1. Культивирование вирусов на лабораторных животных

1. Культивирование вирусов на лабораторных животных

1. 1. Значение лабораторных животных в вирусологических исследованиях

До начала 30-х годов животные были единственной лабораторной моделью, на которой можно было культивировать вирусы. В настоящее время в большинстве случаев они уступили место клеточным культурам и куриным эмбрионам, работать с которыми гораздо проще и которые предоставляют исследователям большие возможности.

Лабораторные животные имеют ряд недостатков, главными из них являются:

– не всегда высокая чувствительность ко многим вирусам;

– возможность латентных инфекций;

– колебания индивидуальной резистентности к искусственному заражению;

– необходимость создания особых условий для содержания;

– большие экономические затраты и др.

Однако, в ряде случаев, они играют важную роль, оставаясь незаменимыми при изучении вопросов патогенеза и патоморфологии при экспериментальных вирусных инфекциях, изучении реакции иммунитета, получении сывороток, культивировании вирусов, не вызывающих в клеточных культурах цитопатических изменений и не размножающихся в куриных эмбрионах и др.

Повышения чувствительности можно добиться путем использования в опытах линейных животных, обладающих особой чувствительностью к какому-нибудь возбудителю. Так, в вирусологии широко используется линия белых мышей Swiss, выведенная в 1930 г. Она резистентна к бактериальным возбудителям, но чувствительна ко многим вирусам (бешенства, энцефалита, гриппа и др. ). Эта линия свободна от многих латентных инфекции.

Новым направлением в культивировании вирусов на лабораторных животных является использование гнотобиотов — животных, которые не содержат жизнеспособных микроорганизмов одного или нескольких видов известных исследователю.

В настоящее время их чаще обозначают термином «СПФ-животные» (Spezifich patogen frеi — специфически апатогенные). Название в русской транскрипции — «СВИБ» — животные, свободные от возбудителей инфекционных болезней, широкого распространения не получило.

Подобный прием позволяет исключить возможность наличия у подопытных животных латентных (не известных исследователю) инфекций, которые в нормальных условиях не проявляют своего патологического действия. Однако под влиянием стресс-факторов, в частности заражения, они могут активизироваться и тем самым исказить результаты эксперимента.

Различают два вида гнотобиотов: стерильные животные и гнотофоры. Стерильные животные свободны от всех микроорганизмов, которые можно обнаружить, а гнотофоры могут являться носителями только одного или нескольких видов микроорганизмов, известных исследователю. Можно сказать, что гнотофоры — это стерильные животные, которых в процессе опыта заражают одним или несколькими возбудителями. В связи с этим различают различные категории гнотофоров: моногнотофоры (заражены только одним возбудителем), дигнотофоры (заражены двумя возбудителями) и т. д.

Стерильных животных получают путем кесарева сечения, либо удаления матки. Дальнейшее выращивание «новорожденных» проводят в изоляторах, где помещение, воздух, вода и корм должны быть стерильными, обслуживающий персонал должен соблюдать все правила предосторожности, исключающие возможность инфицирования животных. В настоящее время получены гнотобиоты мышей, крыс, морских свинок, кроликов, обезьян, собак, кур, свиней.

Жизненные процессы у них (морфология, физиология, обмен веществ, резистентность и др. ) значительно отличаются от таковых у обычных животных, так как нет наслоения действия микробного фона внешней среды, поэтому, путем сравнения можно получить сведения о степени зависимости их организма от микробного фона, изучить действие возбудителей в «чистом виде».

Методы гнотобиологии весьма сложны и не получили пока широкого распространения в ветеринарной практике. Впервые в нашей стране гнотобиоты в ветеринарии были использованы сотрудниками Всесоюзного НИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии, где был построен уникальный корпус и на отечественном оборудовании налажено получение свиней-гнотобиотов, которые нашли широкое применение при изучении патогенеза болезней, при получении особо чистых диагностических сывороток.

В последнее время экспериментальных животных стали использовать в качестве «диагностического теста», как «индикаторных» для выявления вируса в определенном окружении. Сущность метода заключается в том, что восприимчивых животных на определенное время помещают в их естественное окружение, где возможно их естественное заражение. За ними наблюдают, измеряют температуру тела, берут пробы крови, а затем переводят в лабораторные условия для проведения заключительных исследований. Можно сказать, что это биопроба, выполняемая в естественных условиях. Ее можно использовать непосредственно перед заполнением животноводческих помещений, чтобы убедиться в отсутствии вируса после ликвидации инфекции и проведения заключительной дезинфекции. В лабораторных условиях такие животные могут служить для выявления утечки вирусов.