 |
ЗАНЯТИЕ № 11. Генетика бактерий. Молекулярно-генетические методы. идентификации микроорганизмов . Минимальная среда. Среда Эндо
|
|
|
|
ЗАНЯТИЕ № 11
Генетика бактерий. Молекулярно-генетические методы
идентификации микроорганизмов
Цель занятия: ознакомиться с фенотипической и генотипической изменчивостью бактерий, а также с молекулярно-генетическими методами идентификации микроорганизмов.
Задание 1. Изучить характер роста протея на обычном и фенолизированном скошенном МПА. Обратить внимание на проявление протеем феномена «роения». Какой вид изменчивости выявляется у протея? Зарисовать.
Рост протея на обычном МПА Рост протея на фенолизированном МПА
Задание 2. Поставить опыт по изучению процесса конъюгации у бактерий.
Для этого необходимо взять 2 бульонные культуры:
а) донорский штамм – E. coli K12Hfr, leu+, Strs (устойчивый к лейцину);
б) реципиентный штамм – E. coli K12F–, leu–, Strr (устойчивый к стрептомицину).
В стерильной пробирке объединить культуры реципиента и донора в соотношении 2: 1 и поместить пробирку на 30 мин. в термостат, после чего смешанную культуру донора с реципиентом, а также монокультуры донора и реципиента высеять петлей на плотную минимальную среду по секторам. Минимальная среда не содержит лейцина, но в ней есть стрептомицин в концентрации, задерживающей рост донора. Чашки помещают в термостат на 24 ч. Подсчитать количество жизнеспособных клеток реципиентов и рекомбинантных клеток (в смеси). Рассчитать частоту рекомбинации. Зарисовать ожидаемый результат.
Минимальная среда
Реципиент
|
|
|
Донор
Смесь
реципиента
и донора
Задание 3. Поставить опыт по изучению процесса трансдукции у бактерий. Для постановки опыта необходим колифаг, чувствительный к культуре Е. coli, ферментирующей лактозу. Реципиентом является штамм E. coli lac–, не способный ферментировать лактозу.
В пробирке смешать 1 мл 3-часовой культуры реципиентного штамма E. coli и 1 мл колифага. Смесь инкубировать при 370С 1 час, затем высеять петлей по секторам на среду Эндо и поместить в термостат. Через 24 ч. подсчитать количество лактозонегативных и лактозопозитивных (трансдуктанты) колоний. Определить частоту трансдукции. Зарисовать ожидаемый результат.
Среда Эндо
 |
Реципиент Смесь
колифага и
реципиента
Задание 4. Поставить опыт по изучению процесса трансформации у бактерий.
Донор – культура стрептомицино-резистентного стафилококка.
Реципиент – культура стафилококка, чувствительная к стрептомицину.
К 1 мл бульонной культуры реципиента прилить 1 мл суспензии ДНК донора, после чего пробирка поместить в термостат на 30 минут. Затем сделать посев петлей на агар со стрептомицином из пробирки со смесью культуры реципиента и ДНК донора и культуры реципиента. Через 24 ч. культивирования подсчитать количество колоний стафилококков, устойчивых и неустойчивых к стрептомицину. Определить частоту трансформации. Зарисовать ожидаемый результат.
|
|
|
Агар со стрептомицином
 |
Реципиент Смесь
реципиента
и ДНК донора
Задание 5. Освоить метод постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР). Работа на компьютере с использованием виртуальной лаборатории ПЦР. Записать технику постановки ПЦР, зарисовать схему реакции.
Для зарисовок и записей:
Задание 6. Решить ситуационные задачи.
1) Для демонстрации рекомбинаций у бактерий были подготовлены 3 чашки Петри: для трансформации, конъюгации и трансдукции. Для каждого опыта необходимы доноры и реципиенты. Для какого из опытов необходим бактериофаг?
Ответ:
2) Для проведения ПЦР лаборант приготовил следующие компоненты: исходную цепь ДНК, азотистые основания, праймеры, физиологический раствор, фосфатный буфер. Какого компонента не хватает?
Ответ:
3) В одну пробирку с МПБ были внесены 2 культуры эшерихий - устойчивых к гентамицину, и чувствительных к гентамицину. После культивирования смеси эшерихий, бактерии приобрели антибиотикоустойчивость к гентамицину. В результате какого процесса чувствительные к гентамицину эшерихии стали к нему устойчивы? Плазмидную или хромосомную устойчивость приобрели эшерихии?
Ответ:
Дата
Подпись преподавателя
|
|
|
