 |
Глава 12, Заметка 4. Охлаждающее действие и антиканцерогенный эффект конъюгированых жирных кислот
|
|
|
|
Мы исследовали влияние, оказываемыми различными жирными кислотами, конъюгироваными и неконъюгироваными, на различные канцерогенные вещества. В первой группе экспериментов мы изучили это влияние in vitro, и выбрали охлаждение флюоресценции канцерогенного вещества в качестве критерия активности.
Эта часть исследования была сделана в сотрудничестве с C. Huesca-Mejia и P. Teitelbaum.
Эффект охлаждения был изучен следующим образом:
Флюоресценция канцерогенных углеводородов измеряется посредствам флуоресцентной представки к спектрофотометру Beckman, используя длину волны приблизительно 365 нм/*. Чувствительность аппарата откалибрована, чтобы показывать величину 100 для флуоресцентного света, использующего концентрацию углеводорода, имеющего максимальную флюоресценцию. Канцерогенные углеводороды растворяются в спирте, изооктанах или циклогексане, при этом 2 последних очищаются, делаюсь при этом оптически не активными благодаря прохождения пассажа через кремневую колонку.
Жирные кислоты растворяются в разных разведениях в тех же самых растворителях и добавляются к раствору канцерогенного углеводорода, который ранее был выбран, по тому, что давал флуоресцентное значение, равное 100. Сразу определялась флюоресценция смеси. Охлаждающий эффект жирной кислоты определяется по проценту остаточной флюоресценции канцерогенного вещества при смешивании с различными растворами смеси конъюгированых жирных кислот из рыбьего жира. таблица XXXVI демонстрирует эффект смесей жирных кислот, конъюгированых при обработке KOH разных канцерогенов и связанных с ними углеводородов.
Длина волны (нм)
Рис. 280. Метод конъюгации. Использование этилового спирта в качестве растворителя для конъюгации изменяет количество полиненасыщенных членов ряда, полученных для жирных кислот жира печени трески. (a) по сравнению с таковым, полученным при проведении конъюгации при высоких температурах, с использованием этиленгликоля, (b) глицерин или другие растворители. Растворение 0.002 % в этиловом спирте.
|
|
|
таблица XXXVI Охлаждающих эффект коньюгированных жирных кислот на флюоресценцию канцерогенных и СВЯЗАННЫХ с ними углеводородов.
| Углеводород | % Концентрация | Охлаждающий агент | % Остаточная флюоресценция |
| Метилхолантрен | 0.0062 | Смесь коньюгированных жирных кислот жира печени трески (0.1% раствор) | 25.0 |
| 3, 4 Бензперен | 0.0062 | " | 36.0 |
| 1, 2 Бензантрацен | 0.0031 | " | 24.0 |
| 1, 2, 5, 6 Дибензантрацен | Нас. раств. (спирт) | " | 15.2 |
| 9, 10 Диметил -1,2 Бензантрацен | 0.0062 | " | 23.0 |
| Бензантрацен 12 ol -7 Метилацетат 7 Хлоро-10 Метил -1,2 Бензантрацен 1 Холантрен -3 Метил | 0.005 0.005 0.005 | Смесь коньюгированных жирных кислот рыбьего жира (0.2% раствор) | 5.7 7.9 10.0 |
| Бензо (d) Пирен -5 Метил | 0.005 | " | 11.2 |
| 3, 10 Диметил -1, 2 Бензантрацен | 0.001 | " | 6.5 |
| 7 Циано-10 Метил -1,2 Бензантрацен.. 5 Хлоро-10 Метил -1, 2 Бензантрацен.. 6 Хлоро-10 Метил -1, 2 Бензантрацен.* 4 Метокси-3, 4 Бензантрацен | 0.0057 0.0025 0.01 0.005 | " | 4.0 5.8 5.2 13.0 |
| * Флюоресценция настроена на 45. |
таблица XXXVII Охлаждающих эффект разных смесей неконьюгированных и коньюгированных жирных кислот на флюоресценцию канцерогенных и СВЯЗАННЫХ с ними углеводородов.
| Углеводород | % Концентрация | Жирные кислоты из | Коньюгированые жирные кислоты из | Б-Элеостеариновая кислота | Ленолевая кислота | Кон. Линолевая кислота | Олеиновая кислота | ||
| Жира печени трески | |||||||||
| 0.1% | 0.1% | 0.1% | 0.1% | 0.1% | 0.1% | ||||
| Метилхолонтрен | 0.0062 | 92.5 | 25.0 | 95.8 | 95.0 | 89.8 | |||
| 3, 4 Бензперен | 0.0062 | 82.8 | 36.0 | 100.0 | — | ||||
| 1, 2 Бензантрацен | 0.0031 | 93.4 | 24.0 | 94.8 | 100.5 | 97.0 | 100.8 | ||
| 1, 2, 5, 6 Дибензантрацен | Нас. раств. (спирт) | 89.0 | 15.2 | 100.0 | 97.0 | 98.0 | 100.0 | ||
| 9, 10 Диметилl -1,2 Бензантрацен | 0.0062 | 90.8 | 23.0 | 97.8 | 93.5 | 100.0 | 96.0 | ||
| Рыбий жир
| |||||||||
| 0.2% | 0.2% | 0.2% | 0.2% | 0.2% | 0.2% | ||||
| Бензантрацен 12 ол -7 Метилацетат | 0.005 | 66.0 | 5.7 | 89.0 | 87.0 | 80.0 | 92.1 | ||
| 7 Хлоро-10 Метил -1,2 Бензантрацен | 0.005 | 67.0 | 7.9 | 84.0 | 85.0 | 87.0 | 87.0 | ||
| 1 Холантрен -3 Метил | 0.005 | 110.0 | 10.0 | 110.0 | 110.0 | 110.0 | 110.0 | ||
| Бензо (d) Пирен -5 Метил | 0.005 | 88.0 | 11.2 | 88.0 | 70.0 | 90.0 | 91.0 | ||
| 3, 10 Диметил -1,2 Бензантрацен | 0.001 | 72.0 | 6.5 | 63.0 | 78.0 | 74.0 | 73.0 | ||
| 7 Циано-10 Метил -1,2 Бензантрацен | 0.0057 | 83.5 | 4.0 | 91.0 | 90.2 | 88.5 | 91.0 | ||
| 5 Хлоро -10 Метил -1,2 Бензантрацен | 0.0025 | 89.0 | 5.8 | 92.0 | 95.0 | 92.0 | 93.5 | ||
| 6 Хлоро -10 Метил -1,2 Бензантрацен * | 0.01 | 47.0 | 5.2 | 43.0 | 45.0 | 42.0 | 45.0 | ||
| 4 Метокси -3, 4 Бензперен | 0.005 | 88.0 | 13.0 | 86.0 | 90.0 | 89.0 | 91.0 | ||
| * Флюоресценция настроена на 45. | |||||||||
Конъюгированные жирные кислоты и гашение.
Неконъюгированным жирным кислотам, таким как линолевая и линоленовая, арахидоновая, смешанные жирные кислоты, полученным из масла печени животных и масла печени трески, свойственно ограниченное действие гашения. Конъюгированные диены, такие как изомеры линолевой кислоты или конъюгированные триены, такие как элеостеариновая кислота, полученная благодаря конъюгации линоленовой кислоты или экстрагированная из масла китайского дерева, также оказывает ограниченный эффект гашения по отношению к углеводородным канцерогенам и родственным соединениям. (Таблица XXXVII) Все это также справедливо для смесей конъюгированных диенов и триенов.
Длина волны (mf)
Рис. 281. Спектральный анализ к онъюгированных жирных кислот масла печени трески обнаруживает присутствие конъюгированных диенов, триенов, тетраенов, пентаенов и гексаенов.
По данным спектрального анализа, обнаружена высокая степень гасящей активности смесей жирных кислот, имеющих конъюгированные диены, триены, тетраены, пентаены и гексаены, (Рис. 281) (Рис. 282) (ТАБЛИЦА XXXVII) при смешивании с углеводородными канцерогенами.
|
|
|
Эффект гашения жирных кислот не усиливает флуоресценцию углеводородных канцерогенов. При прохождении случайного луча, в начале, через 0.2% раствор конъюгированных жирных кислот масла рыбы в спирте, а затем через 0.012% раствор метилхолантрена в спирте, в отдельных сосудах, остаточная флюоресценция составляет 81%. При смешивании этих двух растворов в одной емкости остаточная флюоресценция составляет 11.2%.
Изучалась связь разных конъюгированных членов с гасящим действием. Смеси жирных кислот, имеющие разные пропорции содержания изомеров с 2, 3, 4, 5 и 6 конъюгированными двойными связями были получены путем конъюгации или обработки конъюгированных смесей теплом, кислородом, данные спектрального анализа проб, полученных в разные интервалы во время действия кислорода на смесь конъюгированных жирных кислот. Как видно, кислород вызывает не равные изменения высоты пиков кривых, соответствующих диенам, триенам, тетраенам, пентаенам и гексаенам. Рис. 284 демонстрирует гасящую активность этих смесей. Можно наблюдать параллелизм, существующий между относительными пропорциями тетраенового компонента и гасящей активностью этих смесей. Эксперимент показал, что гасящий эффект может быть также связан с присутствием конъюгированных пентаенов. Тем не менее, доказательства, полученные в результате проведения других экспериментов, не подтверждают это в должной мере.
Рис. 282. Эффект гашения хлором или серой и флюоресценция раствора метилхолантрена (.0062%) в спирте с разными концентрациями конъюгированных жирных кислот рыбьего жира. Изменения пропорций диенов, триенов, тетраенов, пентаенов и гексаенов отслеживались посредством проведения спектрального анализа. Затем изменения высоты пиков указанных кривых, соответствующих разным конъюгированным полиенам, сравнивались с изменениями эффекта гашения смесей соответствующих жирных кислот. Рисунок 283 демонстрирует
Рис. 283. Изменения спектров поглощения смеси конъюгированных жирных кислот из рыбьего жира, вызванные обработкой кислородом. Обработка оказала большее влияние на высшие ненасыщенные члены с уменьшением в процессе обработки пропорции триенов, тетраенов, пентаенов и гексаенов, что видно по уменьшению высоты пиков или даже по исчезновению их. Через 12 часов обработки конъюгированные диены оказываются единственными, не подвергшимися воздействию. Разведение до 0.002% в этиловом спирте.
|
|
|
Подобным же образом мы изучили воздействие, оказываемое серной кислотой на смесь конъюгированных жирных кислот жира печени трески. Рис. 285 демонстрирует часть происходящих изменений, Рис. 286 - эффект гашения.
Таким же образом мы изучили изменения в эффекте гашения во время конъюгации с КОH жирных кислот жира печени трески в этиловом спирте. Рис. 287 демонстрирует конъюгационный эффект, а рисунок 288 – эффект гашения, препарата в разные моменты в разных разведениях.
Вся проблема упростилась в результате изучения чистого конъюгированного тетраена. Мы получили чистую тетраеновую parinaric кислоту из масла
семян Parinarium laurinum. К тому же мы приготовили почти чистые тетраены, применяя методику, описанную Maury, Erode и Brown. К сожалению, последний из методов принес менее благоприятные результаты, доля тетраенов начала уменьшаться задолго до того, как исчезли конъюгированные диены и триены. Чистая тетраеновая конъюгированная кислота показала, что гасящее действие связано почти полностью только с тетраеновым компонентом, а в смеси она большей частью удерживается параллельно содержанию конъюгированных тетраеновых жирных кислот. Рис. 289 показывает кривую гашения, индуцированную parinaric кислотой.
Рис. 284. Связь между изменениями пиков диенов, триенов, тетраенов, пентаенов и гексаенов, по данным спектрального анализа проб конъюгированных жирных кислот рыбьего жира, обрабатывавшихся в течение разных отрезков времени кислородом и после гашения этих же проб. Существует тесный параллелизм между уменьшением пропорции тетраеновых и пентаеновых пиков и гасящей активностью смеси.
Рис. 285. Изменения в спектральном анализе смеси конъюгированных жирных кислот печени трески, индуцированные в результате обработки серной кислотой. Обработка приводит к неравному уменьшению количества разных конъюгированных членов. Показаны лишь две кривые - в начале лечения и через 260 минут.
Конъюгированные жирные кислоты и индуцированный канцерогенезs
Мы исследовали влияние, оказываемое жирными кислотами, конъюгированными и неконъюгированными, а также их смесями, на индукцию опухолей канцерогенами. Ряд экспериментов принес данные, которые пришлось исключить из результатов, из-за того, что применявшаяся доза метилхолантрена не индуцировала опухоли у достаточного числа животных контрольной группы для обеспечения проведения содержательного сравнения, или из-за того, что смертность от интеркуррентных причин была ненормально высокой и, поэтому, весь эксперимент признавали несостоявшимся.
|
|
|
Результаты успешно завершенных экспериментов обобщены в трех следующих таблицах. В первой группе экспериментов (Таблица XXXVIII), использованы 4 группы животных, каждая из которых была составлена из 40 взрослых Швейцарских мышей (по 20 самцов и 20 самок в каждой группе). Каждому животному в правый фланк вводили одну инъекцию 0.2 мг метилхолантрена подкожно в виде 0.2% раствора в трикаприлине. Эти животные также получали подкожные инъекции смеси жирных кислот, экстрагированных из жира печени трески, или смеси жирных кислот жира печени трески, конъюгированных путем их обработки KOH. Жирные кислоты назначались в виде 5% раствора, в масле семян хлопчатника.
Рис. 286. Изменения в гасящей активности обработанной смеси параллельны количественным изменениям, вызванным у тетраенов, пентаенов и гексаенов.
Животные, леченные жирными кислотами, получали 0.3 см3 этого раствора в контралатеральную сторону дважды в неделю в течение трех месяцев. Животные контрольной группы получали тот же объем масла хлопчатника в том же количестве инъекций. Дополнительно одна группа животных, леченная конъюгированными жирными кислотами, получила четыре инъекции на протяжении двух недель перед
Рис. 287. Спектральные анализы жирных кислот печени трески, обработанных KOH в этиловом спирте. Они демонстрируют появление больших количеств тетраенов, пентаенов и гексаенов.
Таблица XXXVIII
| Умерли | |||
| Лечение | Без опухолей | Опухоли | % с опухолями |
| Контроли с маслом хлопчатника Жирные кислоты из жира печени трески Коньюгированные жирные кислоты из жира печени трески Коньюгированные жирные кислоты из жира печени трескиl (*) | 10 3 6 14 | 12/30 18/37 7/34 3/26 | 40 48 20 11 |
* Получили 4 иньекции жирных кислот перед назначением метилхолонтрена
Рис. 288. Изменения в общей гасящей способности проб жира печени трески во время изомеризации с KOH в этиловом спирте. В то время как эффект гашения был уменьшен— даже для высоких концентраций—для пробы, имеющей лишь ½ часовую конъюгацию, он высок для полученных через 24 часа. Он остается почти прежним в пробе через 24 часа после конъюгации. Гашение, как установлено, связано с присутствием конъюгированных изомеров с двумя, или большим количеством, двойных связей.
Рис. 289. Эффект гашения parinaric кислоты на флюоресценцию метилхолантрена. Связь между эффектом гашения и присутствием конъюгированных тетраенов видна в том факте, согласно которому parinaric кислота оказывает эффект гашения 96,2 в разведении 0, 006% и 62% в разведении 0.0002%.
Инъекцию метилхолантрена. Тридцать три животных, не имевших опухолей, за время проведения эксперимента погибли. В каждую группу зачислены животные, пережившие пять месяцев, а также те, у которых за это время развились опухоли.
Во второй группе экспериментов (ТАБЛИЦА XXXIX) шесть групп по 40 мышей каждый получали одну подкожную инъекцию 0.25 мг 0,2% раствора метилхолантрена в трикаприлине, и вторую такую же инъекцию неделей позже. Группы были пролечены дважды в неделю в течение трех месяцев по 0.3 см3 5% растворов следующих жирных кислот в масле хлопчатника:
Жирные кислоты, полученные из жира печени трески, конъюгированные жирные кислоты из жира печени трески, элеостеариновая кислота, линолевая кислота и конъюгированная линолевая кислота. Животные контрольной группы получали по 0.3 см3 масла семян хлопчатника в контралатеральный фланк дважды в неделю в течение трех месяцев.
tableXXXIX
| Умерли | |||
| Лечение | Без опухолей | Опухоли | % с опухолями |
| Контроли с маслом хлопчатника Жирные кислоты из жира печени трески Коньюгированные жирные кислоты из жира печени трески Элеостеариновая кислота Линолевая кислота Коньюгированная ленолевая кислота | 4 3 6 10 0 6 | 31/36 33/37 15/34 24/30 29/40 25/34 | 86 89 44 80 72 73 |
В третьей группе экспериментов (ТАБЛИЦА XL) были вовлечены четыре группы по 30 мышей в каждой. Применялись смеси метилхолантрена и жирных кислот, приготовленные путем добавления 0.5 см3 5% растворов жирных кислот в масле хлопчатника к 0.25 мг 0.25% раствора метилхолантрена в трикаприлине. Инъекции выполнялись подкожно, немедленно после смешивания. Каждое животное получало три инъекции с недельными интервалами и наблюдение в течение последующих 5 месяцев было направлено на выявление появившейся опухоли. Применялись жирные кислоты из рыбьего жира, конъюгированные жирные кислоты из рыбьего жира, смесь равных частей элеостеариновой и конъюгированной линолевой кислот и масло хлопчатника в виде контроля. Эффект гашения показан в процентах от остаточной флюоресценции метилхолантрена при смешивании со смесями жирных кислот.
Эти результаты указывают на определенную связь между гасящим действием конъюгированных жирных кислот на углеводородные канцерогены и способностью жирных кислот уменьшать канцерогенность таких углеводородов. Недостаточно иметь в наличии конъюгированные жирные кислоты для обеспечения воздействия на канцерогенез. Элеостеариновая кислота существенно не уменьшила появление опухолей, и конъюгированная кислота не показала активность большую, чем ее неконъюгированный изомер.
Таблица XL
| Лечение | % остаточной флюорисценции | Умерли без опухолей | Опухоли | % без опухолей |
| Метилхолантрен+масло хлопчаиника | 95 | 6 | 33/44 | 86 |
| Метилхолантрен+Жирные кислоты из рыбьего жира | 85 | 4 | 20/46 | 43 |
| Метилхолантрен+коньюгированные жирные кислоты из жира печени рыбы | 19 | 4 | 6/46 | 13 |
| Метилхолантрен+элеостеариновая и коньюгированная линолевая кислота | 92 | 11 | 24/39 | 61 |
Конъюгированные жирные кислоты рыбьего жира (содержащие ди-, три-, тетра-, пнта-гексаены), при смешивании с метихолантреном, уменьшили появление опухоли до 13%, в то время как смесь элеостеариновой и конъюгированной линолевой кислоты (ди-, и триеновые конъюгированные кислоты), обладающая ограниченным гасящим действием дала частоту появления 61%. Хотя появление опухолей была намного ниже в группе, получавшей конъюгированные жирные кислоты из рыбьего жира, неконъюгированные жирные кислоты из того же источника оказывали ограниченное влияние на свойство углеводорода индуцировать рак. Когда жирные кислоты не смешивали с канцерогеном, но вводились в инъекциях раздельно, неконъюгированные кислоты появлялись без эффекта.
Статистический анализ данных этих трех экспериментов показывает следующее: результаты являются значимыми для группы, обработанной конъюгированными жирными кислотами, полученными из жира печени трески перед и после назначением метилхолантерна, по сравнению с контрольной группой, леченной маслом хлопчатника в Эксперименте I (x2 = 6.65 на основе опухоль/не опухоль). В Эксперименте II, результаты были очень значимыми для группы, леченой конъюгированными жирными кислотами жира печени трески, по сравнению с контрольной группой (X2 = 13.09). В Эксперименте III результаты оказались очень значимыми для всех трех групп, в которых жирные кислоты добавлялись к метилхолантрену X2== 13.3, 41.56 и 8.32 соответственно).
Когда сравнение проводится по признакам опухоли/нет опухолей, между группами, получавшими неконъюгированные и конъюгированные изомеры этих же смесей жирных кислот, результаты оказались значимыми во всех трех экспериментах (X2= 8 в Эксперименте I, 22 в Эксперименте II, и 12 в Эксперименте III).
В свете связи между активностью гашения и уменьшением канцерогенной активности мы исследуем разные другие агенты. Таблица XLI демонстрирует значения этого эффекта.
table XLI гашение метилхолантрена 0.062% в этиловом спирте веществами, отличными от жирных кислот
| Вещество | Применённый % развдения | Флюоресценция |
| глицерин | 5.0 | 106.8 |
| n-бутанол | 4.5 | 96.4 |
| Бутиловый меркаптан | 1.0 | 102.5 |
| Гексил меркаптан | 2.0 | 92.0 |
| Додецил меркаптан | 2.0 | 82.0 |
| Гексадецин меркаптан | 2.0 | 70.0 |
| Тиосульфат Na | .05 см3 из 50% раствора | 97.0 |
| Ethyl sulfate | 1.0 | 95.0 |
| Nitrogen mustard | 0.1 | 79.9 |
| Allyl K xanthate | 1.0 | 3.8 |
| Нитрометан | 1.0 | 7.4 |
| Этиленовый тритиокарбомат | 1.0 | .2 |
| Холестерин | 1.0 | 93.0 |
Глава 12, Заметка 5. Липиды и опухолевые хлориды
Мы подвергли группы мышей, которым была пересажена DBA аденокарцинома грудной железы, лечению разными препаратами жирных кислот или положительных липоидов. После проведения десятидневного курса лечения опухоли удаляли и анализировали на предмет содержания в них хлоридов с использованием методики Volhard, в которой выполнялось электрометрическое титрование нитрата серебра. В качестве жирных кислот нами применялись в эксперименте жирные кислоты жира печени трески, жирные кислоты, полученные из человеческой плаценты и бутилмеркаптан; в качестве липидов с положительным характером мы применяли холестерин, неомыляемые фракции человеческой плаценты и бутанол. Во всех случаях, леченных жирными кислотами, количество хлоридов было выше, чем у нелеченных контролей. Для группы, леченных жирными кислотами жира печени трески, обнаружены значения, повышенные до 135% сверх значений контрольной группы. Для жирных кислот человеческой плаценты средняя величина составила 114% сверх той, что была свойственна контрольной группе; для меркаптанов - сверх 78%. Влияние, оказываемое противоположными липидами оказалось много менее демонстративным. Для группы, леченной холестерином и неомыляемыми фракциями, значение содержания хлоридов составило на 20% ниже, чем в контрольной группе; для бутанола - на 33% ниже.
Глава 12, Заметка 6. Альфа-OH жирные кислоты и экспериментальные опухоли
Мы изучили влияние, оказываемое жирными кислотами ряда альфа OH, насыщенными и ненасыщенными, на развитие разных опухолей у мышей и крыс. Оказалось, что лишь один член демонстрировал воздействие на один вид опухоли. Подкожные трансплантаты лимфосаркомы 6C3HED у линии мышей C3H росли с ненормальной скоростью, уже через 48 часов после выполнения пересадки, опухоль пальпировалась. Опухоль, очень мягкая, очень отечная, а посему диффузная, развивалась настолько быстро, что смерть наступала обычно в районе десятого дня. Указанная опухоль оказалась особо резистентной по отношению ко многим химиотерапевтическим средствам. Назначение ежедневно 5% раствора альфа OH каприловой кислоты в дозе 0.2-0.5 см3, начатое даже на пятый день после пересадки, когда опухоль была уже хорошо развита, приводило к ее быстрой инволюции и исчезновению в большом проценте случаев (55/60). В нескольких случаях, в которых опухоль персистировала, ее развитие сильно менялось. Животные оставались, живы в течение более месяца. Если через три
Рис. 290. Назначение альфа OH каприловой кислоты мышам, имеющим 6C3 HED лимфосаркому, индуцирует исчезновение опухоли в большом проценте случаев.
или четыре дня, когда опухоль уже сильно уменьшилась, назначение препаратов прерывали. Опухоль опять начинала расти, но значительно медленнее, чем обычно.
Глава 12, Заметка 7. Гидроперсульфиды
Существование разных связей между ненасыщенными жирными кислотами и кислородом побудило нас изучить разные связи, одинаково образующиеся, между одними и теми же жирными кислотами и серой, вторым членом ряда кислорода. Обработка полиненасыщенных жирных кислот, или их триглицеридов, серой показала, что могут быть получены два разных образования. При нагревании этих смесей сверх 110°, но ниже 125° C, преципитированная сера инкорпорируется, без явного изменения цвета или других свойств. Иодное число не изменяется. При обработке конъюгированных жирных кислот, или их триглицеридов, по данным спектрального анализа, изменений не обнаруживали. При нагревании сверх 130° C, цвет препарата постепенно менялся, достигая интенсивного красно-черного цвета, при условии достаточно долгого лечения. Со временем, иодное число уменьшается и, наконец, достигает нуля. Спектральный анализ конъюгированных жирных кислот демонстрирует пики, постепенно идущие вниз вплоть до полного отсутствия конъюгированных образований, что указывает - происходящие изменения воздействуют на двойную связь.
Аналогия между фиксирующим действием кислорода и серы свидетельствует в пользу того, что первая связь соответствует гидроперсульфиду в той же степени, что и гидропероксиду. Вторая связь будет представлять фиксацию серы на уровне самой двойной связи, идентично перекиси. Исследования этих же связей серы были выполнены с тетралином с получением гидроперсульфидов. Изучение свойств всех указанных препаратов, вероятно, подтверждает гипотезу о том, что полученные соединения представляют гидроперсульфиды.
Рис. 291. Гашение флюоресценции метилхолантрена в пробах, полученных, когда 0.5% сера в масле хлопчатника нагревалась со 120°C до 280°C. Пробы растворялись в эфирноспиртовой смеси и перемешивались в равных пропорциях с.0125% метилхолантреном. Существование сопутствующих изменений в масле, содержащем серу, и в чистом масле указывает на то, что вариации вызваны, прежде всего, изменениями, происходящими в самом масле в процессе нагревания.
Мы изучили изменения в воздействии гашения на флюоресценцию метилхолантрена, происходящем при нагревании смеси триглицеридов, в которую добавлена сера. Указанный эффект сравнили с таковым, полученным при нагревании одного масла хлопчатника. Рис. 291 демонстрирует результаты такого анализа.
Глава 12, Заметка 9. Магний и адреналэктомия
Факт наличия биологического антагонизма между гомотропическим магнием и гетеротропическим натрием, обоих действующих на межклеточном уровне, побудил нас изучить специфическое влияние, оказываемое магнием на процессы выздоровления у адреналэктомированных крыс. Как известно, если для старых крыс адреналэктомия не всегда является фатальной, то у более молодых животных, вес которых составляет менее 150 г, такая операция всегда вызывает их гибель.
Назначение 1% хлорида натрия в качестве питьевой воды, как известно, защищает адреналэктомированных животных, а при условии назначения достаточно продолжительное время, предотвращает и смерть. Назначение сульфата магния путем повторных инъекций.5 см3 10% раствора на 100 г веса тела или даже перорально в виде.5—1% в питьевой воде, оказывает противоположное хлориду натрия действие. Установлено, что смертность старых животных, получавших сульфат магния, составила 75%, по сравнению с 20% - у нелеченных. Идентично, у молодых животных, получавших сульфат магния в дополнение к соленой питьевой воде, смертность в некоторых экспериментах превышала 80%.
Глава 13, Заметка 1. Глицерин и ознобы
В группе сильно обожженных субъектов, находившихся к этому времени под нашим наблюдением и испытывавших несколько ознобов в сутки, в момент начала озноба выполнялась инъекция раствора глицерина. Если до этого лечения озноб у данного пациента продолжался больше десяти минут, после выполнения инъекции глицерина озноб немедленно прекращался.
Эксперимент был предпринят для установления подтверждения или опровержения указанного факта. Как только любой из указанных пациентов начинал чувствовать предвестники озноба, ему выполнялась внутримышечная инъекция 3-5 см3 20% раствора глицерина в физрастворе или 3 см3 физраствора в виде плацебо. Почти в каждом случае озноб немедленно прекращался при введении глицерина, в то время как плацебо действия на него не оказывало. Менее поразительный, но все же интересный, эффект отмечен при даче перорально 20 - 30 капель глицерина в 50 см3 воды, при сравнении с пероральным назначением в качестве плацебо 1% раствора сахара в воде.
Ни одно из других веществ, применявшихся в это время, такие как адреналин, хинин, пилокарпин или пантопон, при назначении перорально или парентерально, не оказывало влияния на озноб, если он уже начался. Позже было установлено, что бутанол также оказывает воздействие, подобное глицерину, но менее явное.
Со времени своего первого испытания глицерина в эксперименте мы применили его у многих пациентов, страдающих повторяющимися ознобами, и часто получали тот же результат. Мы попытались объяснить эффект глицерина на ознобы, учитывая роль ознобов в механизме защиты. Озноб рассматривали как признак начала второй фазы двухфазного защитного феномена (смотрите Главу 5.) Он влечет за собой разные составляющие, особенно те из них, которые должны заместить составляющие, поврежденные в первой гидролитической фазе. Среди них имеются агенты, которые обладают особой способностью воздействовать на свободные жирные кислоты, освободившиеся в первую фазу. Очевидно, что из-за того, что требуется определенное время для перехода антижирокислотных агентов в систему циркуляции, многие из которых исходят из клеток ретикулоэндотелиальной системы, ознобы столь продолжительны. Непосредственное присутствие в крови достаточно количества глицерина, являющегося относительно эффективным антижирокислотным агентом, избавляет от необходимости освобождение антижирокислотных агентов из организма. Поэтому, при доступности глицерина, для высвобождения подобных агентов озноб не будет нужен, и не будет происходить.
Глава 13, Заметка 2. Влияние глицерина на ритм сердца
Рисунок 292 демонстрирует электрокардиограмму кроля, получающего внутривенно 20% раствор глицерина. Появлялись частые экстрасистолы. Интересно отметить, что в это же время животное становится сонливым.
Рис. 292. Электрокардиограмма кроля, получающего внутривенные инъекции 20% раствора глицерина, характеризующаяся появлением экстрасистол. (a) перед лечением, (b) после 30 см3.
Рис. 293. Экстрасистолы появляются после внутрибрюшной инъекции бутанола в очень высоких дозах, (a) перед лечением, (b) после 1.6 г/1000 г животного.
Глава 13, Заметка 3. Судороги, вызванные глицерином
Наблюдалась индукция судорог у крыс после повторных инъекций глицерина. Применяя крыс весом 200-250 г, выполнялась внутрибрюшная инъекция 5 - 10 см3 20% раствора глицерина в физрастворе. Инъекции повторяли один или два раза в день. После нескольких дней лечения, обычно 3-5 дней, через несколько минут после одной из инъекций следовали сильные судороги, оказывавшиеся для большинства животных летальными. У выживших животных следующая инъекция также сопровождалась приступом с летальным исходом.
Глава 13, Заметка 4. Суспензии липоидов
Для получения коллоидных суспензий, разные липоиды растворяли в спирте, и определенное количество этого спиртового раствора смешивали с водой, физраствором или изотоническими растворами. Из получавшихся молокоподобных суспензий элиминировали спирт путем кипячения при пониженном давлении. Для того, чтобы убедиться в полном удалении растворителя, добавляли избыток воды, который затем удаляли путем кипячения. Применение ацетона или эфира в качестве растворителя приносило много менее благоприятные результаты.
Путем смешивания некоторых липидных препаратов, таких как смеси ненасыщенных жирных кислот с 0.5% раствором cellulose gum, были получены относительно стабильные суспензии. Последние не могли быть получены из препаратов с положительными липидами.
Глава 13, Заметка 5. Судороги, вызываемые холестерином
В случае применения сравнительно больших доз, таких как 5 см3 2% холестерина ежедневно, при повторном назначении крысам весом около 250 г, судороги появлялись через 4-8 дней. Они индуцировались раньше у самок, чем у самцов. Уже первые судороги всегда оказывались смертельными. Судороги также появлялись у людей после повторных инъекций холестерина в дозах до 20 см3 2% раствора в масле. Даже малые дозы, такие как 2 или 3 см3 этого же раствора, индуцировали судороги у пациентов с метастазами в головной мозг или у тех из них, которые ранее страдали судорогами.
Глава 13, Заметка 6. Лечение в последующих поколениях
Сравнительно короткое время выживания животных, несущих пересаженные опухоли, было помехой для изучения влияния, оказываемого многими агентами. Потому что эффекты, требующие определенного времени для своего проявления, таким образом, утрачиваются. Изменения, происходящие в опухолях, такие как, тенденция к изъязвлению после лечения жирными кислотами, как было установлено, передаются в последовательных поколениях опухолей. Это привело нас к необходимости проводить лечение в период, превышающий время выживания одного индивидуального хозяина для изучения влияния разных агентов. В одной группе экспериментов указанная идея была воплощена путем проведения лечения последовательных хозяев ряда трансплантатов. В другой группе экспериментов лечение применено по отношению к самим трансплантатам у последовательных хозяев.
Мышей с пересаженными опухолями лечили выбранными агентами. Когда опухоль у леченого хозяина, или контрольного животного, выросла до 1 1/2 см в диаметре, она удалялась. Ее часть использовалась для дальнейшей трансплантации, часть - для микроскопических исследований. Оставшаяся часть животных содержалась пожизненно и выживаемость отмечалась. Трансплантаты опухоли от леченных животных, также как из животных контрольной группы, пересаживались новым животным, и продолжали лечение уже новых хозяев. Подобная методика повторялась для последовательных поколений. В других экспериментах последовательные трансплантаты погружали, перед их пересадкой, в масляный раствор или в суспензию в физрастворе тестируемого агента. Процедуру повторяли за время проведения эксперимента, как для леченных животных, так и для животных контрольной группы, рост и время выживания регистрировались. Характерен следующий эксперимент.
Применяя неомыляемые фракции человеческой плаценты в масляном 5% растворе, или в суспензии фоизраствора, из расчета 2 мг материала на 1 см3, в случае эрлиховской карциномы грудной железы мыши получены следующие результаты. В первом, а в некоторых экспериментах, и во втором поколениях, не установлено изменений по времени выживания, развитию опухоли, макроскопичесим или микроскопическим характеристикам. Обычно в третьем поколении время выживания уменьшалось, при этом опухоль росла быстрее, убивая животное, приблизительно, за 20 дней. Злокачественный характер опухоли, как было установлено, увеличивался в последовательных трансплантатах и в пятом поколении в ряде экспериментов, убивая животных
Рис. 294. Спектральный анализ неомыляемой фракции разного происхождения. Он де
|
|
|
