 |
Работа № 7. Получение препарата амилаз из плесневых грибов
|
|
|
|
Контрольные вопросы
1. Что такое ферменты?
2. Каково строение ферментов?
3. Перечислите особенности действия ферментов по сравнению с неорганическими катализаторами.
4. Перечислите общие свойства ферментов.
5. Какие факторы оказывают влияние на активность ферментов?
6. Приведите реакцию Троммера. Для чего она используется?
7. Какие промежуточные продукты образуются при гидролизе крахмала в присутствии минеральных кислот?
8. Назовите активаторы и ингибиторы, влияющие на активность фермента амилазы слюны..
9. Что такое простетические группы?
10. Назовите известные Вам коферменты и простетические группы.
11. Что такое кофермент ацетилирования (КоА), приведите его строение. Какова его роль в организме?
12. На чем основана классификация ферментов?
Работа № 7. Получение препарата амилаз из плесневых грибов
(по Фениксовой)
Реактивы: Оборудование:
сахароза – 3 г, колба мерная (100 мл),
нитрат натрия – 0, 2 г, стакан (150 мл),
дигидрофосфат калия – 0, 1 г, стакан (250 мл, термостат)
сульфат магния – 0, 05 г, стакан (50 – 75 мл),
хлорид калия – 0, 05 г, стакан для фильтрования,
сульфат железа (II) – 0, 001 г, термометр (25-280С),
вода дистиллированная, фарфоровая ступка,
песок, колба с пробкой,
|
|
|
крахмал. 1%-ный р-р, пробирка с делениями (5 мл),
р-р йода (0, 3 %) в KI (3 %) мерный цилиндр (10 мл),
часовое стекло
Ход работы:
Культивирование плесневых грибов
Плесневые грибы развиваются на синтетических питательных средах с небольшим числом компонентов. Состав одной из них (среда Чапека) таков: сахароза – 3 г, нитрат натрия – 0, 2 г, дигидрофосфат калия – 0, 1 г, сульфат магния – 0, 05 г, хлорид калия – 0, 05 г, сульфат железа – 0, 001 г, вода – до 100 мл (рН 7).
Для получения грибной массы вносят кусочек плесени непосредственно с заплесневевшего предмета (или пользуются чистой культурой гриба Aspergillus niger) в питательную среду Чапека. Колбу помещают в термостат при температуре 25-280С. через 5-6 дней на поверхности жидкости вырастает мощная пленка гриба, вполне пригодная для выделения амилазы.
Получение препарата грибных амилаз
Грибную массу отделяют от среды фильтрованием, распределяют ее небольшими кусочками на поверхности стекла и сушат при температуре 370С. Воздушно-сухую массу затем тщательно растирают в фарфоровой ступке с трехкратным количеством кварцевого песка. Полученный тонкий однородный порошок используют для проведения опытов с амилазой.
Обнаружение действия грибных амилаз
2 г полученного препарата плесневых грибов смешивают с 50 мл воды, нагретой до 370С, энергично встряхивают в течение 5 мин., а затем настаивают 2 ч при той же температуре. После повторного встряхивания твердый остаток отфильтровывают. В фильтрате содержится комплекс грибных амилаз. В пробирку наливают 5 мл полученного фильтрата, прибавляют 10 мл 1%-ного раствора крахмала, быстро перемешивают и тот час же одну каплю содержимого пробирки, извлеченную стеклянной палочкой, смешивают на фарфоровой пластине с 1-2 каплями раствора йода в йодиде калия. Проба окрашивается в синий цвет. Пробирку помещают в водяную баню, нагретую до 400С. через каждые 2 мин. Повторяют взятие проб. По мере расщепления крахмала пробы с йодом будут окрашиваться в различные цвета – синий, фиолетовый, красный и, наконец, желтый, вследствие образования декстринов различной степени сложности.
|
|
|
Ферменты амилазного комплекса ускоряют гидролиз крахмала с образованием разнообразных промежуточных и конечных продуктов. В препарате грибных амилаз содержится, в основном, α -амилаза. О степени гидролиза ею крахмала можно судить по изменению окраски крахмала и декстринов с йодом. Амилоза, присутствующая в крахмале, дает синее окрашивание с йодом; амилодекстрины (молекулярная масса 10000) – сине-фиолетовое; эритродекстрины (относительная молекулярная масса от 4000 до 6000) – красно-бурое; ахродекстрины (относительная молекулярная масса около 3700) – почти никакого окрашивания и, наконец, мальтодекстрины (относительная молекулярная масса около 1000) совершенно не окрашиваются йодом.
Контрольные вопросы
1. Что такое ферменты?
2. Охарактеризуйте строение ферментов.
3. Дайте определение простетической группе.
4. Назовите известные вам коферменты и простетические группы.
5. Приведите строение кофермента ацетилирования (КоА), укажите его физиологические функции.
6. На чем основана классификация ферментов?
Тема УГЛЕВОДЫ
Работа №8. Выделение растворимого пектина и его количественное определение по пектату кальция
Реактивы: Оборудование:
свежий материал, фарфоровая ступка с пестиком.
содержащий пектин, коническая колба (500 мл) с пробкой,
кварцевый песок, мерные цилиндры (50 и 100 мл),
едкий натр, 0, 1 Н р-р, пипетка (25 мл),
хлорид кальция, 2 Н р-р, стаканы химические (100 и 300 мл),
нитрат серебра, 1%-ный р-р, воронка для фильтрования,
|
|
|
уксусная кислота, 1 Н р-р, чашка Петри, бюкс,
стеклянная палочка,
термометр 0-500С,
водяная баня, плитка.
R – Н или СН3;
R' – Н, СН3СО или углеводородный радикал;
R”- Н или углеводная цепь.
Пектины - растительные полисахариды, в основе которых лежит главная цепь из 1 4 связанных остатков α -D-галактуроновой кислоты, содержащая некоторое количество остатков 2-О-замещенной L-рамно-пиранозы.
Омылением сложноэфирных групп получают пектовые кислоты, соли которых называют пектатами.
|
|
|
