 |
Работа № 10. Определение сахаров методом ТСХ
|
|
|
|
Контрольные вопросы
1. В каких пищевых продуктах содержатся углеводы?
2. Как действует амилаза на полисахариды?
3. Приведите примеры восстанавливающих и невосстанавливающих сахаров.
3. Изобразите схему превращений различных форм глюкозы в водном растворе.
4. Что такое гликаны? Приведите примеры.
Работа № 10. Определение сахаров методом ТСХ
Разделение углеводов методом тонкослойной хроматографии может быть осуществлено на таких сорбентах, как силикагель, оксид алюминия, целлюлоза.
Реактивы: Оборудование:
глюкоза, 1 М р-р, пластинки силуфола,
фруктоза, 1 М р-р, хроматографическая камера,
сахароза, 1 М р-р, капилляры стеклянные,
проявитель: бутанол-уксусная пульвелизатор,
кислота-вода (4: 1: 1),
анилинфталатный реактив
Ход работы
Берут пластинку для хроматографии и на расстоянии 1 см от узкого края пластинки намечают четыре едва заметные точки старта иглой или карандашом, после чего наносят в них с помощью капилляров растворы сахаров в пределах от 50 до 250 мкг в каждом пятне. В одну точку наносят раствор глюкозы, в другую – фруктозы, в третью – сахарозы, а в четвертую – смесь указанных сахаров.
Пластинку с нанесенными растворами сахаров помещают в хроматографическую камеру, погружая ее стартовым краем в проявитель на 0, 5 см. Через 60-90 минут хроматограмму вынимают, отмечают границу фронта проявителя, подсушивают и опрыскивают анилинфталатным реактивом, после чего выдерживают сначала на воздухе, а затем прогревают в сушильном шкафу при 1300С в течение 7-10 минут. Позиции углеводов на хроматограмме выявляются в виде коричневых пятен на светлом фоне. Определяют значения Rf для индивидуальных сахаров и идентифицируют их в смеси. (Rf – коэффициент подвижности по фронту проявителя)
|
|
|
расстояние от старта до середины пятна
Rf = ----------------------------------------------------------------
расстояние от старта до фронта проявителя.
Контрольные вопросы
1. В каких пищевых продуктах содержатся углеводы?
2. Где в пищеварительном тракте человека содержится амилаза?
3. Как действует амилаза на полисахариды?
4. Гидролизует ли амилаза дисахариды?
5. Сколько сахара содержится в крови человека?
6. Сколько гликогена содержится в печени?
7. Охарактеризуйте строение гликогена.
8. Перечислите биологические функции углеводов в организме.
Тема ЛИПИДЫ
Работа № 11. Определение констант жиров
Сравнение степени насыщенности жиров
Реактивы: Оборудование:
свиное сало – 0, 5 г, пробирки – 4 шт.,
коровье масло – 0, 5 г, пипетки с делениями на 5 мл,
растительное масло – 0, 5 г, бюретка с воронкой и склянкой
маргарин – 0, 5 г, (для титрования)
хлороформ,
0, 001 Н р-р йода в хлороформе.
Ход работы
|
|
|
Отвешивают в пробирки по 0, 5 г различных жиров. Растворяют каждый жир в 3 мл хлороформа и титруют из микробюретки 0, 001 Н раствором йода в хлороформе до отчетливой розовой окраски. Записывают объем раствора йода, пошедшего на насыщение каждого вида жира. Располагают исследованные жиры по убывающей степени насыщенности.
Определение йодного числа
Реактивы: Оборудование:
спирт этиловый, колбы конические с обратными
0, 2 Н спиртовой р-р йода, холодильниками – 4 шт.,
растительное масло, бюретка с воронкой и склянкой
тиосульфат натрия, 0, 1 Н р-р, (для титрования) – 2 шт.,
крахмал, 0, 5%-ный р-р, пенициллинка с пипеткой в пробке,
пипетка мерная (25 мл),
водяные бани, плитки (для колб),
пипетки (1 и 50 мл).
Ход работы
В сухую коническую колбу емкостью 250 мл с пришлифованной стеклянной пробкой (холодильником) помещают исследуемое масло. Навеску масла берут на аналитических весах следующим образом: взвешивают склянку (из-под пенициллина) с маслом и пипеткой в пробке, отмеривают из нее пипеткой в колбу 3-4 капли масла и снова взвешивают склянку. По разности масс определяют величину навески масла. В колбу добавляют 25 мл спирта для растворения навески. Если масло плохо растворяется, можно подогреть колбу на водяной бане. Во второй колбе ставят " слепой опыт" (контроль), т. е. берут в нее 25 мл спирта. В каждую колбу (опыт и контроль) прибавляют по 12, 5 мл 0, 2 Н спиртового раствора йода (из бюретки), смешивают, приливают по 100 мл дистиллированной воды и хорошо встряхивают продукты, закрыв пробкой. Через 5 мин содержимое колб оттитровывают 0, 1 Н раствором тиосульфата натрия сначала до появления слабо-желтого окрашивания, а потом, прибавив 1 мл раствора крахмала, титруют до исчезновения синего окрашивания.
|
|
|
Разность между количеством 0, 1 Н раствора тиосульфата натрия, затраченного на титрование опыта и контроля, является показателем количества йода, связанного навеской масла. Йодное число (в г) вычисляют по формуле:
,
где V1 - количество 0, 1 Н раствора тиосульфата, пошедшее на титрование контроля (мл); V2 - количество 0, 1 Н раствора тиосульфата, пошедшее на титрование в опыте (мл); 0, 0127 - титр тиосульфата по йоду; а- навеска жира (г).
Расхождения в параллельных опытах допускаются в десятых долях получаемых йодных чисел.
|
|
|
