2. Метод производства

Рекомендуемый метод размножения вируса для производства антигена представляет собой выращивание вируса ящура в масштабированных суспензионных культурах или монослоях, используя клеточные линии, в стерильных условиях.

Для производства вакцины можно использовать эпителий языка КРС в условиях выживания в среде, содержащей соли, но не содержащей продукты биологического происхождения, но только, если метод производства полностью соответствует стандартным требованиям, изложенным в Главе 1. 1. 8. Кроме того, для устранения риска контаминации вирусов с липидной оболочкой перед инактивацией с использованием бинарного этиленимина/этиленимина (BEI/EI) собранная вирусная суспензия должна быть подвергнута валидированной обработке органическим растворителем. В целях обеспечения однородности и безопасности конечного продукта следует проводить адекватные тесты в процессе производства и на конечном продукте. Следует уделять внимание минимизации риска передачи возбудителей трансмиссивных губкообразных энцефалопатий (например, ГЭ КРС, ТГЭ) посредством гарантирования использования безопасного источника эпителия.

Подходящий штамм вируса используется для инфицирования суспензии или монослоев стабильной клеточной линии, такой как ВНК-21. Следует доказать, что такие клеточные культуры свободны от контаминирующих микроорганизмов.

Когда считается, что вирус достиг максимального роста, культуру осветляют, часто посредством центрифугирования и/или фильтрации. Вирус впоследствии инактивируют, добавляя инактивант первого порядка, обычно этиленимин (EI) в форме бинарного этиленимина (BEI) (Bahnemann, 1990). Важно полностью соблюдать необходимые меры безопасности при работе с BEI/EI. В суспензию вируса добавляют BEI, получая заранее установленную конечную концентрацию. Процедура инактивации должна быть надлежащим образом валидирована и задокументирована в целях демонстрации кинетики инактивации и результатов для контролей инактивации. Время обработки с помощью BEI и температура, используемые для инактивации, должны быть валидированы для фактических используемых условий и оборудования. Чтобы снизить вероятность того, что живой вирус не вступит в контакт с инактивантом, например, EI/BEI, необходимо немедленно переместить содержимое сосуда во второй стерилизованный сосуд, оставив в нем для завершения процесса инактивации согласно валидированной кинетике инактивации и с учетом возможных нормативных требований к дополнительному периоду ожидания.

В ходе инактивации, титр вируса контролируется чувствительным и воспроизводимым методом. После завершения инактивации любые остатки EI/BEI в собранном вирусе необходимо нейтрализовать, например, посредством добавления раствора натрия тиосульфата до получения конечной концентрации 2%.

Инактивированный вирус может быть концентрирован с помощью ультрафильтрации. Концентрированный инактивированный вирус в дальнейшем может быть очищен с помощью такого метода, как хроматография. Эти концентрированные и очищенные антигены могут быть использованы для составления вакцин; или храниться при низких температурах в течение многих лет, и, при необходимости, из них можно изготовить вакцину, путем разведения в соответствующем буфере и добавления адъювантов (Doel & Pullen, 1990).

Традиционные вакцины против ящура обычно создают на основе масляного адъюванта или воды. Вакцины с масляным адъювантом обычно составляют как эмульсию вода в масле, используя такие минеральные масла. Минеральное масло обычно предварительно перемешивают с эмульгирующим веществом перед добавлением части, или всей водной фазы вакцины, и эмульгируют, используя коллоидную мельницу или с помощью непрерывного механического или поточного ультразвукового эмульгатора. Более сложные двойные эмульсии (вода/масло/вода) могут быть изготовлены с помощью повторного эмульгирования в водной фазе, содержащей небольшое количество детергента, такого как Твин 80. В настоящее время в продаже имеются готовые к использованию масляные адъюванты для различных типов эмульсии.

Водная вакцина может быть изготовлена с помощью адсорбции вируса на геле гидроокиси алюминия, одного из компонентов конечной смеси вакцины. Конечная смесь вакцины может содержать другие компоненты, такие как противовспениватель, гидролизат лактальбульмина, триптозо-фосфатный бульон, аминокислоты, витамины, буферные соли и другие вещества. Могут быть также включены такие адъюванты, как сапонин, а также консерванты.

При использовании новых компонентов, включая адъюванты или консерванты, в любой вакцине важно учитывать, что необходимо оценить их статус по остаткам в продуктах, полученных от продуктивных животных, чтобы убедиться в том, что органы, выдающие лицензии, могут получить адекватные гарантии в отношении безопасности потребителей. Данное требование значительно ограничивает выбор адъювантов и консервантов для использования у продуктивных животных.