Оптимальное время спаривания сук

Гари С.В. Ингленд

 

Введение

Время овуляции у сук варьирует в зависимости от начала проэструса. Однако многие заводчики навязывают стандартные режимы спаривания своих животных, обычно через определенное количество дней после начала кровянистых выделений из влагалища. Поэтому суки часто спариваются в неподходящее время, и это обуславливает часто встречаемую причину мнимого бесплодия.

Имеется несколько исследовательских методов для определения оптимального времени спаривания, включая измерение уровня гормонов в крови, исследование отслоившихся клеток влагалища и эндоскопию влагалища. Невозможность определить время овуляции и добиться беременности является значимой проблемой у этого вида, так как суки являются моноэстральными животными и средний межэстральный период составляет 31 неделю.

 

Физиология размножения

Ооциты у сук овулируют в незрелом состоянии и, в отличие от других видов, не могут быть оплодотворены немедленно. Оплодотворение может произойти только вслед за созреванием первичных ооцитов, изгнания полярного тельца и завершения первого мейотического деления. Эти процессы протекают, по крайней мере, 48 часов, после овуляции. Овуляция происходит через 2 дня после всплеска уровня лютеинизирующего гормона (ЛГ) в плазме. Ооциты остаются жизнеспособными в репродуктивном тракте еще 4-5 дня до разрушения. Поэтому “период оплодотворения” сук растягивается от 4 до 7 дней после преовуляционного всплеска уровня лютеинизирующего гормона (то есть через 2-5 дней после овуляции). Также может быть выделен следующий временной интервал - “фертильный период” (период возможности оплодотворения яйцеклетки). Это время, в течение которого спаривание может приводить к зачатию. В этот период входит период оплодотворения, но ему предшествует несколько дней, вследствие выживания спермиев внутри репродуктивных органов самки до овуляции и созревания ооцитов. Фертильный период растягивается от 3 дней до и до 7 дней после преовуляционного повышения уровня лютеинизирующего гормона и может быть даже длиннее у собак с превосходным качеством спермы (рис. 8.1).

 

Определение оптимального времени для спаривания

Оптимальное время для спаривания, вероятно, приходится на период оплодотворения, или непосредственно предшествует ему. Период максимальной фертильности при естественном способе спаривания от одного дня до и до 6 дней после всплеска уровня лютеинизирующего гормона (ЛГ). Определение оптимального времени для спаривания может быть оценено путем измерения всплеска уровня ЛГ, или методами, которые точно укажут фертильный период или, что больше предпочтительней, период оплодотворения. Когда предполагается использование замороженной спермы, то чтобы достичь успеха, осеменение должно осуществляться только во время периода оплодотворения.

 

Рис. 8.1 Схематичное изображение изменения уровня эстрогенов, лютеинизирующего гормона и прогестерона по отношению к овуляции и фертильному периоду и периоду оплодотворения у сук.

По вертикали – уровень гормонов (произвольные единицы)

По горизонтали – Дни по отношению к всплеску уровня лютеинизирующего гормона (ЛГ)

Ovulation – овуляция

Красная линия - лютеинизирующий гормон

Синяя линия – прогестерон

Черная линия - эстроген

Светло-серая линия – фертильный период

Темно-серая линия – период оплодотворения

 

Клиническая оценка

Многие заводчики собак опираются на подсчет количества дней от начала проэструса, и многие верят, что овуляция у сук всегда происходит через определенное количество дней после начала этого состояния. Это не так, и хотя у “средней суки” овуляция может произойти через 12 дней после начала проэструса (и поэтому она должна быть спарена на 14 и 16 день), у некоторых сук овуляция происходит очень рано, на 5 день, или поздно – на 30 день после начала проэструса. Поэтому может быть видно, что спаривание на 12 и 14 день, что является обычной практикой спаривания, может не приводить к зачатию.

В результате первоначальных исследований на лабораторных суках было высказано предположение, что начало появления эструса совпадает по времени со всплеском уровня ЛГ. Основываясь на эти данные, спаривание через 4 дня от начала появления эструса должно быть подходящим временем. Однако было показано, что у многих сук поведенческие признаки плохо коррелиют с нижележащими гормональными сдвигами, и поэтому этот метод имеет небольшую ценность.

Одним из клинических признаков, который может быть полезен при определении оптимального времени спаривания сук, является момент размягчения вульвы. Во время проэструса вульва и ткани промежности увеличиваются, отекают и слегка опухают. Различимое размягчение вульвы часто возникает во время всплеска уровня ЛГ, когда наблюдается изменение с высокого уровня эстрогенов до низкого уровня эстрогенов с подъемом уровня прогестерона.

Когда для предсказания оптимального времени спаривания доступна лишь клиническая оценка, сочетание начала появления признаков эструса и момента размягчения вульвы может быть полезным, так как каждое событие возникает приблизительно за 2 дня до овуляции.

 

Рис. 8.2 Фотомикрография влагалищного мазка, взятого от суки на ранней стадии эструса и окрашенная модифицированной краской Wright-Giemsa. Наблюдается несколько типов эпителиальных клеток, от маленьких эпителиальных клеток с маленькой цитоплазмой до клеток, которые имеют большую цитоплазму либо с пикнотическим, либо с отсутствующим ядром.

 

Рис. 8.3 Схематичное изображение изменений в процентном соотношении безъядерных клеток по отношению к овуляции и уровню прогестерона в плазме.

По вертикали – процент безъядерных клеток, уровень прогестерона

По горизонтали – Дни относительно всплеска уровня ЛГ

Ovulation –овуляция

Красная линия – Безъядерные клетки

Синяя линия – уровень прогестерона в плазме

 

Определение уровня гормонов в плазме крови

Определение уровня ЛГ в плазме периферической крови является надежным и точным методом определения оптимального времени спаривания. Не существует готовых наборов анализов для определения ЛГ собак и в настоящее время определение требует радиоиммуноанализа (РИА). Этот метод очень трудоемкий и дорогой, и часто имеется задержка в получении результатов, так как пробы исследует партиями. Если концентрация ЛГ измерена, спаривание или осеменение может быть запланировано между 4 и 6 днями после всплеска уровня ЛГ.

У сук для предсказания времени спаривания может быть полезен необычный феномен предовуляционной лютеинезации. Уровень прогестерона в плазме начинает повышаться от основного уровня приблизительно за 2 дня до овуляции. Поэтому серийный мониторинг уровня прогестерона в плазме позволяет предсказать овуляцию, подтвердить овуляцию и определить период оплодотворения. Так как вначале уровень прогестерона повышается постепенно, образцы крови необходимо брать каждый второй или третий день, в отличие от ежедневного режима, необходимого для определения всплеска уровня ЛГ. Спаривание или осеменение должно планироваться между 4 и 6 днем, после того как уровень прогестерона в плазме превысит 6,5 нмоль/л (величина во время всплеска уровня ЛГ), или предпочтительно должно начинаться через день, после того как уровень превысит 25,0-32,0 нмоль/л (начало периода оплодотворения). Уровень прогестерона может быть определен с помощью РИА, хотя недавно стало возможным приобрести наборы для проведения нескольких твердофазных иммуноферментных анализов (ELISA). Эти наборы позволяют определять уровень прогестерона либо качественно, либо количественно в течение 45-60 минут после получения пробы. Они нашли широкое клиническое применение и поспособствовали значительному повышению степени наступления беременности.

 

Цитология мазка из влагалища

Взятие, окрашивание и микроскопическое исследование слущенных клеток влагалища является простым методом отслеживания стадии эстрального цикла. Клетки влагалища могут быть собраны или увлажненным ватным тампоном, проведенным по влагалищу, или путем аспирации из полости влагалища с помощью пластикового катетера. Когда используется первый метод важно не допустить контакта тампона с преддверием влагалища, так как сбор этих клеток будет давать ошибочные результаты; стоит использовать маленькое зеркало или проводник. После того как мазок взят, клетки помещают на предметное стекло, проводя по нему тампоном или нанеся аспирированную жидкость, которую затем размазывают в тонкий слой. Мазок может быть окрашен с помощью либо простой краски (например, Diff-Quick^® или модифицированной Wright-Giemsa краски), либо модифицированной трихромной краски. Первая краска уже готова и имеет преимущество в том, что приготовление препарата занимает несколько секунд; вторая краска имеет преимущество в том, что она позволяет определять кератинизированные клетки, хотя техника окрашивания трудная.

Во время проэструса уровень эстрогена в периферической плазме повышается, вызывая утолщение слизистой оболочки влагалища и увеличение количества слоев клеток. Слизистая оболочка меняется из кубического эпителия в кератинизированный чешуйчатый эпителий. Так как слизистая оболочка утолщается, поверхностные клетки меняют свою форму, размер и способность к окрашиванию, становясь больше, неправильной формы и, в конце концов, безъядерными (рис. 8.2). Относительное соотношение различных типов эпителиальных клеток может быть использовано как маркер эндокринного статуса. Использовано несколько индексов ороговения и кератинизации; в целом фертильный период может быть предсказан путем вычисления процента безъядерных эпителиальных клеток, выявленных при использовании Diff-Quick^® или модифицированной Wright-Giemsa краски. Спаривание должно проводиться на всем протяжении периода, когда более чем 80 % эпителиальных клеток безъядерные (фертильный период) (рис. 8.3).

В конце периода оплодотворения уровень прогестерона в плазме остается на высоком уровне и наблюдается слущивание большей части эпителиальных клеток влагалища. Количество слоев клеток уменьшается, глубжележащие клетки обнажаются, и процент больших нерегулярной формы безъядерных клеток уменьшается.

Полиморфноядерные лейкоциты, как правило, исчезают из влагалищного мазка во время фертильного периода, однако они вновь появляются в большом количестве в конце периода оплодотворения, когда уровень прогестерона в плазме высокий. В это время во влагалищном мазке преимущественно обнаруживают маленькие эпителиальные клетки, клеточные остатки, бактерии и полиморфноядерные лейкоциты.

Хотя цитология влагалищного мазка является полезным методом, у некоторых сук полиморфноядерные лейкоциты могут быть обнаружены на протяжении всего фертильного периода и в других максимальных показателях достигается лишь 60% безъядерных клеток.

 

Эндоскопия влагалища

Эндоскопия влагалища (вагиноскопия) представляет собой исследование слизистой оболочки влагалища с помощью жесткого эндоскопа. Не подвергнутые седации стоящие суки хорошо переносят процедуру. Исследование занимает около 2 минут, и ценная информация может быть получена быстро и при минимальных затратах.

Вагиноскопическая оценка базируется на осмотре контуров и очертаний складок слизистой оболочки влагалища, цвета слизистой оболочки и наличие любой жидкости. Во время анэструса слизистая оболочка влагалища относительно ровная, сухая и красная на вид. В начале проэструса и во время ранней стадии эструса складки слизистой оболочки увеличены, отечны и розовые или розовые/белые по цвету. Эти изменения обусловлены утолщением эпителиального слоя слизистой оболочки и отеком внутри подслизистой оболочки, все это является следствием влияния эстрогенов. Приблизительно во время всплеска уровня ЛГ наблюдается прогрессирующее уменьшение складок, сопровождающееся побледнением слизистой оболочки. Эти эффекты, возможно, являются результатом внезапного прекращения эффекта задержания воды эстрогенами, во время предовуляторного снижения их уровня. Впоследствии, уменьшение толщины слизистой оболочки сопровождается сморщиванием складок слизистой оболочки, которые становятся заметно угловатыми и цветом от нежно кремового до белого.

Начало фертильного периода может быть определено при выявлении уменьшеной толщины слизистой оболочки без угловатости, в то время как уменьшение толщины с угловатостью характеризует период оплодотворения. Спаривание или осеменение должно планироваться во время периода оплодотворения или через 4-6 дней после первого выявленного уменьшения толщины слизистой оболочки. Окончание периода оплодотворения может быть выявлено путем наблюдения снижения или остановки уменьшения толщины слизистой оболочки, наряду со слущиванием эпителия влагалища.

Вагиноскопические изменения полезны в клинической практике, так как они прогрессирующие, поэтому нет необходимости обследовать суку каждый день.

 

Ультразвуковое исследование

Было четко продемонстрировано, что яичники суки могут быть определены с помощью ультразвукового исследования в реальном времени в B-режиме. Путем тщательного и повторного исследования можно отслеживать рост фолликула и определять время овуляции. Однако в целом овуляцию трудно определить, так как фолликулы не разрушаются, а желтое тело имеет центральную заполненную жидкостью полость. Наступление овуляции может быть предположено при выявлении уменьшения количества фолликулов и субъективного уменьшения размеров фолликулов, хотя методика на сегодняшний день, по-видимому, имеет небольшое клиническое применение.

 

Исследование цервикальновлагалищной секреции

У небольшого количества сук показано, что электрическое сопротивление влагалищного секрета уменьшается во время поздней стадии эструса. Эти изменения, поэтому должны быть полезными для определения фертильного периода. Методика плохо исследована у домашних собак, хотя она широко используется для определения оптимального времени осеменения у самок лисиц.

Некоторые практики исследовали изменения в концентрации глюкозы во влагалищных выделениях сук, и этот метод используется некоторыми заводчиками собак для определения времени спаривания. Однако методика не нашла научного подтверждения и считается почти бесполезной.

Кристаллизация слизистой оболочки, собранной из переднего отдела влагалища описана у сук и возникает после максимальной концентрации эстрогена в плазме. Оценка слизистой оболочки, которая происходит из железистой ткани шейки матки, может быть полезной в комбинации с цитологией влагалищного мазка для определения оптимального времени спаривания.

 

Заключение

Большинство представленных сук для исследования способности к оплодотворению это нормальные, здоровые, фертильные животные, чье кажущееся бесплодие связано с непониманием физиологии размножения. Много сук спариваются в неподходящее время, и аккуратный мониторинг каждой суки во время каждого эстрального цикла помогает выбрать оптимальное время для спаривания или осеменения.

Спаривание должно планироваться во время фертильного периода или периода оплодотворения; эти периоды могут быть точно установлены с помощью определения уровня прогестерона в плазме крови, оценки влагалищной цитологии или эндоскопии влагалища. У большинства сук достаточно начинать мониторинг, начиная приблизительно с 7 дня после начала проэструса. Следование этой схеме будет приводить к значительному повышению частоты наступления беременности и размера помета (England, 1992).

Когда необходимо использовать сперму условно оптимального качества, например, когда имеется мужской фактор бесплодия, или когда сперма была подвергнута криоконсервированию, необходимо чтобы спаривание или осеменение проходило во время периода оплодотворения.

 

Литература

 

Глава девятая

⇐ Предыдущая45678910111213Следующая ⇒

Поделиться: