 |
1.4. Наблюдение после заражения
|
|
|
|
1. 4. Наблюдение после заражения
Зараженных животных содержат в клетках, к которым обязательно прикрепляют этикетки с указанием номера животного, вида инфекционного начала и даты опыта.
Все изменения в поведении животного фиксируют в протоколе. Учитывают внешний вид, подвижность, прием пищи и др. В некоторых случаях следят за температурной реакцией. Следует отметить, что падеж животных в первые дни может быть связан с травмой или токсическим действием исследуемoгo материала. При наступлении агонального состояния их убивают и производят отбор материала для дальнейшего исследования.
Иногда (особенно при выделении вирусов из первичного материала) зараженные животные не заболевают. В таких случаях исходное животное чаще всего на 8-10-й день убивают, отбирают материал и заражают новое. Окончательное заключение выносят только после проведения не менее трех, так называемых, «слепых» пассажей. Срок наблюдения устанавливают в 2…3 раза превышающий максимальную длительность инкубационного периода при данной болезни.
Во всех случаях для исключения бактериальной инфекции проводят посевы на питательные среды для аэробов и анаэробов.
Трупы после вскрытия и взятия материала утилизируют сжиганием в печах или автоклавированием.
Клетки и инвентарь подвергают дезинфекции и механической очистке, подстилку, кал и остатки кормов сжигают. Клетки можно обеззараживать огнем паяльной лампы.
Вопросы для самоконтроля
1. Назовите основные направления использования лабораторных животных в вирусологии.
2. Перечислите достоинства и недостатки культивирования вирусов на лабораторных животных.
3. Дайте определения понятиям «СПФ-животные», «стерильные животные» и «гнотофоры».
|
|
|
4. Подготовка животных к заражению.
5. Дайте характеристику основным способам экспериментального заражении лабораторных животных.
6. Индикация вирусов на лабораторных животных.
7. Понятие «слепой» пассаж.
2. Культивирование вирусов в куриных эмбрионах
2. 1. Значение куриных эмбрионов в вирусологических исследованиях
До пятидесятых годов прошлого столетия, до внедрения в практику тканевых (клеточных) культур, оказавших существенное влияние на развитие вирусологии, для культивирования многих вирусов обычно использовали куриные эмбрионы (в редких случаях — лабораторные и естественно восприимчивые животные). Метод был предложен Вудрофом и Гудпасчером в тридцатых годах. Развивающийся куриный эмбрион оказался простой и довольно, удобной системой для культивирования различных групп вирусов. Этот метод показал ряд преимуществ перед культивированием вирусов на лабораторных животных (возможность получения вируса в большем количестве, более высококачественного, меньшая опасность контаминации, доступность и экономичность, и др. ).
В настоящее время куриные эмбрионы редко используютдля выделения вирусов, однако они находят применение: для идентификации вирусов (в реакции нейтрализации), для титрации (определении наименьшей инфицирующей дозы вируса), в биологической промышленности (для изготовления вакцин, диагностикумов) и др. Достоинством этого метода является также то, что при заражении в организме куриного эмбриона не вырабатываются антитела. Однако, следует отметить, что методу присущи и некоторые недостатки. Основным из них является тот факт, что куриные эмбрионы не всегда свободны от других вирусов и патогенных агентов (вирусы, вызывающие латентные инфекции у кур — гриппа, лейкоза, инфекционного бронхита, ларинготрахеита, ньюкаслской болезни, микоплазмы и др. ). Это может привести к ошибочным выводам при оценке получаемых результатов. Поэтому необходимо предъявлять особые требования к подбору хозяйств-поставщиков яиц для инкубации. В последнее время большинство работ (особенно связанных с производством вирусвакцин для иммунизации кур) проводят с использованием СПФ-эмбрионов (см. СПФ-животные)
|
|
|
2. 2. Строение куриного эмбриона
Вирусы способны размножаться во многих тканях эмбриона, в том числе в клетках хорионаллантоисной, амниотической и желточной оболочек. Строение эмбриона показано нарисунке 1. Скорлупа яйца выстлана подскорлупной оболочкой, которая образует воздушный мешок (пугу) на тупом конце яйца. Под ней расположена богатая кровеносными сосудами хорионаллантоисная оболочка, которая выполняет функции органов дыхания. Эмбрион находится в амниотической полости (амнионе), окруженной амниотической оболочкой. Оболочка выстлана внутри эктодермальным эпителием, а снаружи покрыта клетками мезодермы. Амниотическая полость наполнена околоплодной жидкостью, которая в первые дни развития зародыша представляет собой физиологический раствор солей, позднее (на 10…12-й день) — обогащается белком. К 10…11-му дню развития куриного эмбриона количество амниотической жидкости в среднем достигает 1 см3. В ранней стадии развития эмбриона из его задней кишки выделяется вырост — аллантоис. Это полостной орган — мешок, возникающий из кишечной энтодермы с мезодермальным наружным слоем. По мере развития эмбрионов аллантоис продвигается между амнионом и хорионом. Вначале он располагается ближе к тупому концу яйца, а затем покрывает зародыш и желточный мешок, который связан с эмбрионом. К 10…11-му дню инкубации аллантоис замыкается в остром конце яйца. Аллантоисная оболочка срастается мезодермальной поверхностью (внутренней стенкой) с мезодермой амниона и желточного мешка, а с другой стороны она срастается с мезодермой хориона, образуя хорионаллантоисную оболочку. Аллантоисная полость является резервуаром, где скапливаются продукты обмена. В первые дни жизни эмбриона она наполнена прозрачной жидкостью, содержащей минеральные соли, а в дальнейшем обогащается мочекислыми солями, фосфорными и азотистыми соединениями. Процесс роста и развития зародыша сопровождается изменением рН аллантоисной жидкости. У 7…10-дневного эмбриона рН имеет слабощелочную реакцию, а в последующие дни снижается до 6, 4…6, 0 и более. Максимальное количество аллантоисной жидкости скапливается на 11…13-й день развития эмбриона, достигая в среднем 6…7 см3.
|
|
|
Рис. 1. Схематическое изображение 12-дневного эмбриона:
1 — воздушное пространство (пуга), 2 — хорионаллантоисная оболочка, 3 — аллантоисная полость 4 — зародыш, 5 — амниотическая полость, 6 — желточный мешок, 7 — внезародышевая полость, 8 — скорлупа,
9 — подскорлупная оболочка, 10 — белочный мешок
(по Шубладзе, Гайдамович).
|
|
|
