Работа 2. Подсчет лейкоцитов в исследуемой крови.

Оснащение: Для подсчета эритроцитов необходимы камера Бюргера с сеткой Горяева, исследуемая кровь, 6% раствором уксусной кислоты, подкрашенной метиленовой синью, смеситель (меланжер) для лейкоцитов с грушей, микроскоп с объективом 20 и окуляром 15, ватные тампоны.

Методика: Подсчет лейкоцитов производится так же в камере Горяева, но не в малых, а в больших квадратах. Сторона такого квадрата равна 1/5 мм, а объём жидкости над каждым квадратом в камере равен 1/5 1/5 1/10=1/250мм³. Для подсчета лейкоцитов кровь разводят в 20 (10) раз 6% раствором уксусной кислоты, подкрашенной метиленовой синью. Уксусная кислота разрушает оболочки эритроцитов, благодаря чему последние не мешают подсчету лейкоцитов, а окраска ядер лейкоцитов метиленовой синью улучшает их видимость. Каплю крови натянуть в капилляр смесителя для лейкоцитов до отметки 0, 5. Затем раствор уксусной кислоты до метки 11, перемешать кровь с раствором в расширенной части смесителя и заполнить счетную камеру. Лейкоциты удобнее считать при малом увеличении микроскопа. Сосчитать число лейкоцитов в 25 больших квадратах. Учитывают лейкоциты, лежащие внутри квадрата, а также на левой и верхней его границах,  не считают те, которые лежат на правой и нижней границах. Вычислить среднее количество лейкоцитов в одном квадрате. Определить количество лейкоцитов в 1 куб. мм  неразведённой крови и в 1 литре (по СИ)

ФОРМУЛА ДЛЯ ВЫЧИСЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ЛЕЙКОЦИТОВ:

 х 10⁶ / л

где: Х - искомое число лейкоцитов в 1 мм³ крови, Л - сумма лейкоцитов в 25 больших квадратах, 20 – разведение, 250 – перевод объёма большого квадрата в 1 мм³

При оформлении протокола указать кратко методику подсчёта лейкоцитов, нарисовать смеситель, в сетке Горяева обозначить сторону большого квадрата и найденное количество лейкоцитов. Сравнить результат исследования лейкоцитов в периферической крови крови с нормой. При отклонении от нормы дать клиническую оценку полученному показателю, указать возможные причины несоответствия. Уровень лейкоцитов в крови является показателем состояния иммунной системы. В выводах охарактеризовать функции лейкоцитов.

РАБОТА 3: ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЦВЕТОВОГО ПОКАЗАТЕЛЯ (ЦП)

Методика: Цветовой показатель отражает относительное содержание гемоглобина в эритроците. Вычисляют цветовой показатель определением отношения двух частных, полученных от деления количества гемоглобина на количество эритроцитов в норме и количества гемоглобина на количество эритроцитов в исследуемой крови по формуле:

где:      

Х гем. - найденное количество гемоглобина

N гем. - нормальное количество гемоглобина

Х эр. - найденное количество эритроцитов

N эр. - нормальное количество эритроцитов

Если принять, что в норме литр крови содержит 167 г/л гемоглобина и 5000000 эритроцитов в 1 мкл крови, то ЦП рассчитывают по формуле:

 ;   ,                                     

 Цветной показатель при сокращении формулы:

Например: Х гем. - 145 г/л; Х эр. - 4500000 в 1 мкл                                   

В настоящее время значительно точнее и надежнее для оценки насыщения эритроцитов гемоглобином рассчитывать среднее содержание гемоглобина в эритроцитах (МСН ). Среднее содержание гемоглобина в эритроците ( МСН )устанавливается по формуле:

МСН = Гемоглобин (г/л): Число эритроцитов (млн. /мкл)

Результат выражают в пикограммах (пг). Норма составляет 27–31 пг, что характеризует среднее содержание гемоглобина в отдельном эритроците. Он аналогичен цветовому показателю.

Предварительно вычисляется средний объем эритроцита (MCV) путем деления гематокритной величины 1 мм3 крови на число эритроцитов. Результат выражают в куб. микронах (мкм3) или в фемтолитрах (фл). На практике средний объем эритроцита вычисляют путем умножения гематокрита (%) на 10 и деления полученного произведения на число эритроцитов в миллионах в куб. мм крови: