 |
4.1.2. Установление вакцинного соответствия с помощью ожидаемого уровня защиты (ЕРР), установленного в одномерной реакции нейтрализации
|
|
|
|
4. 1. 2. Установление вакцинного соответствия с помощью ожидаемого уровня защиты (ЕРР), установленного в одномерной реакции нейтрализации
Установление вакцинного соответствия на основе ЕРР показателей широко применяется в Южной Америке, где в наличии есть корреляционные таблицы по вакцинным штаммам, используемым в регионе. В этом тесте используется антисыворотка против вакцинного штамма (первая и бустерная вакцинация). Чтобы оценить иммунологическое покрытие полевого вируса вакцинным штаммом, сравнивают титры сывороток против 100 ТЦД 50/100 мкл сывороточно-вирусных смесей гомологичного вакцинного штамма с такой же дозой полевого изолята.
а) Процедура тестирования
Процедура похожа на реакцию нейтрализации вируса (см Раздел В. 2. 1. Реакция вирус нейтрализации).
Дополнительные биологические реагенты: моновалентная сыворотка КРС, полученная через 21-30 дней после вакцинации и через 21-30 дней после бустерной вакцинации (инактивированная при температуре 56°С в течение 45-60 минут), гомологичный вакцинный штамм; исследуемый вирус, полевой изолят того же серотипа, что и вакцинный штамм. В регионах, где используют мультивалентные вакцины, рекомендуется применять панели сывороток, выращенные на основании вакцины, широко применяемой в программах вакцинации.
i i. проводят пассаж полевых изолятов на культурах клеток до степени адаптации, вызывающей 100% ЦПД через 24 часа. Количество пассажей следует свести к минимуму. После адаптации необходимо определить титр вируса (log10 ТЦД50/мл) путем титрования до конечной точки.
i ii. Для каждого теста и вакцинного вируса проводят титрование антител против фиксированного количества вируса (100 ТЦД 50 вируса/100 мкл смеси сыворотки/вирус), одновременно с обратным титрованием рабочего вируса. Обратное титрование смесей сыворотки/вирус и вируса проводят в условиях инкубации при 37º С в течение 60 минут, затем вводят на микропланшеты с предварительно отформованными клеточными монослоями. Каждую сыворотку вводят в 4 лунки, используют минимум 6 разведений сыворотки. Микропланшеты инкубируют при 37º С в течение 48 часов под воздействием СО2, после чего оценивают ЦПД.
|
|
|
i iii. Титры антител вакцинной сыворотки против вакцинного штамма и полевого изолята рассчитывают с использованием метода Спирмана-Карбера. Титр вакцинной сыворотки против 100 ТЦД50 каждого вируса можно рассчитать и
i выразить на мл. По заранее заданным корреляционным таблицам для каждого отдельного титра нейтрализации определяется отдельный показатель ЕРР, затем рассчитывают средний показатель ЕРР для каждой группы сывороток (вакцинированная и бустерная вакцинация). Иммунологическое покрытие вакцинного штамма выражается через показатель ЕРР.
� b) Интерпретация
i i) Интерпретация результатов:
Для интерпретации результатов необходимо установить корреляцию между тирами in vitro и in vivo защитой при контрольном заражении относительно 10000 BID50 вакцинного вируса. По опыту PANAFTOSA в реализации программ борьбы с ящуром в Южной Америке средний показатель ЕРР на уровне 75% у животных, прошедших бустерную вакцинацию, показывает, что вакцинный штамм подходит для использования в сочетании с надлежащими полевыми мерами по контролю вспышек с тестируемыми полевыми штаммами (корреляционные таблицы для О1 А24 и С3 могут быть предоставлены по запросу PANAFTOSA).
4. 1. 3. Установление вакцинного соответствия в ИФА
По аналогии рекомендуется воспользоваться ранее описанным в разделе В. 2. 3 жидкофазным блокирующим ИФА для установления вакцинного соответствия, рассчитывая показатель r1 и/или ЕРР.
|
|
|
а) Процедура исследования
Процедура похожа на реакцию нейтрализации вируса (см Раздел В. 2. 3 Жидкофазный блокирующий ИФА).
Дополнительные биологические реагенты: моновалентная сыворотка КРС, полученная через 21-30 дней после вакцинации и через 21-30 дней после бустерной вакцинации (инактивированная при температуре 56°С в течение 45-60 минут), гомологичный вакцинный штамм; исследуемый вирус, полевой изолят того же серотипа, что и вакцинный штамм. В регионах, где используют мультивалентные вакцины, рекомендуется применять панели сывороток, выращенные на основании вакцины, широко применяемой в программах вакцинации.
b) Интерпретация
i i) Интерпретация результатов r1
Было предложено, что в случае жидкофазного блокирующего ИФА показатели r1 больше 0, 4 означают, что полевой изолят в большей степени подобен вакцинному штамму. Следовательно, использование вакцины на основе этого штамма с большой вероятностью вызовет защиту при контрольном заражении полевым изолятом. Однако защита зависит, как от перекрестной реактивности антител, выработанных на вакцину, так и от силы иммунного ответа. На силу иммунного ответа влияет иммуногенность вакцины и количество введенных доз. При принятии решения об использовании или неиспользовании вакцин с показателем r1 ниже 0. 4, следует учитывать следующие факторы: наличие наиболее подходящих вакцинных штаммов, иммуногенность вакцины и
возможность усиления гетерологичных ответов, возможность использовать дополнительные бустерные дозы, возможности дополнения мер по борьбе с болезнью другими зоосанитарными мерами или зависимость борьбы от вакцинации.
i ii) Интерпретация результатов ЕРР
Для интерпретации результатов необходимо установить корреляцию между тирами in vitro и in vivo защитой при контрольном заражении относительно 10000 BID50 вакцинного вируса. По опыту PANAFTOSA в реализации программ борьбы с ящуром в Южной Америке средний показатель ЕРР на уровне 75% у животных, прошедших бустерную вакцинацию, показывает, что вакцинный штамм подходит для использования в сочетании с надлежащими полевыми мерами по контролю вспышек с тестируемыми полевыми штаммами (корреляционные таблицы для О1 А24 и С3 могут быть предоставлены по запросу PANAFTOSA).
|
|
|
