 |
В. Диагностические методы. 1. Идентификация агента. 1. 1. Отбор образцов головного мозга. 1. 1. 1. Метод отбора образцов головного мозга через затылочное отверстие
|
|
|
|
В. ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
1. Идентификация агента.
Клиническая картина может только вызвать подозрение в заболевании бешенством, так как признаки болезни не являются характерными и могут варьировать от одного животного к другому. Единственным способом проведения надёжной диагностики бешенства является идентификация вируса или некоторых его специфических компонентов с использованием лабораторных тестов.
Так как вирус бешенства быстро инактивируется, охлаждённые диагностические образцы должны переправляться в лабораторию с использованием самого быстрого из имеющихся способов. Условия перевозки должны считаться частью «диагностической цепочки бешенства» и должны соответствовать международному руководству.
Можно использовать несколько лабораторных методов, которые были детализированы и стандартизированы в четвёртом издании ВОЗ Лабораторные методы диагностики бешенства (ВОЗ, 1996). Методы отличаются по эффективности, специфичности и надёжности. Традиционно они используются для тестирования ткани головного мозга, но
они могут также применяться, с различной чувствительность и специфичностью, для тестирования других органов (например, слюнных желёз). В головном мозгу антиген вируса бешенства главным образом изобилует в таламусе, варолиевом мосту и продолговатом мозгу. Рекомендуется отбирать и тестировать пул тканей головного мозга, который включает ствол головного мозга (Bingam & van der Merwe, 2002). Реакция иммунофлуоресцирующих антител является наиболее распространенным тестом для диагностики бешенства. Он был рекомендован ВОЗ и МЭБ и является чувствительным, специфичным и дешевым.
|
|
|
При манипуляциях с тканями центральной нервной системы, извлеченных из животных с подозрением на бешенство, необходимо принимать меры предосторожности. Необходимо носить перчатки и принимать соответствующие меры предосторожности, чтобы предотвратить аэрозольное распространение. Во избежание телесных повреждений и контаминации режущие инструменты, ножницы и скальпели необходимо использовать с осторожностью.
1. 1. Отбор образцов головного мозга
Обычно соответствующие образцы головного мозга отбирают после того, как сделано отверстие в черепе в помещении для проведения вскрытий. Предпочтительнее отбирать образцы гиппокампа, таламуса, коры головного мозга и продолговатого мозга. При некоторых обстоятельствах (например, в полевых условиях или при пробоотборе для больших эпизоотологических исследований) этот этап может не иметь практической ценности. В подобных случаях имеются два возможных метода отбора некоторого количества образцов головного мозга без вскрытия черепа:
1. 1. 1. Метод отбора образцов головного мозга через затылочное отверстие
Соломинку для питья диаметром 5 мм (Barrat & Blancou, 1988) или 2 мл одноразовую пластиковую пипетку вводят в затылочное отверстие по направлению к глазу. Образцы можно отбирать из продолговатого мозга, основания мозжечка, гиппокампа, коры головного мозга и продолговатого мозга. При использовании соломинки зажмите ее между пальцами, чтобы при извлечении избежать потери материала. Отбор образцов головного мозга крупного рогатого скота можно осуществлять с использованием «ложки или инструмента для головного мозга», разработанных специально для отбора образцов ткани при ГЭ КРС, при этом будет получен образец, подходящий как для диагностики ГЭ КРС и бешенства.
1. 1. 2 Метод отбора образцов головного мозга через глазницу
При этом методе (Montano Hirose et al., 1991) используется троакар для того, чтобы сделать отверстие в задней стенке глазницы, затем через это отверстие вводится пластиковая пипетка. В качестве образцов отбираются те же части головного мозга, что и при использовании предшествующего приёма, но образцы отбираются в противоположном направлении.
|
|
|
1. 2. Транспортировка образцов
Транспортировка подозрительного материала должна осуществляться в соответствии с инструкциями по обращению с опасными товарами Международной ассоциации по воздушным перевозкам (IATA). Эти указания описаны в Главе 1. 1. 3 Транспортировка образцов животного происхождения.
Если нет возможности отправлять образцы в охлаждённом виде, можно использовать другие методы их сохранения. Выбор консерванта зависит от тестов, которые применяются для диагностики:
i) Формалин инактивирует вирус, поэтому нельзя проводить тесты по выделению, а диагностика зависит от использования модифицированной и менее чувствительной прямой реакции флуоресценции (FAT), ПЦР (меньшая чувствительность, чем у этих исследований), иммуногистохимии или гистологии (Warner et al., 1997);
ii) Инфекционность при комнатной температуре может сохраняться в течение нескольких дней, если материал головного мозга хранить в смеси 50% глицерина в забуференном фосфатом физиологическом растворе (ЗФР). Смесь глицерина / ЗФР тормозит действие бактерий и таким образом защищает от химического и биологического влияния со стороны гниения. Эта смесь не защищает от снижения титра из-за термальных условий и, так как вирус бешенства является термолабильным, то его титр будет снижаться при хранении в глицерине / ЗФР. В тропиках в условиях обычной транспортировки эта защита может быть эффективной только в течение нескольких дней. Поэтому, если только это возможно, образцы следует держать в глицерине /
ЗФР в охлаждённом виде. Так как вирус не инактивируется глицерином / ЗФР, на этих образцах могут проводиться все лабораторные тесты.
iii) Альтернативой транспортировке образцов для проведения молекулярных методов исследования является использование системы FTA Gene Guard (Picard-Meyer et al., 2007). Бумага для FTA сохраняет ДНК вируса бешенства в матрице волокон и позволяет транспортировать образцы для дальнейшей характеристики штаммов бешенства при комнатной температуре без соблюдения особых правил биологической безопасности.
|
|
|
