 |
3. Выбор вакцинных штаммов для установления соответствия
|
|
|
|
3. Выбор вакцинных штаммов для установления соответствия
Серотип вируса, регион происхождения и любые характеристики полевых изолятов, а также, в случае необходимости, характеристики вакцинного штамма, используемого в регионе происхождения, могут выступить основанием для подбора вакцинных штаммов при проведении теста на вакцинное соответствие. Доступность реагентов для исследования на соответствие определенным вакцинным штаммам может ограничить возможность исследования. Во избежание данной проблемы производителю вакцины следует предоставить, по запросу покупателя вакцины и референтных лабораторий МЭБ, сыворотки крови, полученные в период поствакцинации во время итогового тестирования партии продукта на иммуногенность. Референтным лабораториям МЭБ также рекомендовано обеспечить наличие эталонных сывороток периода поствакцинации, произведенных из релевантных вакцинных штаммов. Тесты на вакцинное соответствие выполняют две задачи. Во-первых, они выступают в качестве руководства при подборе
наиболее эффективного вакцинного штамма для использования в конкретных полевых условиях, для проведения рутинной профилактической вакцинации или для экстренной вакцинации, для которой требования к вакцинному соответствию не обязательно совпадают с требованиями к обычной вакцинации. Вторая цель применения указанных тестов - осуществлять на постоянной основе мониторинг пригодности вакцинных штаммов, хранящихся в стратегических резервах антигенов.
4. Тесты на вакцинное соответствие
Серологическое взаимодействие между полевым изолятом и вирусом вакцины (‘r’ значение) можно определить в реакции нейтрализации вируса, ИФА или РСК. Рекомендуется провести одностороннее тестирование (r1) с вакцинной антисывороткой, вместо двустороннего тестирования (r2), для которого также требуется исследование на соответствие антисыворотки полевому изоляту. Использование in-vitro нейтрализации является более подходящим способом для прогнозирования in-vivo защиты, вызванной вакциной, чем иные способы, основанные на взаимодействии вирус -антитела. Исходя из накопленного опыта лабораторных исследований, можно воспользоваться реакцией нейтрализации вируса с титрированием в шахматном порядке или по иной схеме. ИФА зависит от наличия захватывающих и детекторных антител, подходящих полевым штаммам, но ИФА отличается большей воспроизводимостью, чем РН, и ее можно проводить с инактивированным вирусом. В качестве скрининг-метода можно воспользоваться РСК для выбора штаммов, которые далее пройдут тестирование в РН и ИФА. Можно улучшить воспроизводимость результатов РН путем включения нескольких разведений вируса в тест, чтобы точно определить титр вируса с помощью логистической регрессии.
|
|
|
Для РН и ИФА поствакциональные сыворотки должны быть получены минимум от пяти голов КРС через 21-30 дней после вакцинации и 21-30 дней после бустерной вакцинации. Для каждой сыворотки устанавливается титр антител к вакцинному штамму. Сыворотки используют или по –отдельности или в пуле, предварительно исключив животных с низким иммунным ответом (Mattion et al., 2009).
4. 1. Взаимосвязь между полевым изолятом и вакцинным штаммом
В качестве стандартного теста рекомендована реакция нейтрализации. При наличии подходящих реагентов или в качестве скрининг-метода можно использовать ИФА. Наилучшим скрининг -методом является РСК, которую используют для отбора штаммов подлежащих тестированию в РН и ИФА.
4. 1. 1. Тест на вакцинное соответствие с помощью двумерной реакции нейтрализации (в шахматном порядке)
|
|
|
В данном исследовании используется антисыворотка, полученная против вакцинного штамма. Титры сыворотки против 100 ТЦД 50% гомологичного вакцинного штамма и такой же дозы полевого изолята сопоставляют для определения иммунологического покрытия вакцинным штаммом полевого вируса. Для тестирования каждые 100 мл смеси вирус/сыворотка содержит 100 ТЦД 50 тестируемого вируса.
а) Процедура тестирования
Процедура схожа с РН (см Раздел В 2. 1 Реакция вирус-нейтрализации)
К дополнительным биологическим реагентам относятся: моновалентная сыворотка КРС, полученная через 21-30 дней после вакцинации (инактивированная при температуре 56°С в течение 45-60 минут), гомологичный вакцинный штамм; исследуемый вирус, полевой изолят того же серотипа, что и вакцинный штамм.
i i. проводят пассаж полевых изолятов на культурах клеток до степени адаптации, вызывающей 100% ЦПД через 24 часа. Количество пассажей следует свести к минимуму. После адаптации необходимо определить титр вируса (log10 ТЦД50/мл) путем титрования до конечной точки.
i ii. для каждого теста и вакцинного вируса проводят титрование в шахматном порядке в отношении вируса и вакцинной сыворотки, а также обратное титрование вируса. Добавляют клетки и инкубируют при температуре 37°С в течение 48-72 часов после того, как ЦПД определен.
i iii. Титры антител вакцинной сыворотки против вакцинного штамма и полевого изолята для каждой используемой вирусной дозы рассчитывают с использованием метода Спирмана-Карбера. Титр вакцинной сыворотки против 100 ТЦД50 каждого вируса может быть определен методом регрессии. Взаимодействие между полевым изолятом и вакцинным штаммом впоследствии выражаются как ‘r’значение:
r1= обратный арифметический титр референтной сыворотки против полевого вируса
обратный арифметический титр референтной сыворотки против вакцинного вируса
� b) Интерпретация
Интерпретация результатов исследований на перекрестную реактивность: принято считать, что в случае реакции нейтрализации показатели r1 больше 0, 3 означают, что полевой изолят в большей степени подобен вакцинному штамму. Следовательно, использование вакцины на основе этого штамма с большой вероятностью вызовет защиту при контрольном заражении полевым изолятом. Однако защита зависит, как от перекрестной реактивности антител, выработанных на вакцину, так и от силы иммунного ответа. На силу иммунного ответа влияет иммуногенность вакцины и количество введенных доз.
|
|
|
При принятии решения об использовании или неиспользовании вакцин с показателем r1 ниже 0. 3, следует учитывать следующие факторы: наличие наиболее подходящих вакцинных штаммов, иммуногенность вакцины и возможность ее усиления, возможность использовать дополнительные бустерные дозы, возможности дополнения мер по борьбе с болезнью другими зоосанитарными мерами или зависимость борьбы от вакцинации. Совместное воздействие иммуногенности и вакцинного соответствия можно оценить на основе серологического титра вакцинной антисыворотки против полевого вируса, однако,
установление точной степени корреляции с уровнем защиты требует проведения исследования на перекрестную защиту.
В качестве альтернативы, подходящий полевой изолят может адаптироваться и стать новым вакцинным штаммом.
Всегда нужно проводить больше одного исследования. Точность значений ‘r’, обозначающих различия между штаммами, связана с количеством повторов исследований. На деле, рекомендуется проводить, по крайней мере, три повтора.
|
|
|
