Организация самостоятельной работы на занятии.

Правила забора крови у человека: В соответствии с инструкцией МЗ РФ взятие крови проводят только в стерильных условиях, одно-разовым скарификатором с обязательной защитой рук исследователя одноразовыми резиновыми перчатками.

Оснащение: Одноразовый (стерильный) скарификатор, спирт, йод, стерильная вата, капилляр с резиновой грушей на конце, одноразовые резиновые перчатки.

Прокол кожи делают обычно в области подушечки концевой фаланги 4-го (безымянного) пальца левой (нерабочей) руки обследуемого. Предварительно палец тщательно протирают ваткой, смоченной спиртом. Слегка сжав фалангу с двух сторон, быстрым движением прокалывают кожу скарификатором в мякоти её верхней части. Первую каплю крови снимают ватным тампоном. Последующие капли обычно выступают сами или после массажа пальца с боков от основания к верхушке. В крупную каплю подносят капилляр, промытый цитратом натрия (антикоагулянтом), под углом 45º и натягивают в него кровь, меняя положение до горизонтального и ниже. Необходимо следить, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха. Если это произошло, то часть крови с пузырьками выпускают в сухую ватку и набирают дальше в капилляр непрерывный столбик крови.

РАБОТА 1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СКОРОСТИ ОСЕДАНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ (СОЭ)

Оснащение: Прибор Панченкова, часовое стекло или тигелёк, стерильный скарификатор, вата, 5-6 % раствор цитрата натрия, спирт, йод, исследуемая кровь. (Студенты работают с консервированной донорской кровью, как с неизвестной).

Методика: Химически чистый капилляр Панченкова промыть 5-6 % раствором цитрата натрия, набрать его в капилляр до отметки 75 и выдуть раствор в тигелёк. После этого набрать в капилляр кровь до отметки 0 (К) и смешать её в тигельке с раствором. В результате получим соотношение крови и раствора цитрата натрия 4: 1. Полученную смесь набрать в капилляр до отметки 0. Закрыв пальцем верхний конец капилляра, установить его строго вертикально в штативе Панченкова, упирая нижний конец в резиновую прокладку. Через час отметить скорость оседания эритроцитов по высоте отстоявшегося слоя плазмы в мм/час.

Рекомендации к оформлению протокола. После описания методики изобразить капилляр Панченкова. При обсуждении полученных результатов СОЭ объясните биофизические механизмы оседания эритроцитов, сопоставьте данные с показателями нормы. Объясните возможные причины отклонений от нормы, укажите факторы, влияющие на СОЭ.  Сделайте вывод о медицинском значении этого показателя.

РАБОТА 2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА ГЕМОГЛАБИНА В КРОВИ КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ САЛИ

Оснащение: Гемометр Сали, 0, 1 нормальный раствор соляной кислоты, дистиллированная вода, капилляр. В клинической практике чаще используют фотоэлектроколометрические методы с добавлением специальных реактивов (например, для образования цианметгемоглобина).

Методика:     Налить в градуированную пробирку гемометра 0, 1 нор-мальный раствор соляной кислоты до первой нижней метки. Набрать капиллярной пипеткой 20 куб. мм исследуемой крови и смешать её с раствором соляной кислоты в пробирке гемометра. Через 5 мин образуется солянокислый гематин тёмно-коричневого цвета. Затем полученный раствор необходимо развести дистиллированной водой, постепенно добавляя пипеткой воду и помешивая раствор стеклянной палочкой, пока его окраска не совпадёт с цветом стандартов в гемометре. (Интенсивность окраски стандарта соответствует идеальной норме – содержанию гемоглобина в крови – 166, 7 г/л). Отметьте, какому делению шкалы градуированной пробирки соответствует нижний мениск полученного раствора, что и показывает содержание гемоглобина в исследуемой крови сразу в г/л или в г%× 10, если разметка шкалы в граммах-процентах.

При оформлении протокола опишите принцип метода Сали, нарисуйте гемометр. Обсуждая результаты работы, сопоставьте полученные данные с показателями нормы. Дайте им оценку, укажите факторы, которые влияют на количество гемоглобина в крови. В выводах представьте функциональную характеристику разных видов и соединений гемоглобина, физиологическое обоснование медицинского значения показателя гемоглобина в периферической крови человека.

РАБОТА 3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСМОТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ (СТОЙКОСТИ) ЭРИТРОЦИТОВ.

• Под осмотической резистентностью эритроцитов понимают спо-собность эритроцита противостоять понижающемуся осмотическому давлению. Мерой осмотической стойкостиявляется пониженная концентрация раствора NaCl, при которой начинается осмотический гемолиз. Начало – лёгкое порозовение раствора (при 0, 5 % NaCl) – частичный гемолиз. Полный гемолиз – интенсивная краснолаковая окраска крови в 0, 4 % – 0, 32 % NaCl. Границы осмотической стойкости эритроцитов зависят прежде всего от состояния оболочки.  При различных заболеваниях крови резис-тентность эритроцитов может меняться, поэтому определение ее границ имеет диагностическое значение.

Методика: Приготовить ряд пробирок, в которые налить по 1-2 мл раствора хлорида натрия убывающей концентрации: 0, 9 %, 0, 8 %, 0, 7 %, 0, 6 %, 0, 5 %, 0, 4 %, 0, 3%, 0, 2 % и пронумеровать их на штативе. В каждую пробирку добавить по капле крови. Чтобы капли были равной величины, лучше набирать кровь микропипеткой от гемометра до имеющейся метки. Перемешать смесь в каждой пробирке и оставить в штативе на 1 час. Через час после добавления эритроцитов в раствор оценить результат.

Результаты наблюдения оформить в виде таблицы:

  При полном гемолизе раствор равномерно окрашен и совершенно прозрачен, что отмечается знаком (+). При частичном гемолизе на дне пробирки оседают наиболее устойчивые эритроциты, другая часть эритроцитов разрушается и окрашивает раствор. При взбалтывании пробирки раствор мутнеет, что отмечают знаком плюс минус (+–). При отсутствии гемолиза раствор становится бесцветным, а все эритроциты оседают на дно, что отмечают знаком минус (–). При обсуждении результатов определите верхнюю и нижнюю границы осмотической резистентности эритроцитов и сравните их с показателями нормы. Укажите факторы, влияющие на осмотическую стойкость эритроцитов и причины возможного отклонения полученного результата от нормы. В выводах объясните механизмы осмотического гемолиза, а также других видов разрушения эритроцитов, обоснуйте медицинское значение этого показателя.