Главная | Обратная связь | Поможем написать вашу работу!

Схема РСК. Схема титрования гемолизина. Схема титрования комплемента в гемолитической системе. Схема постановки главного опыта РСК

Схема РСК

Положительный результат Отрицательный результат

Задание 3. Провести титрование гемолизина и определить его титр. Результаты записать в таблицу.

Схема титрования гемолизина

Компонент	Количество компонента (мл) в пробирке
Компонент	1-й 1: 500	2-й 1: 1000	3-й 1: 1500	4-й 1: 2000	5-й 1: 2500	6-й 1: 3000	7-й 1: 3500	8-й 1: 4000
Гемолизин в возрастающих разведениях	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2
Комплемент, разведенный в соотношении 1: 20	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2
Эритроциты, 2, 5%-я суспензия	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2
Физраствор (вместо антигена и исследуемой сыворотки)	0, 4	0, 4	0, 4	0, 4	0, 4	0, 4	0, 4	0, 4
Инкубирование в водяной бане при 37⁰С 10 мин
Учет результатов

Примечание: титр гемолизина - наибольшее его разведение, которое в присутствии оптимального количества комплемента дает полный гемолиз эритроцитов.

Задание 4. Провести титрование комплемента и определить его титр. Результаты записать в таблицу.

Схема титрования комплемента в гемолитической системе

Компонент	Количество компонента (мл) в пробирке
Компонент	1-й	2-й	3-й	4-й	5-й	6-й	7-й	8-й	9-й	10-й
Комплемент (1: 20)	0, 02	0, 04	0, 06	0, 08	0, 1	0, 12	0, 14	0, 16	0, 18	0, 20
Физраствор	0, 58	0, 56	0, 54	0, 52	0, 5	0, 48	0, 46	0, 44	0, 42	0, 4
Индикаторная система	0, 4	0, 4	0, 4	0, 4	0, 4	0, 4	0, 4	0, 4	0, 4
Инкубирование в водяной бане при 37⁰С 10 мин
Учет результатов

Задание 5. Поставить главный опыт РСК.

Схема постановки главного опыта РСК

Компонент	Количество компонента (мл) в пробирке
Компонент	1-й	2-й	3-й	4-й	5-й	6-й	7-й
Исследуемая сыворотка крови, разведенная 1: 5 и 1: 10	0, 2	-	-	0, 2	-	-	-
Положительная сыворотка	-	0, 2	-	-	-	-	-
Отрицательная сыворотка	-	-	0, 2	-	-	-	-
Антиген в рабочем титре	0, 2	0, 2	0, 2	-	0, 2	-	-
Физиологический раствор	-	-	-	0, 2	0, 2	0, 4	0, 6
Комплемент в рабочем титре	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2
Инкубирование в водяной бане при 37⁰С 20 мин
Эритроциты, 2, 5%-я суспензия	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2
Гемолизин в рабочем титре	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2	0, 2
Инкубирование при 37⁰С 20-30 мин

Задание 6. Провести учет результатов РСК по наличию или отсутствию гемолиза. Учет результатов начинать с контрольных пробирок. Оценить результаты в крестах.

7 пробирка –

6 пробирка –

5 пробирка –

4 пробирка –

3 пробирка –

2 пробирка –

1 пробирка –

Задание 7. Решить ситуационные задачи.

1) Студент проводит постановку РСК. У него имеется стандартный антиген, исследуемая сыворотка, комплемент, гемолизин. Достаточно ли этих компонентов для постановки РСК?

Ответ:

2) Студенту поручено получить в условиях лаборатории гемолизин. Какие действия для этого он должен предпринять?

Ответ:

3) При постановке РСК образованный комплекс «антиген-антитело» оказался не способным связываться с комплементом. Как называются антитела, входящие в данный комплекс, и какую модификацию РСК в данном случае необходимо проводить?

Ответ:

Дата

Подпись преподавателя

ЗАНЯТИЕ № 16

Метод флуоресцирующих антител (МФА).

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Реакция нейтрализации (РН)

Цель занятия: Ознакомиться с принципом метода флуоресцирующих антител, техникой постановки реакции иммунофлуоресценции (РИФ) и техникой проведения ИФА и РН.

Задание 1. Ознакомиться с компонентами и техникой постановки прямого и непрямого (двухступенчатого и трехступенчатого) вариантов РИФ. Дать краткую характеристику техники постановки вариантов реакций, зарисовать схему постановки РИФ.

Для зарисовок и записей:

Прямая РИФ –

Двухступенчатая РИФ –

Трехступенчатая РИФ –

Задание 2. Изготовить препараты для прямого варианта РИФ с вакцинным штаммом бруцелл. В работе использовать флуоресцирующую бруцеллезную сыворотку. Исследование провести с помощью люминесцентного микроскопа. Зарисовать микроскопическую картинку.

Положительный результат РИФ Отрицательный результат РИФ

Задание 3. Ознакомиться с компонентами и методом постановки ИФА на компьютере с использованием виртуальной лаборатории. Записать технику постановки ИФА и ее вариантов, зарисовать схему реакций.

Для зарисовок и записей:

Гомогенный ИФА -

Гетерогенный (твердофазный) ИФА –

Непрямой твердофазный ИФА –

«Сендвич-вариант» ИФА –

Конкурентный ИФА –

Задание 4. Провести РН для выявления токсинов C. perfringens на белых мышах. Описать и зарисовать схему реакции.

Для зарисовок и записей:

Положительный результат Отрицательный результат

Задание 5. Решить ситуационные задачи.

1) При постановке прямого варианта РИФ студент нанес на предметное стекло антиген, затем флуоресцирующую сыворотку, промыл стекло водой и приступил к микроскопированию с помощью люминесцентного микроскопа. Однако никакого свечения комплекса «антиген-антитело» студент не обнаружил. Какую ошибку совершил студент при изготовлении препарата для РИФ?

Ответ:

2) Для проведения ИФА в лаборатории имеются диагностические наборы, в состав которых входят меченные пероксидазой антитела, субстрат и исследуемый антиген. В какой последовательности необходимо вносить данные компоненты в лунки планшетов при постановке твердофазной ИФА?

Ответ:

3) Хозяйство неблагополучно по анаэробной энтеротоксемии овец. При лабораторной диагностике было установлено, что у ягнят болезнь вызывает C. perfringens типа В, а у овец - C. perfringens типов С и D. Каким методом в лаборатории были выявлены возбудители анаэробной энтеротоксемии разных типов?

Ответ:

Дата

Подпись преподавателя

⇐ Предыдущая 4 5 6 7 8 9 10 111213 Следующая ⇒

Воспользуйтесь поиском по сайту: