 |
Работа № 12. Выделение лецитина из вареного яйца.
|
|
|
|
Работа № 12. Выделение лецитина из вареного яйца.
Реактивы: Оборудование:
яичный желток (вареный), колба коническая,
эфир диэтиловый, ступка диаметром 140 мм с пестиком
спирт этиловый, цилиндр мерный (50 мл),
ацетон, водяная баня, микроскоп,
стекла предметные и покровные,
воронка стеклянная,
чашки для выпаривания – 2 шт.,
стакан лабораторный с носиком (100 мл)
палочки стеклянные, бумага
фильтровальная.
Биосинтез лецитина протекает, в основном, в печени. Лецитин образуется в результате реакции между α -, β -глицеридом и цитидилдифосфохолином (ЦДФ-холином).
Ход работы
Желток вареного яйца тщательно растирают в ступке с 40 мл эфира (все горелки должны быть погашены). Затем эфир сливают на воронку со складчатым фильтром. Остаток в ступке дважды промывают порциями эфира по 5 мл, сливая их на фильтр. Фильтрат переливают из колбы в чашку и выпаривают досуха под тягой на водяной бане. В сухом остатке содержится смесь жиров и липоидов. Его дважды (порциями по 8 мл) тщательно обрабатывают кипящим этанолом. Спиртовые вытяжки после охлаждения фильтруют через сухой фильтр в выпаривательную чашку. Фильтрат должен быть прозрачным. 2 мл фильтрата переносят в пробирку, а из остального спирт выпаривают на водяной бане. Остаток представляет собой неочищенный лецитин. Обработка спиртом производится для отделения лецитина от жира, лецитин растворим в спирте, а жир в холодном спирте заметно не растворяется. Лецитин снова растворяют в 10 мл эфира и полученный раствор при помешивании приливают к 30 мл сухого ацетона. Лецитин выпадает в осадок и собирается на дне стакана. Жидкость из стакана осторожно сливают, 2-3 капли взвеси осадка лецитина переносят на предметное стекло, дают ацетону испариться, наносят в то же место еще 2-3 капли и после испарения добавляют каплю воды. Положив покровное стекло, наблюдают под микроскопом образование миелиновых фигур в виде длинных закрученных нитей с утолщением на концах.
|
|
|
К 2 мл спиртового раствора лецитина добавляют по каплям воду и смесь сильно взбалтывают. Наблюдают образование устойчивой эмульсии лецитина.
Контрольные вопросы
1. К какому классу соединений относится лецитин?
2. Какова роль фосфолипидов в организме?
3. Какие ферменты участвуют в переваривании липидов?
4. Охарактеризуйте классификацию фосфолипидов.
Тема ГОРМОНЫ
Работа № 13. Качественные реакции на гормоны
Реактивы: Оборудование:
р-р инсулина, штатив лабораторный,
0, 1%-ный р-р едкого натра, пробирки стеклянные, химические,
0, 5%-ный р-р уксусной кислоты, водяная баня,
спиртовой р-р фолликулина,
|
|
|
1%-ный р-р сульфаниловой кислоты,
3%-ный р-р хлорного железа,
10%-ный р-р карбоната натрия,
р-р адреналина,
0, 05%-ный р-р пирокатехина,
10%-ный р-р гидроксида аммония,
10%-ный р-р уксусной кислоты,
1%-ный р-р йодата калия,
диазореактив,
серная кислота концентрированная,
30%-ный р-р едкого натра,
5%-ный р-р нитрита натрия,
2%-ный спиртовой р-р м-динитробензола,
нингидрин.
13. 1 Гормоны пептидной природы Качественные реакции на инсулин
1) реакция с разбавленным раствором едкого натра
К 10-15 каплям раствора инсулина добавляют по каплям 0, 1%-ный раствор едкого натра до выпадения хлопьевидного осадка, который растворяется при подкислении 0, 5%-ным раствором уксусной кислоты до рН 2, 5-3, 5.
2) реакции, свидетельствующие о белковой природе инсулина
С раствором инсулина проделывают реакции, доказывающие его белковую природу: нингидриновую и биуретовую.
Приведите уравнения реакций.
13. 2 Стероидные гормоны
Качественные реакции на фолликулин (эстрон)
1) диазореакция
К 3 мл спиртового раствора фолликулина добавляют 2 мл 10%-ного раствора карбоната натрия и 2-3 мл диазореактива. Постепенно возникает бледно-желтое окрашивание.
2) реакция с концентрированной серной кислотой
В пробирку берут 1 мл спиртового раствора фолликулина и помещают ее в кипящую водяную баню на 5-10 минут для испарения спирта. К оставшемуся в пробирке гормону добавляют 1 мл концентрированной серной кислоты, и пробирку вновь помещают в кипящую водяную баню на 5-10 минут. Жидкость в пробирке окрашивается в соломенно-желтый цвет, переходящий при нагревании в оранжевый и имеющий зеленую флюоресценцию.
Приведите уравнения реакции образования сернокислого эфира фолликулина.
3) образование фенолята фолликулина
В две сухие пробирки приливают по 0, 5 мл раствора фолликулина. В первую добавляют 1 мл воды, отмечают образование эмульсии фолликулина. Во вторую добавляют такое же количество 30%-ного раствора едкого натра – помутнения не возникает, так как в щелочной среде происходит образование растворимого фенолята фолликулина.
Приведите уравнение реакции.
4) реакция на 17-кетогруппу
В сухую пробирку вносят 1 мл раствора фолликулина, 1 мл 30%-ного раствора едкого натра и 1 мл 2%-ного спиртового раствора мета-динитробензола. Спустя 5-8 минут появляется красное окрашивание.
13. 3 Гормоны иной природы
|
|
|
