Методы идентификации нуклеиновых кислот
Методы идентификации нуклеиновых кислот
Для диагностики вирусных инфекций рутинно применяют методы генной диагностики для выявления нуклеотидных последовательностей (ДНК и РНК) возбудителей.
По чувствительности ПЦР наиболее совершенен как диагностический метод (на несколько порядков выше, чем другие тесты). Специфичность метода также высока. В настоящее время ПЦР-методы широко используют в диагностике вирусных, паразитарных и бактериальных ИППП, чаще в качестве первичного скрининга, а также контроля излеченности в сочетании с другими методами лабораторной диагностики. Молекулярно-генетические методы в диагностике оппортунистических инфекций неважны, так как определяющим моментом в развитии таких воспалительных процессов служит количественный фактор, а не само по себе присутствие микроорганизма в обследуемом локусе.
Серологические методы диагностики
Роль методов, выявляющих специфические АТ и АГ, особенно значима, когда выделение возбудителя представляет значительные трудности.
При выявлении специфических АТ необходимо установить повышение их титров, в связи с чем исследуют парные сыворотки с интервалом 2-3 нед. Определение классов Ig четко характеризует этапы инфекционного процесса и в ряде случаев может служить прогностическим признаком его течения.
Большое значение имеют методы выявления АГ возбудителей. Их можно обнаружить уже на самых ранних этапах инфекционного процесса, что делает возможной экспресс-диагностику, а количественное определение АГ в динамике заболевания служит критерием эффективности проводимого лечения. Ведущее значение приобрели серологические методы в диагностике сифилиса и ВИЧ-инфекции. Положительные результаты скрининга с использованием иммуноферментного анализа требуют подтверждения методом иммуноблота, который позволяет верифицировать АТ к различным вирусным белкам. При оппортунистических бактериальных инфекциях, возбудители которых имеют много общих АГ с тканевыми АГ организма-хозяина и служат слабыми стимуляторами выработки специфических АТ, серологические методы диагностики практически не используют.
Интерпретация результатов. Оценка результатов микробиологического исследования отделяемого женских половых органов
При оценке результатов микробиологического исследования отделяемого женских половых органов необходимо учитывать совокупность признаков в каждом конкретном случае: данные микроскопии первичных мазков исследуемого материала, результаты прямого посева на плотные питательные среды (количественная оценка роста различных видов), а также клиническую симптоматику заболевания и анамнез больной. Например, при исследовании материала из закрытых полостей (пунктаты опухолевидных образований в малом тазу, околоплодные воды), а также органов, в норме стерильных (содержимое полости матки, соскоб эндометрия, кусочки органов и тканей, удаляемых при оперативном вмешательстве), рост микроорганизмов, особенно в монокультуре, свидетельствует об их этиологической роли. При исследовании материала из локусов, и в норме имеющих разнообразную микрофлору, большое значение придают оценке видового состава, количественной оценке роста различных видов, выросших при первичном посеве, однотипности результатов при повторных исследованиях, а также клиническим данным.
На основании интегральной оценки результатов микроскопии и культурального исследования отделяемого влагалища могут быть предложены следующие микробиологические критерии оценки состояния микроценоза влагалища по отдельным нозологическим формам у женщин репродуктивного возраста: в таблице представлены данные, полученные при микроскопии мазков, окрашенных по Граму, и данные культурального метода микробиологического исследования при бактериальном вагинозе, вагинальном кандидозе (в зависимости от концентрации грибов в отделяемом влагалища и сопутствующей микрофлоры можно выделить 3 формы кандидозной инфекции влагалища), неспецифическом вагините, промежуточном варианте микроценоза, цитолитическом вагинозе, вагинальной эпителиальной атрофии.
Данные микроскопии мазка и культурального метода
| Нозология
| Данные при микроскопии мазка
| Данные культурального метода
|
| Нормоценоз
| - Вагинальный эпителий представлен клетками поверхностных слоев, реже встречают клетки промежуточного слоя (соотношение может меняться.
| - Общая микробная обсемененность - 6-8 lg КОЕ/мл.
- Абсолютное преобладание лактобацилл.
|
| | - В зависимости от фазы менструального цикла у беременных много промежуточных клеток), " ключевые" клетки отсутствуют, иногда встречают " ложноключевые" клетки.
- Лейкоцитарная реакция отсутствует или слабо выражена - единичные лейкоциты в поле зрения.
- Общее количество микроорганизмов умеренное или большое.
- Доминирующий морфотип - лактобациллы, другие морфотипы либо отсутствуют, либо их количество исчисляется единичными микробными клетками в редких полях зрения
| - УПМ в низком титре (менее 3 lg КОЕ/мл) или отсутствуют
|
| Бактериальный вагиноз
| - Вагинальный эпителий представлен клетками поверхностных слоев, редко встречают промежуточные клетки, часто - " ключевые" клетки.
- Лейкоцитарная реакция, как правило, отсутствует.
- Общее количество микроорганизмов массивное, реже - большое.
- Преобладают морфотипы строгих анаэробов и гарднереллы, лактоморфотипы отсутствуют или определяются как единичные не во всех полях зрения
| - Общая микробная обсемененность превышает 9 lg КОЕ/мл.
- Полимикробный характер микрофлоры с абсолютным преобладанием облигатно-анаэробных видов и гарднерелл.
- При использовании только аэробных условий культивирования рост микроорганизмов отсутствует или наблюдают рост УПМ, чаще в небольшом титре.
- Отсутствует рост лактобацилл или их титр резко снижен (менее 5 lg КОЕ/мл)
|
| Вагинальный кандидоз
|
| Кандидозный вагинит
| - Вагинальный эпителий преимущественно поверхностных слоев, но может быть много промежуточных и даже парабазальных клеток (пропорционально степени тяжести клинического течения заболевания).
- Лейкоцитарная реакция от умеренной (10-15 лейкоцитов в поле зрения) до резко выраженной (30-50 и более лейкоцитов в поле зрения).
- Общее количество микроорганизмов умеренное или большое.
- Доминируют морфотипы лактобацилл, присутствуют дрожжевые клетки, фрагменты псевдомицелия с бластоспорами
| - Общее количество микроорганизмов не превышает 8 lg КОЕ/мл.
- Дрожжевые грибы присутствуют в титре более 4 lg КОЕ/мл.
- Лактобациллы высевают в титре более 6 lg КОЕ/мл
|
| Сочетание бактериального вагиноза
| - Вагинальный эпителий преимущественно поверхностных слоев, присутствуют " ключевые" эпителиальные клетки.
| - Общее количество микроорганизмов массивное (более 9 lg КОЕ/мл), но при культи-
|
| и кандидозного вагинита
| - Умеренная или выраженная лейкоцитарная реакция.
- Общее количество микроорганизмов массивное или большое.
- Доминируют морфотипы строгих анаэробов и гарднереллы, присутствуют дрожжевые клетки и/или фрагменты псевдомицелия гриба.
- Лактоморфотипы отсутствуют или видны единичные в поле зрения
| вировании только в аэробных условиях отмечают рост лишь дрожжеподобных грибов в умеренном или высоком титре (4-7 lg КОЕ/мл).
- Рост лактобацилл отсутствует или их титр низкий (менее 4 lg КОЕ/мл).
- Доминирующие в посеве микроорганизмы - бактероиды, превотеллы, гарднерелла, анаэробные кокки
|
| Бессимптомное носительство грибов
| - Вагинальный эпителий представлен преимущественно клетками поверхностных слоев.
- Лейкоцитарная реакция не выражена, единичные лейкоциты в поле зрения.
- Общее количество микроорганизмов умеренное или большое.
- Доминируют морфотипы лактобацилл, грибы чаще всего не выявляют или встречают в редких полях зрения единичные дрожжевые клетки
| - Общее количество микроорганизмов не превышает 8 lg КОЕ/мл.
- Доминируют лактобациллы.
- Рост дрожжевых грибов в низком титре (менее 4 lg КОЕ/мл)
|
| Неспецифический вагинит
| - Вагинальный эпителий представлен поверхностными и промежуточными клетками, при выраженном воспалительном процессе встречают парабазальные клетки.
- Выражена в разной степени лейкоцитарная реакция (более 10 лейкоцитов в поле зрения).
- Общее количество микроорганизмов умеренное.
- Лактобациллы отсутствуют или их количество резко снижено (до единичных в поле зрения).
- Преобладают морфотипы УПМ - колиформные палочки или грамположительные кокки
| - Отсутствие роста лактобацилл или их минимальное количество.
- Рост факультативно-анаэробных УПМ, чаще всего одного вида в высоком титре
|
| Промежуточный вариант микроценоза
| - Вагинальный эпителий представлен поверхностными клетками, можно встретить единичные " ключевые" клетки или наблюдать склонность к их формированию.
- Количество лейкоцитов не более 10 в поле зрения.
- Общее количество микроорганизмов умеренное или большое.
- Доминируют морфотипы строгих анаэробов и гарднереллы в сочетании с умеренно сниженным титром лактобацилл
| - Общее количество микроорганизмов 6-8 lg КОЕ/мл.
- Титр лактобацилл снижен, но может достигать умеренных величин (5-6 lg КОЕ/мл).
- Умеренный титр облигатных анаэробов и гарднереллы (5-7 lg КОЕ/мл)
|
| Цитолитический вагиноз
| - Эпителиальные клетки в подавляющем большинстве подвергнуты цитолизу.
- В мазке преобладают элементы деструкции клеток - детрит, обнаженные ядра поверхностных и промежуточных клеток.
- Лейкоциты отсутствуют или их количество не превышает 10 в поле зрения.
- Микрофлора в большом количестве, представлена морфотипами типичных лактобацилл
| - Обильный рост только лактобацилл.
- Сопутствующая микрофлора, как правило, отсутствует
|
| Вагинальная эпителиальная атрофия
| - В зависимости от степени атрофии слизистой оболочки влагалища эпителий представлен различным соотношением числа промежуточных и парабазальных клеток, по мере нарастания атрофии увеличивается число парабазальных и базальных клеток.
- Количество лейкоцитов обычно не превышает 10 в поле зрения.
- Микрофлора практически отсутствует.
- Можно встретить единичные лактоморфотипы или морфотипы УПМ в редких полях зрения
| - Низкая общая микробная обсемененность (2-4 lg КОЕ/мл).
- Низкие титры как лактобацилл, так и УПМ
|
Воспользуйтесь поиском по сайту:
