1.2. Выбор животных и подготовка к заражению

1. 2. Выбор животных и подготовка к заражению

В настоящее время наиболее часто в качестве подопытных животных используют белых мышей, крыс, морских свинок, кроликов, реже —кур, голубей, хомяков, хорьков и в ряде случаев — телят, поросят, овец, собак и др.

Их выбор зависит от вида вируса, который предполагают выделить. Отбирают здоровых, нужной массы, достаточной упитанности. Перед заражением их выдерживают 2…3 недели в карантине, во время которого измеряют температуру, проводят клиническое наблюдение, бактериологическое, серологическое, гематологическое и другие исследования для исключения болезней различной этиологии (инфекционной и др. )

Перед опытом их метят, определяют массу тела и, если нужно, возраст, пол.

Клеймение кроликов и морских свинок производят при помощи готовых металлических бирок с номерами (их можно также приготовить своими силами). Мышей и крыс метят окрашиванием различных частей тела насыщенным раствором пикриновой кислоты (сохраняется долго) или 0, 5 % спиртовыми растворами анилиновых красок.

У птиц металлические номера (браслеты) надевают на одну из ножек.

При заражении применяют различные, в зависимости от вида животных и методов введения материала, способы фиксации. Во всех случаях их фиксируют так, чтобы животные не могли вызвать травму (повреждение) экспериментатору. Этого достигают при помощи специальных приспособлений (станков, ящиков и др. ), или же животных держит помощник. Можно иметь в лаборатории доску, в которую ввинчены кольца или крючки или просто вбиты гвозди в местах фиксации лапок кролика или морской свинки.

Кролика берут за уши, свинку за спину, мышей и крыс — за конец хвоста.

Кроликов и морскую свинку можно запеленать в полотенце или тряпку, оставив свободное место для укола. Кролика помощник может взять правой рукой и заложить его задние лапки себе подмышку левой руки или положить на стол на спину, удерживая и прижимая грудь животного локтем. Можно фиксировать кролика и таким способом: сидя на стуле, взять его задние лапки, поднять, а голову и передние лапы зажать между ногами. Морскую свинку помощник держит одной рукой за грудь, а другой за задние лапы. Мышей и белых крыс для фиксации берут за хвост, дают им возможность двигаться по плоскости, а затем захватывают двумя пальцами левой руки кожу на затылке и слегка растягивают животное. При работе с мышами можно обойтись без помощника. Мышь захватывают указательным и большим пальцами левой руки складку на шее ближе к ушам, а затем поворачивают левую руку ладонью вверх и, вытянув мышь за хвост, остальными пальцами и мякотью ладони удерживают хвост и заднюю левую лапу. При этом правая рука экспериментатора освобождается. Крыс захватывают двумя корнцангами: одним — у основания хвоста, другим — за нижнюю складку затылка и растягивают по сторонам.

1. 3. Заражение

Все необходимые для заражения животных инструменты стерилизуют кипячением. Перед использованием шприцы должны быть проверены водой на их пригодность для работы; при плохой притертости в месте соединения иглы со шприцем, а также его поршне уже при слабом давлении вода будет просачиваться наружу.

Место введения тщательно обрабатывают: шерсть выстригают, кожу протирают спиртом и смазывают спиртовым раствором йода.

Известно, что вирусы обладают тропизмом к определенным тканям. Это свойство чаще всего и определяет метод заражения. Так, для выделения (культивирования) нейротропных вирусов заражение производят в мозг, респираторных — интраназально и т. д.

Заражение животных вируссодержащим материалом проводят как обычными в микробиологической практике способами, так и оригинальными, которые преимущественно применяют в вирусологии.

Общепринятые методы заражения — подкожный, внутрикожный, внутримышечный, внутрибрюшинный, интраназальный, через пищеварительный тракт и др.; оригинальные — заражение в головной и спинной мозг, в периферические нервные стволы, в глаз (в переднюю камеру, на роговицу и т. д. ), в кончик носа (в верхнюю губу) и др.

Заражение в головной и спинной мозг. Впервые методика была предложена Пастером (при изучении бешенства) и применена Ру в 1881 г. В настоящее время чаще всего материал вводят в толщу мозга или под твердую мозговую оболочку. У крупных животных делают предварительно трепанизацию черепа (вместо трепана можно использовать бормашину). У собак прокол делают на поперечной линии, идущей параллельно сагиттальному шву, несколько сзади от левой орбиты, глубина прокола — 1, 5…2 см. У кроликов прокол проводят на 2 см сзади от поперечной линии, мысленно проведенной между зрачками. Мышам и крысам иглу вводят выше и левее точки пересечения линий: средней сагиттальной и линии, соединяющей верхние углы орбиты глаз. Доза для мышей и крыс — 0, 02…0, 03 см³, для кроликов — 0, 3…0, 5 см³, крупных животных — 0, 5…0, 8 см³.

Заражение в переднюю камеру глаза. При этом методе, а также при других способах — на роговицу, в роговицу, инфекционный материал вводят только в один глаз.

Материал инъецируют тонкой иглой после предварительного обезболивания глаза и после того как стечет несколько капель жидкости из передней камеры глаза. Доза — 0, 05…0, 1 см³.