего инкубационного периода, должна показать наличие или отсутствие вирусного антигена. Или же новорожденных или 3-недельных мышей инокулируют интрацеребрально таким же пулом тканей и затем наблюдают в течение 28 дней. Причину смерти любой мыши, которая умирает в течение 5-28 дней после заражения, следует подтвердить посредством проведения реакции флуоресцирующих антител. Там, где это возможно, тесты по прививке мышей необходимо заменять на выделение вируса в культуре клеток.
Идентификацию агента можно дополнять идентификацией любых вариантных вирусных штаммов в специализированных лабораториях путём использования моноклональных антител, специфических зондов нуклеиновых кислот или полимеразной цепной реакции с последующим секвенированием геномных областей. С помощью таких приёмов можно различать полевые и вакцинные штаммы и, возможно, идентифицировать географическое происхождение полевых штаммов. Эти очень чувствительные тесты должны проводиться высококвалифицированным персоналом в специализированных лабораториях.
|
|
|
Серологические тесты: Реакции вируснейтрализации (VN) в клеточных культурах являются тестами, предписанными для проверки реакции на вакцинацию до трансграничного перемещения животных и международной торговли. Результаты выражаются в международных единицах или эквивалентных единицах относительно международной стандартной антисыворотки. Альтернативным образом можно применять валидированные тесты, которые, как известно, коррелируют с реакциями, а именно, с иммуноферментными анализами с использованием антител к белку G или целому вирусу.
Требования к вакцинам: Ветеринарные вакцины против бешенства содержат или живой вирус, аттенуированный для индикаторных видов (таких как Flury низкого пассажа на яйцах, Flury высокого пассажа на яйцах, Street-Alabama-Dufferin или Kelev), или вирус, инактивированный химическими или физическими средствами. Они также представляют собой рекомбинантные вакцины. Вирус культивируют в яйцах с развивающимся эмбрионом или в клеточных культурах.
Вакцины против бешенства обычно представлены в лиофилизированном виде, но инактивированные вирусные вакцины, предпочтительнее с адъювантом, могут храниться в жидкой форме.
Прежде, чем лицензировать разработанные вакцины, следует определить на животных целевых видов продолжительность иммунитета, выработанного в результате их применения. Вакцины должны обеспечить защитным иммунитетом, по крайней мере, на один год.
Что касается живых вирусных вакцин, должно быть установлено минимальное количество вируса, которое вырабатывает адекватный иммунный ответ.
Иммуногенность инактивированных вирусных вакцин определяют и контролируют путем проведения тестов, которые были разработаны Министерством сельского хозяйства США в Соединённых Штатах Америки или в Европейской Фармакопее. Готовые вакцины обоих типов подвергают тестированию на безвредность и отсутствие токсичности.
Что касается живых вакцин, которые производят для пероральной вакцинации диких (или домашних) животных, то необходимо доказывать их безопасность и эффективность на целевых животных и безопасность на животных, не являющихся целевыми.
|
|
|
А. ВВЕДЕНИЕ
Бешенство вызывает нейротропный вирус рода Lyssavirus семейства Rhabdoviridae. Эта болезнь передаётся всем млекопитающим. Так как бешенство передаётся людям, манипуляции со всем подозреваемым инфицированным материалом следует производить в соответствующих условиях обеспечения безопасности, точно определённых Всемирной Организацией Здравоохранения (ВОЗ) (1996).
В пределах рода можно различить одиннадцать различных генетических линий, а именно, сам вирус классического бешенства (RABV), Lagos вирус летучих мышей (LBV), Mokola вирус (MOKV) и Duvenhage вирус (DUUV), Европейские лиссавирусы летучих мышей-1
(EBLV1) и тип-2 (EBLV2), австралийский вирус летучих мышей (ABLV), четыре лиссавируса (вирус Араван [ARAV], вирус Худжанд [KHUV], вирус Иркут [IRKV], западно-кавказский вирус летучих мышей [WCBV]), которые были выделены у мышей региона Евразии и недавно были признаны новыми видами лиссавирусов (ICTV). Кроме того, вновь идентифицированный лиссавирус (вирус летучих мышей Шимони) был выделен у летучей мыши в Кении (Кузьмин et al. 2010) и ожидает официальной классификации. RABV распространен по всему миру и несет ответственность за огромное количество случаев заражения бешенством животных и людей. У других лиссавирусов более ограниченное географическое распространение и ограниченное количество хозяев, в основном они были выделены у летучих мышей. Однако, на сегодняшний день исследованные лиссавирусы вызывают клиническое заболевание, которое нельзя отличить от классического бешенства. Консервативные антигенные сайты на нуклеокапсидном белке позволяют распознать лиссавирусы при использовании современных коммерческих препаратов антирабических антительных конъюгатов, используемых для проведения диагностических тестов на ткани мозга.
Лиссавирусы были разделены на две филогруппы с определенной патогенностью и имунногенностью (Badrane et al, 2001). Что касается RABV, DUVV, EBLV и ABLV, то консервативные антигенные сайты на поверхности гликопротеинов способствуют формированию перекрестной нейтрализации и перекрестного иммунитета посредством противорабической вакцинации. Наблюдалось ослабление защиты против IRKV, ARAV и KHUV (Hanlon et al. 2005) при вакцинации до заражения и профилактики после заражения классическим бешенством. Все вышеуказанные лиссавирусы были причислены к филогруппе 1. Противорабическая вакцинация формирует слабую защиту или не формирует перекрестную защиту против инфицирования членами филогруппы-2 (MOKV и LBV) вообще. Большинство противорабических антисывороток не нейтрализуют данные лиссавирусы (Badrane et al, 2001). WCBV не имеет перекрестной серологической реакции ни с одной из двух филогрупп. В лабораториях, работающих с лиссавирусами или подозрительным материалом, должны соблюдаться национальные правила противовирусной безопасности и биологической безопасности; они также должны работать в соответствии с руководством по патогенам 3й группы риска, описанным в Главе 1. 1. 4 Биологическая безопасность и биологическая защита: Стандарт по управлению биологическим риском в ветеринарных лабораториях и вивариях.
|
|
|
ВОЗ рекомендует проводить превентивную иммунизацию персонала, работающего с инфицированным или подозрительным материалом. Протокол иммунизации включает три инъекции, например, на 0ой, 7ой и 28ой день. Серологическую оценку иммунизации проводят через 1-3 недели после последней инъекции и проверяют каждые 6 месяцев, если речь идёт о лаборантах, или каждые 2 года, если речь идёт о других диагностах. В случае снижения титра ниже 0, 5 международных единиц (МЕ) на мл следует проводить бустерную вакцинацию. При отсутствии серологического мониторинга режим вакцинации должен состоять из бустерной вакцинации через 1 год и последующих бустерных вакцинаций каждые 1-3 года.
Поскольку у домашних или диких животных отсутствуют клинические признаки или крупные патологоанатомические поражения, диагностика бешенства должна базироваться на лабораторном тестировании. Серологическое подтверждение инфекции редко бывает полезным для послеубойной диагностики по причине поздней сероконверсии и высокого уровня смертности среди животных-хозяев, хотя такие данные могут быть использованы для оценки сероконверсии после вакцинации и для эпизоотологических исследований.
|
|
|
