 |
5.3. Эффективность. 5.3.1. PD50 тест. 5.3.2. PGP тест (защита от генерализованной инфекции нижних конечностей)
|
|
|
|
5. 3. Эффективность
Эффективность вакцины оценивают непосредственно у вакцинированных животных, определяя их сопротивляемость живым вирусам при контрольном заражении, или непрямым способом в условиях in vitro, используя общепринятые корреляции. Неточность измерений в тесте должна учитываться при интерпретации их значимости (Goris et al., 2008). Эффективность вакцины необходимо оценивать по отношению к каждому штамму, который разрешен для использования в вакцине.
Живые референтные вирусы ящура, соответствующие основным вирусным штаммам вакцины, используемым в регионе, доступны при определенных условиях в Референтных лабораториях МЭБ по ящуру в регионе, а также в национальных ветеринарных органах в стране. Такие референтные вирусы хранят при ультранизких температурах и отправляют в строгом соответствии с правилами перевозки.
Запас вируса для аликвотирования получают из поражений, по крайней мере, двух животных КРС возрастом старше 6 месяцев, которые были признаны свободными от антител вируса. Животным вводят транквилизатор, затем примерно в 20 участков языка внутрикожно вводят суспензию по 0, 1 мл на каждый участок. Везикулярную ткань языка или других органов и везикулярную жидкость собирают в пик появления поражений, приблизительно через 2 дня.
Собранную ткань мацерируют и готовят 2 % суспензию, которую фильтруют через 0, 2 мкл фильтр, аликвотируют и быстро замораживают в газообразной фазе жидкого азота; это образовывает запас контрольного вируса. Инфекционные титры данного запаса определяют как в культуре клеток (TCID50), так и у двух особей КРС (BID50). Двум КРС, которым предварительно ввели транквилизатор, делают внутрикожную инъекцию в язык десятикратными разведениями (1/10 через 1/10, 000), одним разведением в 4 места. Титрации КРС считывают спустя 2 дня. Обычно титры оказываются больше 106 TCID50 на 0, 1 мл и больше 105 BID50 на 0, 1 мл, их вычисляют, используя метод Спирмана-Карбера. Разведение для использования в контрольном заражении КРС составляет 10 000 BID50, объемом 2 х 0, 1 мл внутриязычной инъекции для тестов PD50 и PGP.
|
|
|
5. 3. 1. PD50 тест
Количество защитных доз в вакцине определяется по степени резистентности к живым вирусам контрольного заражения группы животных, получающих вакцину в разных объемах. Необходимо использовать КРС по крайней мере шестимесячного возраста, полученный из областей, свободных от вируса ящура, которые не были ранее вакцинированы против ящура и свободны от антител к вирусу ящура. Три группы, состоящие из не менее 5 особей КРС в каждой, должны быть вакцинированы рекомендованным производителем способом. Вакцинирование в каждой группе следует осуществлять в различных дозах, вводя различный объем вакцины. Например, если на этикетке написано, что 2 мл инъекции соответствует введению 1 дозы вакцины, ¼ дозы вакцины будет получена путем введения 0. 5 мл и 1/10 дозы будет получена путем введения 0. 2 мл. Этих и контрольных животных (двух невакцинированных животных) подвергают контрольному заражению суспензией бычьего вируса через 3 недели (водной) или через 4 недели (масляной) после вакцинации, которая крайне вирулентна и подходит типам вируса в исследуемой вакцине, инокулируя эквивалент объема в 10 000 BID50 (50% инфекционная доза КРС) внутрикожно в двух местах на верхней поверхности языка (0. 1 мл на место). Животные наблюдаются в течение 8 дней. У незащищенных животных поражения появляются на других участках, помимо языка. У контрольных животных поражения должны быть, по крайней мере, на трех конечностях. У защищенных животных в каждой группе высчитывается содержание PD50 в вакцине. Существует множество различных методов высчитывания PD50, но метод, основанный на методе Спирмана-Карбера (1931), обычно предпочтителен при интерпретации оценок PD50, высчитанных подобным способом. Вакцина должна содержать, по крайней мере, 3 PD50 в одной дозе для КРС).
|
|
|
5. 3. 2. PGP тест (защита от генерализованной инфекции нижних конечностей)
Для этого метода, группа из 16 сероотрицательных к вирусу ящура особей КРС в возрасте 18-24 месяцев, с одинаковыми характеристиками, описанными для теста на установление PD50, вакцинируются дозой КРС способом и объемом, рекомендованным производителем. Через 4 недели после вакцинации или позднее этих животных и группу контрольных животных, состоящих из двух невакцинированных животных, подвергают контрольному заражению суспензией бычьего вируса, которая крайне вирулентна и подходит типам
вируса в тестируемой вакцине, путем инокуляции объема, равного 10 000 BID50 (50% инфекционной дозы КРС), внутрикожно в два участка на верхней поверхности языка (0, 1 мл на один участок). Животных наблюдают 7-8 дней. У незащищенных животных поражения появляются на конечностях через 7 дней после инокуляции. У контрольных животных поражения должны быть, по крайней мере, на трех конечностях. При обычном профилактическом использовании вакцина должна защищать, по крайней мере, 12 животных из 16 вакцинированных. Этот тест не дает оценку того, как много защитных доз содержится в однократной дозе вакцины, но сравнение результатов двух тестов показывает, что 12 защищенных из 16 вакцинированных и зараженных животных коррелирует с показателем 3 PD50 (Vianna Filho et al., 1993).
|
|
|
