2. Серологические тесты

Серологические тесты на наличие ящура проводят для достижения 4 главных целей, а именно: 1) сертификация отдельных животных перед импортом и экспортом (например, в целях торговли); 2) подтверждение подозрительных в отношении ящура случаев; 3) доказательство свободы от инфекции; 4) демонстрация эффективности вакцинации. Для доказательства свободы от инфекции необходимо использовать различные подходы в зависимости от того, была ли или нет вакцинирована популяция, или, если применялась вакцинация, проводилась ли она в качестве вынужденной меры или как часть постоянной программы вакцинации. Исходя из вышеуказанных целей, целесообразно использовать различные тесты и различные интерпретации результатов теста, а при валидации выбранной процедуры необходимо учитывать цель исследования. Например, точки разделения в тестах с целью серологического надзора на уровне стада могут устанавливаться на пороговом уровне, который отличается от такового, который считается надлежащим для сертификации свободы от инфекции для отдельных животных в целях международной торговли.

Существует два вида серологических тестов на наличие ящура; тесты для обнаружения антител к структурным белкам вируса (SP) и тесты для обнаружения антител к неструктурным белкам вируса (NSPs).

SP тесты являются довольно серотип-специфическими и выявляют антитела, индуцируемые вакцинацией и инфекцией; например, это такие тесты как: реакция нейтрализации вируса (VNT) (Golding et al., 1976), твердофазный конкурентный ИФА (SPCE; Brocchi et al., 1990; Chenard et al., 2003; Mackay et al., 2001; Paiba et al., 2004) и жидкофазный блокирующий ИФА (LPBE; Hamblin et al., 1986; 1987). Эти тесты являются высоко чувствительными при условии, что вирус или антиген, используемый в тесте, имеет высокую степень соответствия со штаммом, циркулирующим в полевых условиях. Это – тесты, используемые для сертификации животных перед их перемещением, включая таковое в целях международной торговли, и подходят для подтверждения предыдущей или имеющейся инфекции у невакцинированных животных, а также для мониторинга уровня иммунитета, индуцированной вакцинацией в полевых условиях. Для проведения реакции нейтрализации вируса необходимо оборудованное помещение для клеточного культивирования, в данной реакции используется живой вирус, и для получения результатов требуется 2-3 дня. Блокирующий или конкурентный ИФА, в которых используются серотип-специфические поликлональные антитела (PAbs) или моноклональные антитела (MAbs), более быстрый и не зависит от систем культивирования тканей и использования живых вирусов. При использовании небольшого количества сывороток крови в любом из этих ИФА можно ожидать получения ложноположительных реакций с низким титром. При использовании подхода, который совмещает скрининг посредством ИФА и подтверждение положительных реакций посредством реакции нейтрализации вируса, вероятность получения ложноположительных результатов сводится к минимуму. В Референтной лаборатории в Пирбрайте имеются эталонные сыворотки для стандартизации серологических SP тестов на наличие ящура для некоторых серотипов и подтипов ящура.

Обнаружение антител к неструктурным белкам (NSP) вируса ящура может быть использовано для идентификации прошлой или текущей инфекции любым из семи серотипов вируса, независимо от того было ли животное ранее вакцинировано или нет. Поэтому, данные тесты могут быть использованы для подтверждения случаев подозрения на ящур, и для оценки превалентности инфекции или для доказательства свободы от инфекции на популяционном уровне. Данные тесты обладают преимуществом при их использовании для сертификации животных для торговли, по сравнению с SP методами поскольку необязательно знать серотип вируса. Однако существуют экспериментальные данные, что некоторых особей КРС, вакцинированных или впоследствии контрольно зараженных живым вирусом, и у которых было подтверждено наличие персистентной инфекции, можно и не выявить при исследовании с помощью некоторых тестов на наличие антител к неструктурным белкам, что приводит к получению ложноотрицательных результатов (Brocchi et al., 2006). Подобные анализы позволяют определить количество антител к неструктурным белкам, используя антигены, получаемые с помощью рекомбинантных методов в разнообразных системах экспрессии in-vitro. Антитела к полипротеинам 3АВ или 3АВС обычно считаются наиболее достоверным индикатором инфекции (Mackay et al., 1997). Наличие у серопозитивных по антителам к 3АВ или 3АВС животных антител к одному или нескольким другим неструктурным белкам может помочь при проведении итоговой интерпретации результатов теста (Bergman et al., 2000; Mackay et al., 1997). Однако недостаточная чистота вакцины может оказывать негативное влияние на диагностическую специфичность, поскольку наличие неструктурных белков в некоторых вакцинных

препаратах может привести к неправильной классификации животных, которые были вакцинированы повторно. Методы по определению чистоты вакцины описаны в разделе D этой главы.

В Референтных лабораториях МЭБ в Бразилии и Соединенном Королевстве были созданы международные стандартные сыворотки крови для тестирования КРС, их можно получить в данных лабораториях (Campos et al., 2008). В будущем, также будут созданы стандартные сыворотки крови для овец и свиней. Для сравнительного анализа чувствительности NSP тестов были созданы наборы сывороток крови КРС (Parida et al., 2007).