 |
3. Практическая работа.. 3.2. Сделать лабораторную работу «Определение активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ)».
|
|
|
|
3. Практическая работа.
3. 1. Сделать лабораторную работу « Определение времени рекальцификации» (по Howell).
Цель: оценить активность коагулянтов, участвующих в свёртывании крови по внутреннему пути при исключении влияния сосудистого компонента на механизм свёртывания.
Принцип метода: добавление к плазме оптимального количества кальция купирует цитрат плазмы, запускается внутренний путь свёртывания, начиная с XI активного фактора.
Методика определения: в пробирку, установленную на водяной бане при 37оС, наливают 0, 2 мл буфера Михаэлиса с 0, 025М раствором CaCl2. Через 1-2 минуты в пробирку добавляют 0, 2 мл плазмы и одновременно включают секундомер. Пробирку периодически встряхивают. Отмечают время образования нитей фибрина (сгустка). У здоровых людей время рекальцификации колеблется в пределах от 60 до 120 сек. Укорочение времени рекальцификации указывает на гиперкоагуляцию, удлинение – на гипокоагуляцию.
Результат: записывается
Вывод: результат, сравнивается с нормальными показателями и затем оценивается (указывается его значение для процесса свертывания).
3. 2. Сделать лабораторную работу «Определение активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ)».
Цель: оценить активность факторов внутреннего пути свёртывания крови и отделить дефицит плазменных факторов от неполноценности или снижения количества тромбоцитов.
Принцип метода: инкубирование плазмы с оптимальным стандартизованным соотношением фосфолипидов (вместо тромбоцитарных фосфолипидов) и эллаговой кислотой в качестве активатора (отрицательно заряженная поверхность) запускает внутренний путь свёртывания, добавление в систему кальция купирует цитрат плазмы и позволяет получить фибриновый сгусток. АЧТВ используется как базовый тест для оценки внутреннего пути коагуляции. Тест называется частичным, т. к. в нём принимает участие не полный тромбопластин, включающий тромбоцитарный фактор, а «частичный тромбопластин» - фосфолипидный экстракт.
|
|
|
Методика определения: в пробирку, нагретую до 37оС на водяной бане, добавляют 0, 1 мл исследуемой плазмы, затем 0, 1 мл приготовленного АЧТВ - реагента и одновременно с добавлением 0, 1 мл подогретого до 37оС 0, 025М раствора CaCl2 начинается измерение времени свертывания до момента образования сгустка. АЧТВ здоровых доноров составляет 25-35 сек. Коэффициент вариации результатов определения АЧТВ не более 10%.
Результат:
Вывод:
3. 3. Сделать лабораторную работу «Определение протромбинового времени (по Quick)».
Цель: оценить активность факторов внешнего пути свертывания крови.
Принцип метода: при добавлении к исследуемой цитратной плазме избытка тканевого тромбопластина и ионов кальция время образования сгустка фибрина зависит только от активности факторов внешнего и общего пути коагуляции: I, II, V, YII, X. Учитывая, что дефицит YII фактора встречается крайне редко, проба Квика используется для оценки активности коагулянтов II фазы.
Методика определения: готовят смесь из равных обьёмов буфера Михаэлиса с 0, 025М CaCl2 и эмульсии тромбопластина. Пробирку с 0, 1 мл цитратной плазмы помещают на водяную баню, и на 10 секунде добавляют 0, 2 мл раствора прогретой тромбопластин – кальциевой смеси, по секундомеру отмечают время образования сгустка, периодически встряхивая пробирку. Время от момента добавления в плазму смеси из равных обьёмов буфера Михаэлиса с 0, 025М CaCl2 и эмульсии тромбопластина, до образования сгустка фибрина соответствует протромбиновому времени в сек. Нормальное протромбиновое время (ПВ) должно быть в пределах 14 – 18 сек. (в зависимости от активности тромбопластина). Норма 11-15 сек. Удлинение протромбинового времени (при нормальном содержании фибриногена и нормальном тромбиновом времени) наблюдается при врождённой или приобретённой недостаточности одного или нескольких факторов протромбинового комплекса (VII, X, V, или II) укорочение - о повышении активности. Кроме того, протромбиновое время может удлиняться при очень низком содержании фибриногена в плазме (ниже 1 г/л) или избытке в крови антикоагулянтов: гепарина, продуктов фибринолиза.
|
|
|
Результат:
Вывод:
3. 4. Сделать лабораторную работу « Определение протромбинового индекса (ПИ), протромбинового отношения (ПО) и международного нормализованного отношения (МНО)».
Цель: выразить протромбиновое время в виде протромбинового индекса, протромбинового отношения, международного нормализованного отношения, усвоить отличие.
Протромбиновое время (ПВ) часто выражают по разному:
- в секундах по сравнению с нормой;
- как протромбиновое отношение (ПО), отношение ПВ больного к ПВ нормы;
ПО = (ПВ больного / ПВ стандартной плазмы, нормы)
- как протромбиновый индекс, отношение ПВ нормы к ПВ больного, %.
ПИ вычисляют по формуле: ПИ = (ПВ нормы / ПВ больного) * 100%,
В норме средний ПИ здорового человека 80-120%. ПИ здорового человека определяют каждый раз перед работой с тромбопластином новой серии.
Для достижения более точного контроля при лечении непрямыми антикоагулянтами и обеспечения сравнимости межлабораторных данных ВОЗ рекомендует использовать МНО (Международное Нормализованное Отношение), которое рассчитывают по формуле:
МНО = ПО * МИЧ, (норма МНО 0, 8-0, 1, 2). МИЧ – международный индекс чувствительности, соотносящий активность тканевого фактора из животных источников со стандартом такового у человека (указывает производитель реактивов), ВОЗ рекомендует работать с тромбопластинами МИЧ которых равен около1, 0. Таким образом, МНО - это протромбиновое отношение (ПО), полученное с эталоном тромбопластина, имеющего МИЧ (Международный индекс чувствительности) равный 1.
Результат:
3. 5. Сделать лабораторную работу «Определение степени тромботеста (относительный показатель количества фибриногена)».
|
|
|
Цель: оценить количество фибриногена.
Методика определения: 0, 1 мл плазмы осторожно вносят в пробирку, содержащую 5 мл 0, 05% р-ра CaCl2. После однократного помешивания стеклянной палочкой пробирку помещают на водяную баню при 37оС на 30 мин. Затем пробирку осторожно вынимают и определяют степень тромботеста. Для этого пробирку держат на свету и поворачивают. Норма 3-5 степень.
Результат:
Вывод:
3. 6. Сделать лабораторную работу « Определение тромбинового времени (по Bigss и McFarlane)».
Цель: выявить функциональную активность фибриногена и ингибиторов тромбина в плазме.
Принцип метода: заключается в том, что при добавлении тромбина необходимой активности к исследуемой цитратной плазме время образования сгустка фибрина зависит только от количества и активности фибриногена в данной плазме, от активности тромбина и от наличия его ингибиторов. Реакция проходит в одну стадию.
Методика определения: 0, 2 мл плазмы прогревают в течение 1 мин на водяной бане при 37оС, затем к ней добавляют 0, 2 мл рабочего раствора тромбина, одновременно включают секундомер и отмечают время образования сгустка при периодическом встряхивании пробирки.
Норма тромбинового времени зависит от активности рабочего раствора тромбина. При использовании тромбина с активностью 3 IU/мл составляет 14 – 20 сек (6 IU/мл -10-13 сек; 9 IU/мл -7-9 сек. ). Удлинение тромбинового времени возможно при гипофибриногенемии, афибриногенемии и дисфибриногенемии, при высокой фибринолитической активности, избытке в плазме продуктов деградации фибрина/фибриногена. Полная несвёртываемость под влиянием тромбина наблюдается при увеличении содержания гепарина и гепариноидов.
Результат
Вывод:
3. 7. Сделать лабораторную работу «Определение времени свободного гепарина (с протаминсульфатом)».
Цель: оценить содержание гепарина.
Принцип метода: заключается в том, что при добавлении к исследуемой цитратной плазме протаминсульфата, последний связывает гепарин плазмы и время образования сгустка фибрина при последующем добавлении тромбина уменьшается. При расчёте гепаринового времени из тромбинового времени вычитают время свёртывания крови при добавлении тромбина, после блокады гепарина протаминсульфатом. Антитромбиновая система плазмы способна инактивировать добавляемый к ней стандартный раствор тромбина. Тест не стандартизован.
|
|
|
Методика определения: в пробирку вносят 0, 1 мл исследуемой плазмы и 0, 05 протаминсульфата, через 30 сек добавляют 0, 1 мл р-ра тромбина, включают секундомер и определяют время появления сгустка. Повторяют определение 2 раза. Время свободного гепарина выражают в секундах. разницы между тромбиновым временем и временем появления сгустка после добавления протаминсульфата. Норма 7, 7-10, 1 сек. Удлинение времени говорит о передозировке гепарина.
Результат:
Вывод:
|
|
|
