 |
3. Практическая работа.. Показатели интенсивности реакции русла микроциркуляции
|
|
|
|
3. Практическая работа.
3. 1. Сделать лабораторную работу «Сосудистая реакция при воспалении брыжейки тонкого кишечника (Опыт Ю. Конгейма)».
Цель: изучить стадии сосудистой реакции при воспалении.
Методика проведения: обездвиженную лягушку фиксируют на препаровальной доске на животе, готовят препарат брыжейки тонкого кишечника. Сам процесс приготовления препарата является фактором, вызывающим воспаление. Наблюдают за микроциркуляцией в сосудах брыжейки в течение 40 мин, оценивая по 4-бальной шкале (1-4 креста) выраженность признаков, указанных в таблице. Выделяют стадии сосудистой реакции при воспалении. Полученные данные заносят в табл. 1. В выводах указывают стадии сосудистой реакции при воспалении и их характерные признаки. Примечание: в данной экспериментальной модели при использовании большого увеличения микроскопа можно проследить пристеночное стояние и эмиграцию лейкоцитов в очаг воспаления.
Результаты:
Таблица 1. Динамика изменений микроциркуляции при воспалении
| Показатели | Время от начала наблюдения (мин. ) | ||||||||
| Диаметр сосудов | |||||||||
| Линейная скорость кровотока | |||||||||
| Объемная скорость кровотока | |||||||||
| Количество функционирую-щих микрососудов | |||||||||
| Толчкообразное движение крови | |||||||||
| Маятникообраз-ное движение крови | |||||||||
| Тромбоз | |||||||||
| Стаз | |||||||||
|
|
|
Выводы:
3. 2. Сделать лабораторную работу «Нарушение нервной и гуморальной регуляции микроциркуляции в воспалительном очаге».
Цель: проследить особенности нарушения нейро-гуморальной регуляции интенсивности периферического кровообращения в воспалительном очаге.
Готовят препараты плавательной перепонки на обеих лапках у лягушки. На одной лапке выделяют седалищный нерв, подводят под него лигатуру. Оценивают интенсивность микроциркуляции на обеих лапках. Затем регистрируют показатели исходного фона. Для этого определяют сосудосуживающие эффекты раздражения седалищного нерва (нервный вазоконстрикторный фактор), а также адреналина (гуморальный вазоконстрикторный фактор). Ампульный раствор адреналина перед употреблением разводят дистиллированной водой в 10 раз. Определяют интенсивность реакции микрососудов (диаметр, количество функционирующих сосудов, линейную и объемную скорости кровотока). Моделируют воспалительный очаг на поверхности слизистой плавательной перепонки. Для этого к ней прикладывают ляписный карандаш. В течение 30 минут наблюдают реакцию микрососудов в плавательной перепонке на обеих лапках, через каждые 5 минуты оценивают влияние раздражения седалищного нерва и раствора адреналина на интенсивность микроциркуляции. Данные заносят в таблицу 2
Таблица 2.
Интенсивность реакции микрососудов на нервный (числитель) и гуморальный (знаменатель) сосудосуживающие факторы при воспалении.
Таблица 3. Интенсивность реакции микрососудов на нервный (числитель) и гуморальный (знаменатель) сосудосуживающие факторы при воспалении.
| Стадия эксперимента |
Показатели интенсивности реакции русла микроциркуляции | |||
| Изменения диаметра микрососудов | Изменения количества функционирующих капилляров | Изменение линейной скорости | Изменение объемной скорости | |
| Исходный фон | ||||
| Воспаление | ||||
| 5 мин | ||||
| 10 мин | ||||
| 15 мин | ||||
| 20 мин | ||||
| 25 мин | ||||
| 30 мин | ||||
|
|
|
В выводах описать изменения реакции микроциркуляторного русла на нервные и гуморальные факторы при воспалении.
Выводы:
3. 3. Сделать лабораторную работу «Порядок выхода лейкоцитов в очаг воспаления (опыт И. И. Мечникова)».
Цель: исследовать порядок выхода лейкоцитов в очаг воспаления. Определить стадию клеточной реакции при воспалении у животного и соответствие стадии времени с начала воспаления.
Методика: у мышей моделируют воспаление брюшины. Для этого однократно за 1-7 дней до занятия внутрибрюшинно вводят 1 мл стерильного мясопептонного бульона (асептическое воспаление). На занятии мышей забивают эфиром, вскрывают брюшную полость, из брюшной полости извлекают экссудат. Каплю экссудата помешают на предметное стекло, делают мазок, окрашивают его по Романовскому-Гимзе. Через 10 мин краску смывают, мазок высушивают и рассматривают под микроскопом с иммерсией.
В мазке определяют фазу клеточной реакции. Для этого определяют соотношение полинуклеарных элементов (нейтрофилы и эозинофилы) и мононуклеаров (лимфоциты и моноциты). Всего подсчитывают 100 клеток. Преобладание нейтрофилов и эозинофилов свидетельствует о полинуклеарной, а преобладание моноцитов и лимфоцитов - о мононуклеарной стадии клеточной реакции при воспалении.
Результаты:
Таблица 3. Соотношение полинуклеаров и мононуклеаров в перитонеальном экссудате при воспалении брюшины.
| Обследованные животные | Дни с начала воспаления | Количество полинуклеаров | Количество мононуклеаров |
Выводы:
3. 4. Сделать лабораторную работу «Исследование поглотительной функции клеток РЭС».
Цель: изучить поглотительную способность клеток РЭС и установить преимущественную локализацию клеток РЭС в организме лягушки.
|
|
|
Принцип метода: хлористое железо в кислой среде вступает в реакцию с желтой кровяной солью с образованием берлинской лазури, которая придает органам, содержащим большое количество клеток РЭС, голубовато-зеленый или синий цвет.
Методика проведения: обездвиженную лягушку фиксируют на дощечке брюшком вверх, обнажают сердце, вскрывают перикард. Внутрисердечно шприцем вводят 1мл 1%-го р-ра хлористого железа. Через 15 мин. лягушку вскрывают, ножницами вырезают кусочки печени, селезенки, легких, кишечника с брыжейкой, кожи и мышцы. Кладут их в чашку Петри с дистиллированной водой для отмывания органов от крови. Затем стеклянными палочками их переносят в чашку с 5% раствором HCl, а потом с 3% р-ром желтой кровяной соли и, наконец, кладут на белый лист бумаги. Интенсивность окраски оценивается в крестах: 4 креста - наиболее сильная окраска, 0 - отсутствие окраски.
Примечание: а) при введении железа в сердце лягушки оно вызывает быструю остановку сердца, но на результаты опыта это не влияет, т. к. для распределения железа по всему организму достаточно нескольких сердечных сокращений. б) Во время опыта рекомендуется манипулировать стеклянными палочками, т. к. при применении пинцета в тканях может остаться железо.
Результаты:
Таблица 4. Интенсивность окрашивания органов и тканей после введения хлористого железа.
| Органы | Интенсивность окраски |
| Кожа | |
| Мышцы | |
| Селезенка | |
| Легкие | |
| Тонкий кишечник | |
| Печень |
Выводы:
3. 5. Сделать лабораторную работу «Определение фагоцитарной активности нейтрофилов ( ФАН ) в цельной крови»
Цель: изучить фагоцитарную активность нейтрофилов крови, определить % фагоцитоза, фагоцитарное число, фагоцитарный индекс, оценить их значение.
Методика: берут 0, 1 мл цельной крови. Добавляют такое же количество суспензии объектов фагоцитоза (ОФ) с концентрацией 200 тыс в 1 мкл. В качестве ОФ используют коммерческий эритроцитарный антигенный диагностикум к Шигелле Зонне (формалинизированные эритроциты барана, нагруженные белково-липополисахаридным комплексом Шигелл Зонне). Инкубируют в термостате в течение 10 минут в условиях перемешивания реагирующих компонентов. 0, 004 мл смеси переносят на обезжиренное предметное стекло, готовят мазок, высушивают, фиксируют в метаноле, окрашивают по Романовскому. В мазке учитывают 100 нейтрофилов (содержащих ОФ и без них), результаты заносят в регистрационную сетку.
|
|
|
Определяют: % фагоцитоза - количество нейтрофилов, содержащих ОФ на 100 учтенных нейтрофилов; фагоцитарное число - среднее количество ОФ, приходящееся на 1 из 100 учтенных нейтрофилов; фагоцитарный индекс - среднее количество ОФ, приходящееся на 1 нейтрофил, содержащий ОФ.
Результаты заносят в таблицу, оценивают, делают выводы.
Результаты:
Регистрационные сетки:
№1 №2
|
| ||||||||||||||||||||
Таблица 5. Оценка фагоцитарной активности нейтрофилов
| Показатели | Номер мазка | |||
| Процент фагоцитоза | ||||
| Фагоцитарное число | ||||
| Фагоцитарный индекс | ||||
Вывод:
|
|
|
