 |
2.3.4 Стабильность. 2.3.5. Длительность иммунитета. 3. Антирабические вакцины для перорального использования. 3.1. Обоснование
|
|
|
|
2. 3. 4 Стабильность
Как описано в главе 1. 1. 8
2. 3. 5. Длительность иммунитета
В рамках процедуры авторизации от производителя требуется доказать длительность иммунитета данной вакцины как посредством контрольного заражения, так и с использованием валидированного альтернативного теста, такого как серологический тест, в конце заявленного периода защиты.
3. Антирабические вакцины для перорального использования
3. 1. Обоснование
Концепция пероральной вакцинации против бешенства развивалась в 1970х годах в результате исследований George Baer в США (Baer et al., 1991), которые продолжил Franz Steck в Швейцарии (Steck et al., 1982). Все вакцины, используемые в настоящее время для пероральной вакцинации, являются или модифицированными живыми вакцинами, или вакцинами, полученными в результате применения биотехнологий. Они сконструированы посредством введения гена гликопротеина вируса бешенства в вирусный вектор. Вирусы оспы (например, коровья оспа) и аденовирусы являются наиболее часто используемыми векторами. Иммунизация проводится посредством введения пероральной вакцины через лимфоидную ткань слизистой оболочки полости ткань или ноздри, где экспрессия вирусных белков стимулирует нервную систему. Большинство вакцинных вирусов уничтожается во внутрижелудочной среде вакцинированных животных. Доступность одичавших или диких животных для вакцинации является проблемой, а использование пероральной вакцинации является эффективным решением. При использовании пероральных вакцин огромное внимание необходимо уделять безопасности и здесь речь идет не только о целевых животных, но и окружающей среде, других видах, включая человека, которые могут контактировать с вакциной (см. главу 1. 1. 8).
|
|
|
Управление ветеринарии и общественного здравоохранения ВОЗ играл важную роль в определении требований к обеспечению безопасности и эффективности пероральных вакцин как для целевых видов, так и не целевых (особенно, людей), которые могут контактировать с летучими мышами или недавно вакцинированными животными (ВОЗ, 1989; 2005; 2007).
3. 2. Краткое описание процесса производства и минимальные требования к вакцинам
В дополнение к требованиям, изложенным в главе 1. 1. 8., необходимо соответствовать следующим особым требованиям.
3. 2. 1. Характеристика посевного вируса
Посевной вирус готовят из соответствующего имунногенного штамма высоко аттенуированного вируса бешенства или векторного вируса гликопротеина (G). Должна быть описана история вирусной расплодки, ее имунногенных характеристик, безопасность и отсутствие возврата к вирулентности, включая наличие генетических маркеров для модифицированной живой вакцины. Полная геномная последовательность посевного вируса должна быть представлена регламентирующему органу и помещена в общественную базу данных для верификации идентичности и генетической стабильности. Что касается вирусной расплодки, полученной в результате применения биотехнологии, то необходимо учитывать информацию о рекомбинации т. к. теоретически существует риск возможной генетической передачи и обмена с другими вирусами.
3. 2. 2. Способ производства
i) Процедура
Расплодку используют для инфицирования суспензии или монослоев созданной линии клеток. Должно быть доказано, что эти клеточные культуры нетуморогенны и свободны от контаминирующих микроорганизмов.
ii) Контроль на производстве
Во время процесса производства перед составлением окончательной смеси в разное время проводят тесты, которые позволяют верифицировать стабильность производства. Тесты
|
|
|
на инфекционность и стерильность являются основными в контроле процесса.
iii) Тестирование итоговой серии/партии продукта
После соединения всех ингредиентов итоговая смесь имеет определенный состав, который используется как в лиофилизованном, так и жидком виде. Последним этапом производства серии/партии является фасовка окончательной смеси в пакетики/капсулы, которые кладут в приманки или помещение ее прямо в ловушку. Данную итоговую серию/партию исследуют с использованием описанных ниже тестов:
A) Стерильность: Тестирование можно проводить до или после помещения в ловушку. Тесты биологических материалов на стерильность и отсутствие контаминирования описаны в главе 1. 1. 9.
b) Идентичность: Идентичность иммуногена исследуют с использованием рабической антисыворотки моноспецифичной для гликопротеина G для вакцины, созданной на основе биотехнологий. Что касается модифицированной живой вакцины, то целью тестирования является подтверждение наличия генетического маркера.
c) Чистота партии/серии
Для модифицированной живой вакцины 1 в 10 и 1 в 1000 разведений вакцины инокулируют в восприимчивые культуры клеток. Разведения инкубируют при температуре 37°С. Через 2, 4 и 6 дней клетки окрашивают с использованием панели моноклональных антител, которые не вступают в реакцию с вакцинным штаммом, но вступают в реакцию с другими штаммами антирабической вакцины (например, уличный вирус, штамм Пастера). Вакцина проходит тест, если нет признаков контаминации вирусом бешенства (Европейская Фармакопея, 2012b).
d) Безопасность
Если соответствующая безопасность не будет доказана и подтверждена в регистрационном досье и стабильность процесса производства не будет подтверждена в соответствии с требованиями, изложенными в главе 1. 1. 8., то тестирование безопасности партии должно проводиться следующим образом: двум здоровым собакам вводят 10 доз пероральным способом и затем их наблюдают в течение 14 дней. Кроме того, 8 мышам внутрибрюшинно или подкожно вводят 0, 5 мл дозу. Затем их наблюдают в течение 14 дней. Если у животных проявляются какие-либо побочные реакции, связанные с введением вакцины, то партия/серия считается неудовлетворительной.
|
|
|
e) Иммуногенность партии/серии
Что касается аттенуированных вакцин и вакцин, созданных в результате использования биотехнологий, титрация вируса является надежным показателем иммуногенности вакцин, как только устанавливается взаимосвязь между уровнем защиты, которым вакцина обеспечивает целевых видов, и титрами вакцины. Титрация вируса должна проводиться с использованием культур клеток. Это позволяет лабораториям работать в соответствии с положениями Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментов и других научных целей. Иммуногенность вакцин, созданных с использованием биотехнологий может быть определена посредством измерения сероконверсии у вакцинированных животных. У более 80% вакцинированных животных должен вырабатываться титр > 0, 5 МЕ/мл.
|
|
|
