3.4.5. Диплоидные клетки

Клетки этого типа еще носят, название полуперевиваемых.

Как самостоятельная культуральная система диплоидные культуры (диплоидные штаммы клеток) известны с 1961 г., когда Хайфмек получил фибробластную культуру из легких ткани человека — штамм 2vi-38. Он имел период жизни 50±10 пассажей и был использован для биологических исследований и в производстве вирусвакцин во многих странах мира.

В 1961…1967 гг. этот термин ассоциировался только с фибробластоподобными культурами клеток, а в последующие годы в равной степени к эпителио-лимфоцитоподобным и др. клеткам.

По определению Международного Комитета по клеточным культурам «Культура диплоидных клеток (штамм ДК) должна обладать морфологически однородной популяцией клеток, стабилизированной в процессе культивирования in vitro, имеющая ограниченный срок жизни, характеризующаяся тремя фазами развития (стабилизации, активного роста, старения и смерти), сохраняющая в процессе пассирования кариотип, свойственный исходной ткани, свободная от контаминантов и не обладающая туморогенной активностью для трансплантации хомячкам».

В 1984 г. Комитет Ассоциации тканевых культур дал определение в следующей редакции: «Диплоид (Diploid) — клетка, в которой все хромосомы, кроме половых, представлены двумя хромосомами и структурно идентичны хромосомам того вида, от которого получена культура… и т. д. »

Известно, что все соматические клетки животных имеют диплоидный (двойной) набор хромосом, обозначаемый, как 2n, в то время как зародышевые клетки — сперматозоиды и яйцеклетки — гаплоидный (1n)».

В таблице 2 представлены данные о количестве хромосом у человека, домашних, некоторых видов диких и лабораторных животных (2n), биоматериал от которых наиболее часто используется для получения клеточных культур.

Таблица 2

Количество хромосом у человека, домашних, некоторых видов диких и лабораторных животных (2n )

Диплоидные культуры получили широкое распространение, так как они сохранили все особенности нормальных клеток (содержат диплоидный набор хромосом — 2n) и одновременно с этим превосходят из по некоторым показателям.

Основные отличия диплоидных от первичных культур клеток:

- возможность длительного культивирования in vitro (под данным разных авторов от 40 до 80 пассажей;

- однородность популяции и стабильность культурально-морфологических свойств;

- свободны от контаминации бактериями, грибами, вирусами, микоплазмами;

- высокая чувствительность к вирусам, в т. ч. к вакцинным штаммам;

- пригодность для культивирования в промышленных масштабах, в том числе возможность масштабирования при этом;

- онкогенная безопастность;

- возможность длительного хранения в жидком азоте (– 196º С).

Таким образом, диплоидные культуры клеток являются экологически чистой клеточной системой. Она обеспечивает отсутствие возможности контаминантов при многих исследованиях — вирусологических, цитологических, биохимических, токсикологических и др. Особенно это важно для медицины. Признано, что внедрение диплоидных культур человека и приматов открыло новую эру в производстве вирусных вакцин в области здравоохранения.

Диплоидные штаммы клеток получают из разных тканей: почек, легкого, сердца, селезенки, тимуса и других органов человека и разных видов животных.

Их приготовление проходит в 3 этапа: изготовление посевного пула клеток и замораживание его основной части; проведение предварительных контрольных исследований; накопление культур непосредственно для размножения вирусов.

Наиболее ценными линиями диплоидных клеток являются те, которые, отвечая всем качественным характеристикам, имеют исходный запас большого количества клеток ранних делений (пассажей). В таких случаях они способны обеспечить многолетнее производство вакцин в стандартных условиях (клетки в замороженном состоянии сохраняются годами).

В основном диплоидные клетки получают из органов, плодов человека О. Г. Анджапаридзе с сотр. (1973) получили такой вид клеток и из эмбриональных и постнатальных тканей крупного рогатого скота, овец и свиней. Штаммы из тканей почек эмбрионов коров удалось поддерживать в течение 30…32, почек телят — 30…43, из легких эмбрионов овец — 52…64, почек эмбрионов овец — 23…25, почек ягнят — 37…42 пассажей.

Более короткий период жизни был у штаммов, полученных из эмбриональных и постнатальных почек свиньи.