 |
3. Контроль в процессе производства
|
|
|
|
3. Контроль в процессе производства
Обычно титры вируса достигают оптимального уровня в период с 18 по 24 часа после инфицирования клеточной культуры, в зависимости от серотипа. Время, выбираемое для сбора культуры, может основываться на ряде анализов; например, гибель клеток. Концентрацию вируса можно определить с помощью теста на инфекционность, градиента плотности сахарозы или CsCI или серологических методов. Предпочтительно использовать более одного метода, поскольку они могут дополнять друг друга.
3. 1. Кинетика инактивации
Во время инактивации вируса, следует отбирать образцы через регулярные интервалы с целью мониторинга скорости и линейности процесса инактивации. Титры вируса в образцах определяют путем инокуляции культур клеток, признанных высоко чувствительными к вирусу ящура, например ВНК. Такие культуры позволяют проводить тестирование статистически значимых образцов в воспроизводимых условиях. Инфекционность log10 образцов, отобранных через равные интервалы, отображают на графике по отношению ко времени, и процедура инактивации не считается удовлетворительной до тех пор, пока, как минимум,
последняя часть наклонной части линии не будет линейной, а экстраполяция не будет указывать на то, что в конце периода инактивации на 104 литров жидкого препарата не будет менее одной инфекционной частицы.
3. 2. Контроль инактивации
Тест на безвредность - это тест, осуществляемый в процессе производства, который следует проводить для каждой партии антигенов. Клетки, используемые для тестирования на наличие остаточного живого вируса, должны подвергаться тестированию на чувствительность, чтобы продемонстрировать, что они пригодны для репликации вируса. После инактивации образец от каждой партии инактивированного антигена, представляющий собой, как минимум, 200 доз вакцинного антигена, следует протестировать на свободу от инфекционного вируса посредством инокуляции чувствительных монослойных клеточных культур, предпочтительно того же происхождения, что и таковые, используемые для производства антигенов. Возможно, для этого понадобиться произвести концентрирование антигенов, и в каждом случае должно быть продемонстрировано, что концентрированный материал не оказывает негативного влияния на чувствительность анализа и не мешает считыванию результатов анализа. Клеточные пласты обследуют ежедневно в течение 2-3 дней, после чего использованную среду переносят на свежие монослои, а в исходные монослои добавляют свежую среду. Используя этот метод, можно амплифицировать следовые количества живого вируса с помощью процедуры пассирования и обнаружить его на основании наблюдаемого ЦПД. В большинстве случаев проводят три пассажа исходного вирусного препарата. Вариантом данного метода является замораживание-оттаивание старых монослоев для высвобождения внутриклеточного вируса, который можно обнаружить посредством дальнейшего пассирования.
|
|
|
4. Исследования партии конечного продукта
4. 1. Исследование на безвредность
Инактивированный антиген в большом объеме и конечный сформулированный продукт следует подвергнуть исследованию на безвредность с целью демонстрации отсутствия инфекционного вируса. В конечном продукте антиген должен быть удален из адъюванта с помощью надлежащего валидированного метода. Образец, представляющий собой как минимум 200 доз вакцины (включая все формы продукта), должен быть использован для исследования на отсутствие инфекционного вируса посредством инокуляции чувствительных монослоев клеточной культуры. После извлечения антиген может быть сконцентрирован для инокуляции в клеточных монослоях. Процедура исследования описана в Разделе С. 3. 2 Контроль инактивации.
|
|
|
4. 2. Исследование на стерильность
Инактивированный антиген в большом объеме, концентрированный антиген и конечный сформулированный продукт должны пройти тестирование на стерильность. Руководство по методам и культурной среде, которые позволяют обнаружить широкий спектр организмов, описаны в Главе 1. 1. 9.
4. 3. Исследование на идентичность
Инактивированный антиген в большом объеме, концентрированный антиген и конечный сформулированный продукт должны пройти тестирование на идентичность для демонстрации наличия релевантных штаммов. Никакие другие серотипы вируса ящура, зарегистрированные для производственной площадки, не должны присутствовать в вакцине, что должно быть продемонстрировано с помощью соответствующих тестов, таких как серотип-специфичная ОТ-ПЦР.
4. 4. Исследование на чистоту
Чистота подразумевает уровень неструктурных белков ящура в конечном продукте, который не должен индуцировать антитела, которые препятствуют проведению серологических исследований, используемых для серологического надзора циркуляции вируса в вакцинированных популяциях. Продукты, заявленные как очищенные от неструктурных белков, должны продемонстрировать уровень очистки. В конечном продукте должно быть продемонстрировано отсутствие реактивности (см. Раздел С. 5 Требования к регистрации вакцины). В случаях, когда стабильность параметров очистки демонстрируется и утверждается в регистрационном досье, и процесс производства также утвержден в отношении стабильности параметров согласно стандартным требованиям, упоминающимся в Главе 1. 1. 8, Ветеринарные органы могут дать согласие не проводить это исследование для конечного продукта.
Чистоту вакцины можно подтвердить путем тестирования сыворотки, полученной от животных, вакцинированных, по крайней мере, дважды препаратами из одной серии, на отсутствие антител к неструктурным белкам.
|
|
|
